Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
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この作品は、健康グラントRO1DC002756とパデュー研究財団の国民の協会によって資金を供給された。我々は、実験と数値のヘルプについてはロドニーのマクフェイルとのアドバイスをドリス呉とWieseのチャンに感謝する。

レシピチックリンガー<table border="1"><tbody><tr><td> 7.2グラム</td><td> NaClを</td></tr><tr><td> 0.23グラム</td><td>のCaCl 2 + 2H 2 O </td></tr><tr><td> 0.37グラム</td><td>塩化カリウム</td></tr><tr><td> 0.115グラム</td><td>のNa 2 HPO 4 </td></tr><tr><td> 900ミリリットル</td><td>水（組織培養グレード） </td></tr></tbody></table>注意：7.4にpHを調整する。水で1000mlに?...

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	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. Bull. 60 (5-6), 423-423 (2003).</li><li>Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+conveys+semaphorin+and+VEGF+signaling+during+neural+and+cardiovascular+development.">Neuropilin-1 conveys semaphorin and VEGF signaling during neural and cardiovascular development.</a> Dev. Cell. 5 (1), 45-45 (2003).</li><li>Tessarollo, L., Coppola, V., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NT-3+replacement+with+brain-derived+neurotrophic+factor+redirects+vestibular+nerve+fibers+to+the+cochlea.">NT-3 replacement with brain-derived neurotrophic factor redirects vestibular nerve fibers to the cochlea.</a> J. Neurosci. 24 (10), 2575-2575 (2004).</li><li>Avila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+support+the+survival+and+neuritogenesis+response+of+developing+cochleovestibular+ganglion+neurons.">Brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 support the survival and neuritogenesis response of developing cochleovestibular ganglion neurons.</a> Dev. Biol. 159 (1), 266-266 (1993).</li><li>Bianchi, L. M., Cohan, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+neurotrophins+and+CNTF+on+developing+statoacoustic+neurons:+comparison+with+an+otocyst-derived+factor.">Effects of the neurotrophins and CNTF on developing statoacoustic neurons: comparison with an otocyst-derived factor.</a> Dev. Biol. 159 (1), 353-353 (1993).</li><li>Juurlink, B. e. r. n. h. a. r. d. H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Spinal+Somatic+Motoneurons+in+Culture.">Chick Spinal Somatic Motoneurons in Culture.</a> Protocols for Neural Cell Culture.. 59, (2001).</li><li>Fantetti, K. N., Zou, Y., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnts+and+Wnt+inhibitors+do+not+influence+axon+outgrowth+from+chicken+statoacoustic+ganglion+neurons.">Wnts and Wnt inhibitors do not influence axon outgrowth from chicken statoacoustic ganglion neurons.</a> Hear. Res. , (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-49 (1951).</li><li>Bourikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+commissural+axons+along+the+longitudinal+axis+of+the+spinal+cord.">Sonic hedgehog guides commissural axons along the longitudinal axis of the spinal cord.</a> Nat. Neurosci. 8 (3), 297-297 (2005).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2251 (2005).</li><li>Augsburger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs+as+mediators+of+roof+plate+repulsion+of+commissural+neurons.">BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons.</a> Neuron. 24 (1), 127-127 (1999).</li><li>Lyuksyutova, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

