Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות גרנט RO1DC002756 ואת המחקר Purdue קרן. אנו מודים דוריס וו צ&#39;אנג ויזה לייעוץ עם ניסויים רודני McPhail לעזרה עם דמויות.

מתכונים צ&#39;יק האצבעות <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 7.2 גרם </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0.23 גר &#39; </td><td> CaCl 2 + 2H 2 O </td></tr><tr><td> 0.37 גר &#39; </td><td> KCl </td></tr><tr><td> 0.115 גרם </td><td> Na 2 HPO 4 </td></tr><tr><td> 900 מ&quot;ל </td><td> מים (תרבות כ...

<ol>
	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. Bull. 60 (5-6), 423-423 (2003).</li><li>Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+conveys+semaphorin+and+VEGF+signaling+during+neural+and+cardiovascular+development.">Neuropilin-1 conveys semaphorin and VEGF signaling during neural and cardiovascular development.</a> Dev. Cell. 5 (1), 45-45 (2003).</li><li>Tessarollo, L., Coppola, V., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NT-3+replacement+with+brain-derived+neurotrophic+factor+redirects+vestibular+nerve+fibers+to+the+cochlea.">NT-3 replacement with brain-derived neurotrophic factor redirects vestibular nerve fibers to the cochlea.</a> J. Neurosci. 24 (10), 2575-2575 (2004).</li><li>Avila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+support+the+survival+and+neuritogenesis+response+of+developing+cochleovestibular+ganglion+neurons.">Brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 support the survival and neuritogenesis response of developing cochleovestibular ganglion neurons.</a> Dev. Biol. 159 (1), 266-266 (1993).</li><li>Bianchi, L. M., Cohan, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+neurotrophins+and+CNTF+on+developing+statoacoustic+neurons:+comparison+with+an+otocyst-derived+factor.">Effects of the neurotrophins and CNTF on developing statoacoustic neurons: comparison with an otocyst-derived factor.</a> Dev. Biol. 159 (1), 353-353 (1993).</li><li>Juurlink, B. e. r. n. h. a. r. d. H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Spinal+Somatic+Motoneurons+in+Culture.">Chick Spinal Somatic Motoneurons in Culture.</a> Protocols for Neural Cell Culture.. 59, (2001).</li><li>Fantetti, K. N., Zou, Y., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnts+and+Wnt+inhibitors+do+not+influence+axon+outgrowth+from+chicken+statoacoustic+ganglion+neurons.">Wnts and Wnt inhibitors do not influence axon outgrowth from chicken statoacoustic ganglion neurons.</a> Hear. Res. , (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-49 (1951).</li><li>Bourikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+commissural+axons+along+the+longitudinal+axis+of+the+spinal+cord.">Sonic hedgehog guides commissural axons along the longitudinal axis of the spinal cord.</a> Nat. Neurosci. 8 (3), 297-297 (2005).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2251 (2005).</li><li>Augsburger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs+as+mediators+of+roof+plate+repulsion+of+commissural+neurons.">BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons.</a> Neuron. 24 (1), 127-127 (1999).</li><li>Lyuksyutova, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

