Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Эта работа финансировалась Национальным институтом здоровья Грант RO1DC002756 и Purdue исследовательский фонд. Мы благодарим Дорис Ву Чанг и Визе за советом с экспериментами и Родни McPhail за помощью цифр.

Рецепты Чик Ringers <table border="1"><tbody><tr><td> 7,2 г </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,23 г </td><td> CaCl 2 + 2H 2 O </td></tr><tr><td> 0,37 г </td><td> KCl </td></tr><tr><td> 0,115 г </td><td> Na 2 HPO 4 </td></tr><tr><td> 900 мл </td><td> Вода (степень культуры ткани) </td></tr></tbody></table> Примечание: Регулировка рН до 7,4. Принесите...

<ol>
	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. Bull. 60 (5-6), 423-423 (2003).</li><li>Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+conveys+semaphorin+and+VEGF+signaling+during+neural+and+cardiovascular+development.">Neuropilin-1 conveys semaphorin and VEGF signaling during neural and cardiovascular development.</a> Dev. Cell. 5 (1), 45-45 (2003).</li><li>Tessarollo, L., Coppola, V., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NT-3+replacement+with+brain-derived+neurotrophic+factor+redirects+vestibular+nerve+fibers+to+the+cochlea.">NT-3 replacement with brain-derived neurotrophic factor redirects vestibular nerve fibers to the cochlea.</a> J. Neurosci. 24 (10), 2575-2575 (2004).</li><li>Avila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+support+the+survival+and+neuritogenesis+response+of+developing+cochleovestibular+ganglion+neurons.">Brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 support the survival and neuritogenesis response of developing cochleovestibular ganglion neurons.</a> Dev. Biol. 159 (1), 266-266 (1993).</li><li>Bianchi, L. M., Cohan, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+neurotrophins+and+CNTF+on+developing+statoacoustic+neurons:+comparison+with+an+otocyst-derived+factor.">Effects of the neurotrophins and CNTF on developing statoacoustic neurons: comparison with an otocyst-derived factor.</a> Dev. Biol. 159 (1), 353-353 (1993).</li><li>Juurlink, B. e. r. n. h. a. r. d. H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Spinal+Somatic+Motoneurons+in+Culture.">Chick Spinal Somatic Motoneurons in Culture.</a> Protocols for Neural Cell Culture.. 59, (2001).</li><li>Fantetti, K. N., Zou, Y., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnts+and+Wnt+inhibitors+do+not+influence+axon+outgrowth+from+chicken+statoacoustic+ganglion+neurons.">Wnts and Wnt inhibitors do not influence axon outgrowth from chicken statoacoustic ganglion neurons.</a> Hear. Res. , (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-49 (1951).</li><li>Bourikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+commissural+axons+along+the+longitudinal+axis+of+the+spinal+cord.">Sonic hedgehog guides commissural axons along the longitudinal axis of the spinal cord.</a> Nat. Neurosci. 8 (3), 297-297 (2005).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2251 (2005).</li><li>Augsburger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs+as+mediators+of+roof+plate+repulsion+of+commissural+neurons.">BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons.</a> Neuron. 24 (1), 127-127 (1999).</li><li>Lyuksyutova, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