我々は、無血清の条件下で、ひよこから、E4のSAGとE6脊髄の外植片を細かく分析し、文化に方法を提示する。このプロシージャは、現在SAGのニューロンの生存と神経突起伸長に対する様々な分泌配位子の効果を研究する私たちのラボで使用されています。このプロトコルの小説の側面は、培養の外植片とSAGの神経突起伸長への影響を研究する成長因子を染み込ませたビーズの使用のための無血...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 機器の </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td></td><td></td><td>我々は、明視野、ベース照明とライカM80実体顕微鏡を使用してください</td></tr><tr><td>ウォーマーをスライドさせ</td><td> CS＆E. </td><td></td><td>コラーゲン重合</td></tr><tr><td>鶏の卵のインキュベーター</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37℃/ 5％CO 2の加湿インキュベーター</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 解剖の材料 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgard＆コピー、コーティングされたペトリ皿</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24ウェル細胞培養プレート</td><td>コー​​ニング</td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> ＃5デュモン鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252〜30 </td><td></td></tr><tr><td> ＃55デュモン鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11295〜51 </td><td></td></tr><tr><td>ステンレス製解剖用ピン</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26002〜10 </td><td>胚ピニング、細かい解剖</td></tr><tr><td>モリア穴あきスプーン</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10370〜17 </td><td>胚の収穫/転送</td></tr><tr><td> 200μlの広口ピペットチップ</td><td>ドットサイエンティフィック株式会社</td><td> 118 - 96R </td><td>外植片の転送</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E4とE6の鶏の卵</td><td></td><td></td><td> ＆nbのSP; </td></tr><tr><td>チックリンゲル液</td><td></td><td></td><td>胚の収穫</td></tr><tr><td> HBSS </td><td>シグマ</td><td> H8264 </td><td>解剖のサグ</td></tr><tr><td> L15培地</td><td>シグマ</td><td> L5520 </td><td>脊髄解剖媒体</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>アトランタバイオ</td><td> S11150 </td><td>脊髄解剖媒体</td></tr><tr><td> Vannasはさみ</td><td>世界の精密機器</td><td> 501778 </td><td>脊髄の解剖</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> コラーゲン製剤 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ラットテールコラーゲンタイプI </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 354249 </td><td>移植片培養</td></tr><tr><td> 10 × PBS（滅菌） </td><td></td><td></td><td>ノイへコラーゲンをtralize </td></tr><tr><td> 1NのNaOH（滅菌） </td><td></td><td></td><td>コラーゲンを中和する</td></tr><tr><td>蒸留水（滅菌） </td><td></td><td></td><td>コラーゲンを中和する</td></tr><tr><td> pH指示薬の論文（6.0〜8.1） </td><td>ワットマン紙</td><td> 2629-990 </td><td>コラーゲンのpHを確認するには</td></tr><tr><td> 15 mlコニカルチューブ</td><td>ドットサイエンティフィック株式会社</td><td> 818 - PG </td><td></td></tr><tr><td> 500μlの広口ピペットチップ</td><td>ドットサイエンティフィック株式会社</td><td> 119 - R100 </td><td>ピペットのコラーゲンへ</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 移植片培養 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12培地</td><td>シグマ</td><td> D8437 </td><td>移植片培養の培地</td></tr><tr><td>その1 </td><td>シグマ</td><td> I2521 </td><td>培地サプリメント</tD&gt; </tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td>インビトロジェン</td><td> 15140-122 </td><td>培地サプリメント</td></tr><tr><td> CNTF（ラット） </td><td>シグマ</td><td> C3835 </td><td>培地サプリメント</td></tr><tr><td> NT - 3（ヒト） </td><td>シグマ</td><td> N1905 </td><td>培地サプリメント</td></tr><tr><td>精製マウスWnt5a </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 645 - WN - 010 </td><td></td></tr><tr><td>アッフィ - ゲルブルーゲルビーズ</td><td> Bio - Rad社</td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 免疫組織化学 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ</td><td> P6148 </td><td>固定</td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td>リンス</td></tr><tr><td>トリトンX - 100 </td><td>シグマ</td><td> T9284 </td><td>ブロッキング溶液</td></tr><tr><td>ナトリウムアジド</td><td>シグマ</td><td> S8032 </td><td>ブロッキング溶液</td></tr><tr><td>子牛血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 16170-078 </td><td>ブロッキング溶液</td></tr><tr><td>マウスモノクローナルIgG2b抗βチューブリン1 + II抗体</td><td>シグマ</td><td> T8535 </td><td>ラベルの細胞体および神経突起</td></tr><tr><td>のAlexa Fluor ® 488ヤギ抗マウスIgG2のBの抗体</td><td>インビトロジェン</td><td> A21141 </td><td> βチューブリン抗体を検出</td></tr><tr><td>テフロンマイクロスパチュラ</td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td>ウェルからリリースコラーゲンゲル</td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