אנו מציגים שיטה לנתח ותרבות SAG E4 ו E6 explants חוט השדרה, מן חומוס, תחת בסרום ללא תנאים. הליך זה משמש כיום במעבדה שלנו כדי לחקור את ההשפעות של ligands שונים המופרשים על ההישרדות SAG נוירון ו תולדה neurite. היבטים רומן של פרוטוקול זה כולל את השימוש במערכת בסרום חופשי עבור explants culturing וש?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערה </td></tr><tr><td> ציוד </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissection מיקרוסקופ </td><td></td><td></td><td> אנו משתמשים stereomicroscope M80 לייקה עם brightfield בסיס תאורה </td></tr><tr><td> Slide חם </td><td> CS &amp; E. </td><td></td><td> קולגן פילמור </td></tr><tr><td> עוף ביצה החממה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37 ° C / 5% CO 2 humidified תא תרבות חממה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> חומרים Dissection </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgard &amp;העתק: מצופה צלחת פטרי </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24 גם תרבית תאים בצלחת </td><td> קורנינג </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 דומון מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr><tr><td> # 55 דומון מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> נירוסטה סיכות פלדה לנתח </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 26002-10 </td><td> העובר מצמיד, דיסקציה בסדר </td></tr><tr><td> מוריה כף מחוררת </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 10370-17 </td><td> העובר הקציר / העברה </td></tr><tr><td> 200 μl רחב pipet הפה טיפים </td><td> דוט מדעי Inc </td><td> 118-96R </td><td> Explant להעביר </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E4 עוף וביצים E6 </td><td></td><td></td><td> &amp; Nbsp; </td></tr><tr><td> צ&#39;יק Ringer של פתרון </td><td></td><td></td><td> העובר קציר </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> סיגמא </td><td> H8264 </td><td> SAG לנתיחה </td></tr><tr><td> L15 בינוני </td><td> סיגמא </td><td> L5520 </td><td> חוט השדרה לנתיחה בינוני </td></tr><tr><td> עגל עוברית בסרום </td><td> אטלנטה הביולוגיים </td><td> S11150 </td><td> חוט השדרה לנתיחה בינוני </td></tr><tr><td> Vannas מספריים </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> 501778 </td><td> חוט השדרה לנתיחה </td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> קולגן הכנה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rat-tail סוג קולגן אני </td><td> BD Biosciences </td><td> 354249 </td><td> Explant תרבות </td></tr><tr><td> 10X PBS (סטרילי) </td><td></td><td></td><td> כדי Neutralize קולגן </td></tr><tr><td> 1N NaOH (סטרילי) </td><td></td><td></td><td> כדי לנטרל קולגן </td></tr><tr><td> מים מזוקקים (סטרילי) </td><td></td><td></td><td> כדי לנטרל קולגן </td></tr><tr><td> אינדיקטור pH ניירות (6.0-8.1) </td><td> Whatman </td><td> 2629-990 </td><td> כדי לבדוק את רמת החומציות קולגן </td></tr><tr><td> 15 צינורות חרוטי מ&quot;ל </td><td> דוט מדעי Inc </td><td> 818-PG </td><td></td></tr><tr><td> 500 μl רחב pipet הפה טיפים </td><td> דוט מדעי Inc </td><td> 119-R100 </td><td> כדי קולגן pipet </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Explant תרבות </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 בינוני </td><td> סיגמא </td><td> D8437 </td><td> Explant בינוני תרבות </td></tr><tr><td> ITS 1 </td><td> סיגמא </td><td> I2521 </td><td> בינוני תוספת </tד&gt; </tr><tr><td> פניצילין, סטרפטומיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> בינוני תוספת </td></tr><tr><td> CNTF (חולדה) </td><td> סיגמא </td><td> C3835 </td><td> בינוני תוספת </td></tr><tr><td> NT-3 (אדם) </td><td> סיגמא </td><td> N1905 </td><td> בינוני תוספת </td></tr><tr><td> מטוהרים עכבר Wnt5a </td><td> R &amp; D מערכות </td><td> WN-645-010 </td><td></td></tr><tr><td> Affi ג&#39;ל כחול חרוזי ג&#39;ל </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> אימונוהיסטוכימיה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> סיגמא </td><td> P6148 </td><td> קיבוע </td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> שטיפות </td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> סיגמא </td><td> T9284 </td><td> חסימת פתרון </td></tr><tr><td> נתרןאזיד </td><td> סיגמא </td><td> S8032 </td><td> חסימת פתרון </td></tr><tr><td> עגל בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 16170-078 </td><td> חסימת פתרון </td></tr><tr><td> עכבר IgG2b חד שבטיים אנטי β טובולין 1 + II נוגדן </td><td> סיגמא </td><td> T8535 </td><td> תוויות תא גופים neurites </td></tr><tr><td> אלקסה פלואוריד 488 אנטי עכבר עז נוגדן IgG2 ב </td><td> Invitrogen </td><td> A21141 </td><td> זיהוי הנוגדן טובולין β </td></tr><tr><td> טפלון מרית מיקרו </td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td> שחרור ג&#39;ל קולגן מ היטב </td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

