Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
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이 작품은 건강 그랜트 RO1DC002756 국립 연구소와 Purdue 학술 진흥 재단에 의해 투자되었다. 우리는 실험과 수치과 관련하여 도움이 로드니의 McPhail와 조언 도리스 우와 Wiese 장 감사드립니다.

요리법 칙 Ringers <table border="1"><tbody><tr><td> 7.2 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0.23 g </td><td> CaCl 2 + 2 시간 2 O </td></tr><tr><td> 0.37 g </td><td> KCl </td></tr><tr><td> 0.115 g </td><td> 나이 HPO 4 </td></tr><tr><td> 900 ML </td><td> 물 (조직 문화 학년) </td></tr></tbody></table> 참고 : 7.4로 산도를 조정합니다. 물로 1,000 ML에 최종 볼륨을 가져와. <p class="jove_st...

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	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. 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I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

우리는 혈청이없는 조건에서, 병아리의, 문화 E4의 SAG와 E6 척수의 explants을 해부하다하고 방법을 제시한다. 이 절차는 현재 SAG의 신경 세포의 생존과 neurite의 파생물에 대한 다양한 분비 리간드의 효과를 연구하기 위해 연구실에서 사용됩니다. 이 프로토콜의 소설 측면 culturing의 explants와 SAG의 neurite의 파생물에 대한 효과를 연구하기 위해 성장 요인에 배어 구슬의 사용을위한 혈청없는 시스템의 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td> 장비 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td></td><td></td><td> 우리는 brightfield 기본 조명과 Leica M80 stereomicroscope를 사용하여 </td></tr><tr><td> 따뜻한 슬라이드 </td><td> CS &amp; E. </td><td></td><td> 콜라겐 중합 </td></tr><tr><td> 닭고기 계란 인큐베이터 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37 ° C / 5% CO 2 humidified 세포 문화 인큐베이터 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 해부 자료 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgard &amp;복사, 코팅 페트리 접시 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24 물론 세포 배양 플레이트 </td><td> 코닝 </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 뒤몽 포셉 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr><tr><td> # 55 뒤몽 포셉 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> 스테인레스 해부 핀 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 26002-10 </td><td> 배아 달아, 괜찮아요 해부 </td></tr><tr><td> 모리아 구멍 스푼 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 10370-17 </td><td> 배아 수확 / 전송 </td></tr><tr><td> 200 μl 넓은 입 pipet 팁 </td><td> 다트 과학 Inc의 </td><td> 118 - 96R </td><td> Explant 전송 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E4 E6와 닭고기 달걀 </td><td></td><td></td><td> &amp; NBSP; </td></tr><tr><td> 칙 울리는의 솔루션 </td><td></td><td></td><td> 배아 수확 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> 시그마 </td><td> H8264 </td><td> 절개를 SAG </td></tr><tr><td> L15 매체 </td><td> 시그마 </td><td> L5520 </td><td> 척수의 해부 매체 </td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 </td><td> 애틀랜타 체액 </td><td> S11150 </td><td> 척수의 해부 매체 </td></tr><tr><td> Vannas 가위 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 501,778 </td><td> 척수의 해부 </td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 콜라겐 준비 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 쥐 - 꼬리 콜라겐 유형 I </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,249 </td><td> Explant 문화 </td></tr><tr><td> 10X PBS (무균) </td><td></td><td></td><td> NEU하기콜라겐 tralize </td></tr><tr><td> 1N NaOH (무균) </td><td></td><td></td><td> 콜라겐을 무력화 </td></tr><tr><td> 증류수 (무균) </td><td></td><td></td><td> 콜라겐을 무력화 </td></tr><tr><td> 산도 표시기 신문 (6.0-8.1) </td><td> 워트 먼지 </td><td> 2629-990 </td><td> 콜라겐 산도를 확인하려면 </td></tr><tr><td> 15 ML 원뿔 튜브 </td><td> 다트 과학 Inc의 </td><td> 818 - PG </td><td></td></tr><tr><td> 500 μl 넓은 입 pipet 팁 </td><td> 다트 과학 Inc의 </td><td> 119 - R100 </td><td> pipet의 콜라겐하기 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Explant 문화 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 매체 </td><td> 시그마 </td><td> D8437 </td><td> Explant 문화 매체 </td></tr><tr><td> ITS 1 </td><td> 시그마 </td><td> I2521 </td><td> 중간 보충 </tD&gt; </tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> 중간 보충 </td></tr><tr><td> CNTF (쥐) </td><td> 시그마 </td><td> C3835 </td><td> 중간 보충 </td></tr><tr><td> NT - 3 (인간) </td><td> 시그마 </td><td> N1905 </td><td> 중간 보충 </td></tr><tr><td> 정화 마우스 Wnt5a </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 645 - WN - 010 </td><td></td></tr><tr><td> Affi - 겔 블루 겔 비즈 </td><td> 바이오 방사선 </td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immunohistochemistry </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> 시그마 </td><td> P6148 </td><td> 정치 </td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> 물에 빨고 </td></tr><tr><td> 트리톤 X - 100 </td><td> 시그마 </td><td> T9284 </td><td> 차단 솔루션 </td></tr><tr><td> 나트륨azide </td><td> 시그마 </td><td> S8032 </td><td> 차단 솔루션 </td></tr><tr><td> 송아지 혈청 </td><td> Invitrogen </td><td> 16170-078 </td><td> 차단 솔루션 </td></tr><tr><td> 마우스 단클론 IgG2b 방지 β Tubulin 1 + II 항체 </td><td> 시그마 </td><td> T8535 </td><td> 레이블 셀 기관 및 neurites </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 염소 항 마우스 IgG2 B 항체 </td><td> Invitrogen </td><td> A21141 </td><td> β Tubulin 항체를 감지 </td></tr><tr><td> 테플론 마이크로 주걱 </td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td> 우물에서 릴리스 콜라겐 젤 </td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