鶏内耳の感覚器官はstatoacoustic神経節（SAG）ニューロンの末梢プロセスによって神経支配されています。感覚器官の神経支配は成長している軸索および/ ​​またはそれらの感覚器官のターゲット内での軌道に沿って位置する軸索ガイダンスの手がかり1と生存因子2の組み合わせによって異なります。例えば、古典的な軸索 ​​ガイダンスシグナル伝達経路、セマフォリン-ニューロピリン、との機能的な干渉が耳軸索の3の経路変更を生成。また、ニューロトロフィン-3（NT - 3）と脳由来神経栄養因子（BDNF）を含む、内耳の感覚目標で表現されるいくつかの増殖因子は、、再びSAGの軸索4の経路変更につながる、トランスジェニック動物で操作されている。これらの同じ分子は 、in vitro 5,6 でひよこのSAGの神経細胞の生存と神経突起伸長の両方を促進する。 ここで、我々は現在、Uなのin vitroの方法を説明し、実証既知のようなWntsなどのモルフォゲンだけでなく、SAGの神経突起伸長と神経細胞の生存を促進するための重要な成長因子を含む可溶性タンパク質、にひよこのSAGの神経突起の応答性をテストするために歌う。このモデルシステムを使用して、我々は、分泌配位子は、SAGのニューロンの生存と神経突起伸長に及ぼすことができる効果について結論を出すと思っています。 SAGの外植片は、胎生4（E4）で解剖し、24時間無血清条件下での三次元コラーゲンゲル内で培養されています。最初に、神経突起の応答性は、タンパク質含有培地で培養外植片によってテストされます。その後、分泌される配位子の点源が神経突起伸長に対する指向性の影響を持つことができるかどうか尋ねるために、外植片は、タンパク質でコーティングされたビーズと共培養し、局所的に伸長を促進または抑制するためにビーズの能力についてアッセイされています。我々はまた、E6脊髄の外植片の解剖のデモ（プロトコル7を変更）し、文化が含まれています。我々は日常的にタンパク質とタンパク質に浸したビーズの生物活性を確認するために、脊髄の外植片を使用し、SAGの外植片と同一の培養条件下で、ニワトリ組織で種の交差反応性を確認する。 in vitroアッセイこれらは、特にin vivoでの研究を実行する前に、迅速にSAGの神経細胞に栄養（生存）または熱帯（方向性）効果を発揮する分子をスクリーニングするのに便利です。また、この方法は高いニューロンの生存8で、無血清条件下での個々の分子のテストが可能。

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Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

我々はニワトリE4 statoacoustic神経節とE6脊髄の外植片を細かく分析し、文化に方法を示しています。外植片は、24時間3Dコラーゲンゲル中での無血清条件下で培養される。神経突起の応答性は、成長因子添加培地および蛋白質でコーティングされたビーズを使用してテストされています。

神経突起伸長アッセイのためのコラーゲンゲルのチックStatoacousticガングリオンと脊髄の外植片の解剖と文化

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

胚の脊髄から交連ニューロンの解剖と文化

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

培養皿内の機能モーターユニット：脊髄外植片と筋細胞の共培養

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

三次元コラーゲンマトリックスアッセイにおけるマウスのドーパミンと線条体片の解剖と文化

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

ニワトリ胚脊髄スライス培養プロトコル

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

解剖やゼブラフィッシュ胚の横方向の取付：脊髄発達の解析

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

その後のホールマウントのための完全な脊髄損傷や脳解剖プロトコル<em&gt;その場で</em&gt;幼虫海ヤツメウナギにおけるハイブリダイゼーション

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

エレクトロポひよこ胚脊髄における遺伝子発現差のRNA-配列解析

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

縦断のために脊髄商工を移植するための手順<em&gt;インビボ</emマウス脊髄の&gt;イメージング

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

新生児マウスからの脊髄ニューロンの単離と培養

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

ラットおよびマウス脳への神経幹細胞の動脈内デリバリー:脳虚血への応用

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...