איברי חושים של האוזן הפנימית עוף מעוצבבים על ידי תהליכים של הפריפריה הגנגליון (SAG) נוירונים statoacoustic. עצבוב איבר חושי תלוי בשילוב רמזים של האקסון הדרכה 1 וגורמים הישרדות 2 הממוקמים לאורך מסלול של האקסונים לגדול ו / או מטרות בתוך החושית שלהם איברים. לדוגמה, הפרעה תפקודית עם מסלול הדרכה קלאסי האקסון איתות, semaphorin-neuropilin, שנוצר misrouting של אקסונים otic 3. כמו כן, גורמי גדילה אחדים לידי ביטוי את יעדי חושית של האוזן הפנימית, לרבות Neurotrophin-3 (NT-3) ו neurotrophic נגזר המוח פקטור (BDNF), הופעלו חיות טרנסגניות, שוב מובילה misrouting של אקסונים SAG 4. אלו מולקולות לקדם אותו בשתי הישרדות neurite תולדה של נוירונים SAG חומוס במבחנה 5,6. כאן, אנו לתאר ולהדגים את שיטת במבחנה אנחנו כרגע uלשיר על מנת לבחון את ההיענות של neurites חומוס SAG חלבונים מסיסים, כולל morphogens ידוע כגון Wnts, כמו גם גורמי גדילה חשובים לקידום neurite SAG תולדה והישרדות נוירון. באמצעות מערכת זו המודל, אנו מקווים להסיק מסקנות לגבי ההשפעות כי ligands המופרש יכול להפעיל על ההישרדות SAG נוירון ו תולדה neurite. Explants SAG הם גזור ביום עובריים 4 (E4) תרבותי תלת ממדי ג&#39;ל סרום קולגן תחת ללא תנאי למשך 24 שעות. ראשית, ההיענות neurite הוא נבדק על ידי explants culturing עם בינוני בתוספת חלבון. לאחר מכן, כדי לשאול אם מקורות נקודת ligands מופרש יכולה להיות השפעה על כיווני תולדה neurite, explants הם שיתוף תרבותי עם חלבון מצופים חרוזים assayed על היכולת של חרוז כדי לקדם או לעכב מקומית תוצאה. אנו כוללים גם הפגנה של דיסקציה (שינה פרוטוקול 7) והתרבות של E6 explants חוט השדרה. אנומשתמשים באופן שגרתי explants חוט השדרה על מנת לאשר bioactivity של חלבונים חלבון ספוג חרוזים, ולוודא מינים תגובתיות צולבת עם רקמה חומוס, בתנאים תרבות כמו explants SAG. אלה מבחני חוץ גופית הם נוח במהירות ההקרנה של מולקולות מפעילים trophic (הישרדות) או טרופי (כיווני) ההשפעות על נוירונים SAG, במיוחד לפני ביצוע מחקרי in vivo. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת בדיקה של מולקולות בודדות תחת בסרום ללא תנאים, עם הישרדות נוירון גבוהה 8.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

אנו מדגימים כיצד לנתח ותרבות חומוס הגנגליון E4 statoacoustic ו E6 explants חוט השדרה. Explants הם תרבותי תחת בסרום ללא תנאים ג&#39;ל קולגן 3D עבור 24 שעות. ההיענות Neurite נבדק עם המדיום גורם הגדילה, שיושלם עם חלבון מצופים חרוזים.

Dissection והתרבות של גנגליון צ&#39;יק Statoacoustic Explants ואת חוט השדרה ג&#39;ל קולגן עבור מבחני תוצאה Neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

יחידת מנוע פונקציונלית בצלחת תרבות: עמית תרבות Explants חוט השדרה לתאי השריר

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

דיסקציה והתרבות של עכבר דופאמין ו Explants Striatal ב תלת ממדי מבחני מטריקס קולגן

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

פרוטוקול עוף עובר חוט שדרת Slice תרבות

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

נתיחה והרכבה לרוחב של עוברי דג הזברה: ניתוח התפתחות חוט השדרה

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

חוט השדרה מלא פגיעה ומוח Dissection פרוטוקול Wholemount לאחר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בזחל ים צמד ים

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA-Seq ניתוח של ביטוי הגנים בדיפרנציאל חוט השדרה Electroporated אפרוח עוברי

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

נוהל השתלה קאמרי בעמוד השדרה לאורך<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של כבל עכבר השדרה

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

נוירונים חוט השדרה בידוד ותרבות מ עכברים ניאונטליים

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...