닭 내이 (内耳)의 감각 기관은 statoacoustic 신경절 (SAG) 뉴런의 주변 장치 프로세스에 의해 innervated 있습니다. 감각 기관의 innervation이 성장 axons 및 / 궤도를 따라 그들의 감각 기관 목표 내에 축삭 안내 단서 1과 생존 요인 2 조합에 따라 달라집니다. 예를 들어, 전형적인 축삭지도 신호 경로, semaphorin - neuropilin와 기능 간섭은 귀의 axons 3 misrouting 생성. 또한, 여러 가지 성장 요인 Neurotrophin - 3 (NT - 3) 및 뇌 유래 Neurotrophic 팩터 (BDNF)를 포함 내이의 감각 대상, 표현하는 것은 다시 SAG의 axons 4 misrouting로 이어지는, 유전자 변형 동물에 조작되었습니다. 이 같은 분자 체외 5,6의 생존과 여자는 SAG의 뉴런의 neurite의 파생물을 모두 추진하고 있습니다. 여기서는 설명하고 체외 방법에서 현재 U있는 입증알려진 같은 Wnts 같은 morphogens뿐만 아니라, SAG의 neurite의 파생물 및 신경 세포 생존을 촉진에 중요한 성장 요인을 포함하여 가용성 단백질에 여자는 SAG의 neurites의 반응을 테스트하는 노래. 이 모델 시스템을 사용하여, 우리는 분비 리간드는 SAG의 신경 세포의 생존과 neurite의 파생물에 견딜수 수있는 효과에 대한 결론을 그릴 수 있도록 최선을 다하겠습니다. SAG의 explants은 배아 일 4 (E4)에 해부 및 24 시간 동안 혈청이없는 조건 입체 콜라겐 젤의 양식입니다. 첫째, neurite 응답은 단백질 보충 매체 culturing의 explants에 의해 테스트됩니다. 그런 다음 분비 리간드의 포인트 소스 neurite 가지에 대한 방향성 영향을 미칠 수 있는지 여부를 물어, explants는 단백질 코팅 비즈와 공동 교양 및 지역 홍보 또는 파생물을 억제하기 위해 비드의 능력에 대한 assayed 있습니다. 우리는 또한 해부의 실연 (7 번 프로토콜 수정) 및 E6 척수의 explants 문화를 포함합니다. 우리정기적으로 단백질과 단백질 절어 구슬의 bioactivity을 확인하기 척수의 explants를 사용하고 SAG의 explants 같은 문화 조건에서, 병아리, 조직과 종에게 교차 반응을 확인할 수 있습니다. 시험 관내 assays에서 이들은 신속 특히 생체내에서 연구를 수행하기 전에, 영양 (생존) 또는 SAG의 뉴런에서 열대 (방향) 효과를 발휘 분자에 대한 심사를위한 편리합니다. 또한,이 방법은 높은 신경 세포의 생존 8, 혈청이없는 조건에서 각각의 분자의 테스트를 수 있습니다.

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Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

우리는 병아리 E4 statoacoustic 신경절 및 E6 척수의 explants을 해부하다 문화하는 방법을 보여줍니다. Explants는 24 시간 동안 3D 콜라겐 젤의 혈청 무료 조건에서 양식입니다. Neurite 대응은 성장 인자 - 보충 매체와 단백질 코팅 비즈와 함께 테스트됩니다.

Neurite 가지의 Assays에 대한 해부와 칙 Statoacoustic 신경절과 콜라겐 젤에서 척수의 Explants의 문화

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

배아 척수에서 뉴런의 Commissural 해부와 문화

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

연구

신경과학

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

문화 접시에있는 기능성 모터 단위 : 척수의 Explants와 근육 세포의 공동 문화

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

마우스 Dopaminergic 및 3 차원 콜라겐 매트릭스 Assays의 Striatal Explants의 해부와 문화

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

닭의 배아 척수 코드 슬라이스 문화 프로토콜

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

해부 및 제브라 피쉬 배아의 측면 장착 : 척수 개발의 분석

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

이후 Wholemount을위한 완벽한 척수 손상 및 뇌 해부 프로토콜<em&gt; 제자리에서</em&gt; 애벌레 바다 장어의 하이브리드

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

electroporation하여 병아리 배아 척수에서 차동 유전자 발현의 RNA-SEQ 분석

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

종의 척추 상공 회의소를 주입하는 절차<em&gt; 생체</em&gt; 마우스 척수의 영상

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

신생아 생쥐의 척수 신경 세포 분리 및 배양

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

쥐와 마우스 두뇌에 신경 줄기 세포의 동맥 내 납품: 대뇌 허혈에 응용 프로그램

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...