Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة RO1DC002756 المنح ومؤسسة البحوث بوردو. نشكر دوريس وو وتشانغ فيسه للحصول على المشورة مع التجارب ورودني ماكفيل للمساعدة في الأرقام.

وصفات فرخ قارعو الأجراس <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 7.2 ز </td><td> كلوريد الصوديوم </td></tr><tr><td> ز 0.23 </td><td> CaCl 2 + 2H 2 O </td></tr><tr><td> ز 0.37 </td><td> بوكل </td></tr><tr><td> 0،115 ز </td><td> غ هبو 2 4 </td></tr><tr><td> 900 مل </td><td> المياه (الصف ا?...

<ol>
	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. Bull. 60 (5-6), 423-423 (2003).</li><li>Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+conveys+semaphorin+and+VEGF+signaling+during+neural+and+cardiovascular+development.">Neuropilin-1 conveys semaphorin and VEGF signaling during neural and cardiovascular development.</a> Dev. Cell. 5 (1), 45-45 (2003).</li><li>Tessarollo, L., Coppola, V., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NT-3+replacement+with+brain-derived+neurotrophic+factor+redirects+vestibular+nerve+fibers+to+the+cochlea.">NT-3 replacement with brain-derived neurotrophic factor redirects vestibular nerve fibers to the cochlea.</a> J. Neurosci. 24 (10), 2575-2575 (2004).</li><li>Avila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+support+the+survival+and+neuritogenesis+response+of+developing+cochleovestibular+ganglion+neurons.">Brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 support the survival and neuritogenesis response of developing cochleovestibular ganglion neurons.</a> Dev. Biol. 159 (1), 266-266 (1993).</li><li>Bianchi, L. M., Cohan, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+neurotrophins+and+CNTF+on+developing+statoacoustic+neurons:+comparison+with+an+otocyst-derived+factor.">Effects of the neurotrophins and CNTF on developing statoacoustic neurons: comparison with an otocyst-derived factor.</a> Dev. Biol. 159 (1), 353-353 (1993).</li><li>Juurlink, B. e. r. n. h. a. r. d. H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Spinal+Somatic+Motoneurons+in+Culture.">Chick Spinal Somatic Motoneurons in Culture.</a> Protocols for Neural Cell Culture.. 59, (2001).</li><li>Fantetti, K. N., Zou, Y., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnts+and+Wnt+inhibitors+do+not+influence+axon+outgrowth+from+chicken+statoacoustic+ganglion+neurons.">Wnts and Wnt inhibitors do not influence axon outgrowth from chicken statoacoustic ganglion neurons.</a> Hear. Res. , (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-49 (1951).</li><li>Bourikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+commissural+axons+along+the+longitudinal+axis+of+the+spinal+cord.">Sonic hedgehog guides commissural axons along the longitudinal axis of the spinal cord.</a> Nat. Neurosci. 8 (3), 297-297 (2005).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2251 (2005).</li><li>Augsburger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs+as+mediators+of+roof+plate+repulsion+of+commissural+neurons.">BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons.</a> Neuron. 24 (1), 127-127 (1999).</li><li>Lyuksyutova, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