Мы представляем метод препарировать и культуры E4 и E6 SAG спинного эксплантов мозга, от цыпленка, под бессывороточной условиях. Эта процедура в настоящее время используется в нашей лаборатории для изучения влияния различных выделяется лигандов на SAG выживанию нейронов и аксонов. Новые а?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарий </td></tr><tr><td> Оборудование </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Препарирование микроскопом </td><td></td><td></td><td> Мы используем Leica M80 стереомикроскопа с базой светлое освещение </td></tr><tr><td> Слайд теплее </td><td> CS &amp; E. </td><td></td><td> Коллаген полимеризации </td></tr><tr><td> Куриное яйцо инкубатор </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37 ° C / 5% CO 2 увлажненный культуре клеток инкубатор </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Препарирование материалы </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgard &amp;копию; покрытием чашке Петри </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24-а культура клеток пластины </td><td> Гранулирование </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 Дюмон щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr><tr><td> # 55 Дюмон щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Нержавеющая сталь рассекает контакты </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 26002-10 </td><td> Эмбрион пиннинга, тонкая вскрытия </td></tr><tr><td> Мория перфорированной ложкой </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 10370-17 </td><td> Эмбрион сбора / передачи </td></tr><tr><td> 200 мкл широкий советы пипетки рот </td><td> Dot Научно Inc </td><td> 118-96R </td><td> Эксплантов передачи </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Е4 и яйца куриные E6 </td><td></td><td></td><td> NB &amp;зр; </td></tr><tr><td> Чик раствор Рингера </td><td></td><td></td><td> Эмбрион урожая </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Сигма </td><td> H8264 </td><td> SAG вскрытия </td></tr><tr><td> L15 среда </td><td> Сигма </td><td> L5520 </td><td> Спинной среду рассечение шнур </td></tr><tr><td> Фетальной телячьей сыворотки </td><td> Атланты биологические препараты </td><td> S11150 </td><td> Спинной среду рассечение шнур </td></tr><tr><td> Vannas Ножницы </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 501778 </td><td> Спинной рассечение шнур </td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Коллаген подготовки </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Крыса хвостом коллагена I типа </td><td> BD Biosciences </td><td> 354249 </td><td> Эксплантов культуры </td></tr><tr><td> 10X PBS (стерильная) </td><td></td><td></td><td> Для нейтроновtralize коллагена </td></tr><tr><td> 1N NaOH (стерильная) </td><td></td><td></td><td> Для нейтрализации коллагена </td></tr><tr><td> Дистиллированной воды (стерильная) </td><td></td><td></td><td> Для нейтрализации коллагена </td></tr><tr><td> рН индикатор работы (6.0-8.1) </td><td> Ватман </td><td> 2629-990 </td><td> Для проверки коллагеновой рН </td></tr><tr><td> 15 мл конические пробирки </td><td> Dot Научно Inc </td><td> 818-ПГ </td><td></td></tr><tr><td> 500 мкл широкий советы пипетки рот </td><td> Dot Научно Inc </td><td> 119-R100 </td><td> Для пипетки коллагена </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Эксплантов культуры </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 среда </td><td> Сигма </td><td> D8437 </td><td> Эксплантов культуральной среде </td></tr><tr><td> ЕЕ +1 </td><td> Сигма </td><td> I2521 </td><td> Средний дополнения </tг&gt; </tr><tr><td> Пенициллин-Стрептомицин </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> Средний дополнения </td></tr><tr><td> CNTF (крыса) </td><td> Сигма </td><td> C3835 </td><td> Средний дополнения </td></tr><tr><td> NT-3 (человек) </td><td> Сигма </td><td> N1905 </td><td> Средний дополнения </td></tr><tr><td> Очищенная мыши Wnt5a </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 645-WN-010 </td><td></td></tr><tr><td> Аффи-гель бисер Синий гель </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Иммуногистохимия </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Параформальдегид </td><td> Сигма </td><td> P6148 </td><td> Фиксация </td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> Промывка </td></tr><tr><td> Тритон Х-100 </td><td> Сигма </td><td> T9284 </td><td> Блокировка решение </td></tr><tr><td> НатрийАзид </td><td> Сигма </td><td> S8032 </td><td> Блокировка решение </td></tr><tr><td> Телячьей сыворотки </td><td> Invitrogen </td><td> 16170-078 </td><td> Блокировка решение </td></tr><tr><td> Мышь моноклональных IgG2b анти-β тубулина 1 + II антител </td><td> Сигма </td><td> T8535 </td><td> Этикетки клеточных тел и невриты </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 антимышиного IgG2 б антител </td><td> Invitrogen </td><td> A21141 </td><td> Обнаружение антител β тубулина </td></tr><tr><td> Тефлон микро шпателем </td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td> Выпуск коллагена гели из хорошо </td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