نقدم طريقة لتشريح والثقافة وE4 SAG E6 explants الحبل الشوكي ، من الحمص ، في ظل ظروف الأجواء الخالية من المصل. ويجري حاليا استخدام هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة الآثار المترتبة على مختلف يغاندس يفرز على بقاء الخلايا العصبية وثمرة neurite SAG. الرواية جوانب من هذا البروتوكول بما في...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق </td></tr><tr><td> معدات </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> تشريح المجهر </td><td></td><td></td><td> نستخدم M80 ايكا stereomicroscope مع brightfield قاعدة الإضاءة </td></tr><tr><td> الشريحة الأكثر دفئا </td><td> CS &amp; E. </td><td></td><td> الكولاجين البلمرة </td></tr><tr><td> بيضة دجاجة حاضنة </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37 درجة مئوية / 5 ٪ CO 2 ثقافة الخلية الحاضنة ترطيب </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> تشريح مواد </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> وSylgardنسخة ؛ المغلفة طبق بتري </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24 لوحة جيدا خلية ثقافة </td><td> كورنينج </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 دومون ملقط </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr><tr><td> # 55 دومون ملقط </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> الفولاذ المقاوم للصدأ المسامير تشريح </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 26002-10 </td><td> يعلق الجنين ، تشريح غرامة </td></tr><tr><td> موريا ملعقة مثقوبة </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 10370-17 </td><td> حصاد جنين / نقل </td></tr><tr><td> 200 ميكروليتر الماصة الفم واسعة نصائح </td><td> المؤتمر الوطني العراقي نقطة العلمية </td><td> 118 96R </td><td> نقل يزدرع </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E4 وبيض الدجاج E6 </td><td></td><td></td><td> &amp; ملاحظة :س ؛ </td></tr><tr><td> فرخ رينغر الحل </td><td></td><td></td><td> جنين الحصاد </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> سيغما </td><td> H8264 </td><td> تشريح SAG </td></tr><tr><td> L15 المتوسطة </td><td> سيغما </td><td> L5520 </td><td> الحبل الشوكي المتوسطة تشريح </td></tr><tr><td> الجنين مصل العجل </td><td> اتلانتا البيولوجية </td><td> S11150 </td><td> الحبل الشوكي المتوسطة تشريح </td></tr><tr><td> Vannas مقص </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> 501778 </td><td> الحبل الشوكي تشريح </td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> إعداد الكولاجين </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الفئران الذيل نوع الكولاجين أنا </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354249 </td><td> يزدرع الثقافة </td></tr><tr><td> 10X PBS (العقيمة) </td><td></td><td></td><td> لنويtralize الكولاجين </td></tr><tr><td> 1N هيدروكسيد الصوديوم (العقيمة) </td><td></td><td></td><td> لتحييد الكولاجين </td></tr><tr><td> الماء المقطر (العقيمة) </td><td></td><td></td><td> لتحييد الكولاجين </td></tr><tr><td> أوراق مؤشر الرقم الهيدروجيني (6،0-8،1) </td><td> Whatman </td><td> 2629-990 </td><td> لفحص درجة الحموضة الكولاجين </td></tr><tr><td> أنابيب مخروطية 15 مل </td><td> المؤتمر الوطني العراقي نقطة العلمية </td><td> 818 - PG </td><td></td></tr><tr><td> 500 ميكروليتر الماصة الفم واسعة نصائح </td><td> المؤتمر الوطني العراقي نقطة العلمية </td><td> 119 - R100 </td><td> لالكولاجين الماصة </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> يزدرع الثقافة </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 المتوسطة </td><td> سيغما </td><td> D8437 </td><td> يزدرع مستنبت </td></tr><tr><td> ITS +1 </td><td> سيغما </td><td> I2521 </td><td> تكملة المتوسطة </tد&gt; </tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> تكملة المتوسطة </td></tr><tr><td> CNTF (الجرذان) </td><td> سيغما </td><td> C3835 </td><td> تكملة المتوسطة </td></tr><tr><td> NT - 3 (الإنسان) </td><td> سيغما </td><td> N1905 </td><td> تكملة المتوسطة </td></tr><tr><td> تنقية الماوس Wnt5a </td><td> R &amp; D أنظمة </td><td> 645 WN - 010 </td><td></td></tr><tr><td> افى جل الخرز الأزرق هلام </td><td> بيو راد </td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> المناعية </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> سيغما </td><td> P6148 </td><td> تثبيت </td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني </td><td></td><td></td><td> يشطف </td></tr><tr><td> تريتون X - 100 </td><td> سيغما </td><td> T9284 </td><td> حظر حل </td></tr><tr><td> صوديومآزيد </td><td> سيغما </td><td> S8032 </td><td> حظر حل </td></tr><tr><td> مصل العجل </td><td> Invitrogen </td><td> 16170-078 </td><td> حظر حل </td></tr><tr><td> الفأر وحيدة النسيلة المضادة للIgG2b β تويولين الضد الثاني 1 + </td><td> سيغما </td><td> T8535 </td><td> أجسام الخلايا التسميات وneurites </td></tr><tr><td> ثر اليكسا 488 الماعز المضادة للجسم الفأر ب IgG2 </td><td> Invitrogen </td><td> A21141 </td><td> بالكشف عن الأجسام المضادة β تويولين </td></tr><tr><td> ملعقة صغيرة تفلون </td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td> الإفراج عن المواد الهلامية الكولاجين بشكل جيد </td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

ومعصب الأجهزة الحسية في الأذن الداخلية الدجاج من العمليات المحيطية من العقدة statoacoustic (SAG) الخلايا العصبية. تعصيب الجهاز الحسي يعتمد على مزيج من العظة التوجيه محوار 1 و 2 بقاء العوامل تقع على طول مسار المحاوير المتزايد و / أو ضمن أهدافها الجهاز الحسي. على سبيل المثال ، ولدت مع وظيفية تدخل طريقا محوار توجيه الإشارات الكلاسيكية ، semaphorin - neuropilin ، misrouting من المحاور أذني 3. أيضا ، أعرب العديد من عوامل النمو في الأهداف الحسية في الأذن الداخلية ، بما في ذلك Neurotrophin - 3 (NT - 3) وعامل التغذية العصبية الدماغي المشتقة (BDNF) ، وقد تم التلاعب في الحيوانات المعدلة وراثيا ، مما أدى مرة أخرى إلى misrouting من المحاور SAG 4. هذه الجزيئات نفسه يعزز بقاء ونمو الخلايا العصبية neurite SAG الفرخ 5،6 في المختبر. هنا ، نحن وصف وشرح الطريقة في المختبر ونحن حاليا شالغناء لاختبار مدى استجابة neurites SAG فرخ لبروتينات قابلة للذوبان ، بما في ذلك morphogens المعروفة مثل Wnts ، فضلا عن عوامل النمو التي تعتبر مهمة لتعزيز SAG ثمرة neurite وبقاء الخلايا العصبية. باستخدام هذا النظام النموذجي ، ونأمل في استخلاص استنتاجات بشأن الآثار التي يمكن أن يفرز يغاندس تمارس على بقاء الخلايا العصبية وثمرة neurite SAG. يتم تشريح explants SAG يوم الجنينية 4 (E4) والمثقف في المواد الهلامية الكولاجين ثلاثي الأبعاد تحت ظروف خالية من المصل لمدة 24 ساعة. أولا ، يتم اختبار الاستجابة من جانب neurite explants زراعة المتوسطة البروتين تستكمل. ثم لنتساءل عما إذا كانت مصادر نقطة يغاندس يمكن أن يفرز تأثيرات على الاتجاه ثمرة neurite ، وشارك في explants مثقف مع بروتين المغلفة الخرز ويعاير لقدرة حبة لتعزيز محليا أو تحول دون ثمرة. نحن تشمل أيضا مظاهرة للتشريح (تعديل بروتوكول 7) وثقافة E6 explants الحبل الشوكي. نحنتستخدم بشكل روتيني explants النخاع الشوكي للتأكد من النشاط الحيوي للبروتينات والخرز البروتين غارقة ، والتحقق من الأنواع عبر التفاعل مع أنسجة الفرخ ، في ظل الظروف نفس ثقافة explants SAG. هذه المقايسات في المختبر لفحص مريحة بسرعة عن الجزيئات التي تمارس التغذية (بقاء) أو مدار (الاتجاه) التأثيرات على الخلايا العصبية SAG ، وخصوصا قبل تنفيذ الدراسات في الجسم الحي. وعلاوة على ذلك ، وهذه الطريقة تسمح للاختبار الجزيئات الفردية بموجب المصل خالية من الشروط ، مع بقاء الخلايا العصبية ارتفاع 8.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

نحن لشرح كيفية تشريح والثقافة الفرخ E4 العقدة statoacoustic E6 explants والحبل الشوكي. تستزرع Explants المصل تحت ظروف الأجواء الخالية من المواد الهلامية في الكولاجين 3D لمدة 24 ساعة. يتم اختبار Neurite الاستجابة مع النمو المتوسط ​​عامل وتستكمل مع بروتين المغلفة الخرز.

تشريح العقدة والثقافة والفرخ Statoacoustic Explants النخاع الشوكي في الهلام الكولاجين لفحوصات ثمرة Neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

وحدة للسيارات وظيفية في صحن الثقافة: شارك في ثقافة Explants النخاع الشوكي وخلايا العضلات

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

تشريح والثقافة من الدوبامين والفأر Explants العقدة المخططة في ثلاثي الأبعاد فحوصات مصفوفة الكولاجين

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

الدجاج الأجنة شريحة الحبل الشوكي الثقافة البروتوكول

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

تشريح والتركيب الجانبي من اسماك الزرد الأجنة: تحليل التنمية الحبل الشوكي

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

إصابة الحبل الشوكي الكامل وبروتوكول تشريح الدماغ لاحقا Wholemount<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين في اليرقات البحر الجلكى

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA تسلسل تحليل التفاضلية التعبير الجيني في Electroporated الفرخ الجنينية الحبل الشوكي

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

إجراء لغرس الدائرة العمود الفقري للالطولية<em&gt; في فيفو</em&gt; التصوير من الحبل الشوكي ماوس

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

الحبل الشوكي العصبونات العزلة والثقافة من الفئران حديثي الولادة

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

التسليم داخل الشرايين للخلايا الجذعية العصبية إلى الدماغ الفئران والفأر: تطبيق على الإقفاري الدماغي

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...