Органов чувств куриного внутреннего уха иннервируются периферических процессов statoacoustic ганглий (SAG) нейронов. Сенсорная иннервация органа зависит от сочетания аксон руководством сигналы 1 и 2 факторов выживания, расположенных вдоль траектории растущих аксонов и / или в рамках своей цели сенсорных органов. Например, функциональные вмешательство в классический аксон руководством сигнального пути, semaphorin-neuropilin, генерируемых misrouting из ушной аксонов 3. Кроме того, некоторые факторы роста, выраженный в сенсорных целей внутреннего уха, в том числе нейротрофина-3 (NT-3) и производные мозга нейротрофический фактор (BDNF), были изменены в трансгенных животных, опять же ведет к misrouting СА аксонов 4. Эти же молекулы способствующие выживанию и аксонов нейронов куриных SAG в пробирке 5,6. Здесь мы описываем и продемонстрировать в пробирке методом мы в настоящее время упеть проверить отзывчивость нейритов куриных SAG в растворимые белки, в том числе известные морфогенов таких как Wnts, а также факторы роста, которые имеют важное значение для содействия SAG результатом аксонов и нейронов выживания. Используя эту модель системы, мы надеемся сделать выводы об эффектах, которые выделяются лигандов может оказывать на SAG выживанию нейронов и аксонов. SAG эксплантов расчленены на 4-й день эмбрионального (Е4) и культивировали в трехмерном гели коллагена под бессывороточной условиях в течение 24 часов. Во-первых, нейритов отзывчивость проверяется при культивировании эксплантов с белком-добавляемой среде. Затем, чтобы спросить, есть ли точечных источников выделяется лиганды могут иметь направленного воздействия на аксонов, эксплантаты являются со-культивировали с белком покрытые бисером и анализировали на способность борта к локально способствовать или препятствовать нарост. Мы также включаем демонстрации вскрытия (модифицированный протокол 7) и культуры E6 спинного эксплантов мозга. Мыобычно используют спинного эксплантов шнур для подтверждения биологической активности белков и белковых пропитанной бисера, а также для проверки видов перекрестной реактивности с куриных ткани, в тех же условиях культуры как SAG эксплантов. Эти тесты в пробирке удобны для быстрого скрининга молекул, которые оказывают трофические (выживание) или тропического (по направлению) воздействие на нейроны SAG, особенно перед проведением исследования в естественных условиях. Более того, этот метод позволяет испытания отдельных молекул под бессывороточной условиях, с высокой выживаемости нейронов 8.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Мы показываем, как препарировать и культуре куриных Е4 statoacoustic ганглия и E6 спинного эксплантов мозга. Эксплантов культивируют в бессывороточной условия в 3D гели коллагена в течение 24 часов. Нейритов отзывчивость тестируется с фактором роста дополнена средой и с белком покрытием бисером.

Разбор и культуры Чик Statoacoustic ганглия и спинного мозга при эксплантов Коллаген Гели для нейритов Анализы вырост

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Разбор и культуры спаечный Нейроны из эмбриональных спинного мозга

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Функциональный блок двигателя в культуре блюдо: Co-культуре эксплантов спинного мозга и мышечных клеток

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

Вскрытие и культуры мышь дофаминергической и стриатуме эксплантов в трехмерных Анализы коллагеновой матрице

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Куриных эмбрионов спинного мозга Slice Культура протокола

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

Вскрытие и боковая навеска из эмбрионов данио рерио: Анализ спинномозговой развития шнура

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Полное Травма спинного мозга и мозга Вскрытие протокол для последующего Wholemount<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация в личинок морская минога

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

Секвенирование РНК анализ дифференциальных экспрессии генов в электропорации Чик эмбрионального спинного мозга

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Процедура имплантации спинного палату для продольных<em&gt; В Vivo</em&gt; Визуализация мозга мыши спинного

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Изоляция и культура нейронов спинного мозга от неонатальных мышей

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Внутриархивная доставка нейронных стволовых клеток крыс и мышей мозга: Применение к церебральной ишемии

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...