Name: dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays
Uploaded: 2011-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Hibe RO1DC002756 Enstitüleri ve Purdue Araştırma Vakfı tarafından finanse edildi. Doris Wu ve Wiese Chang Biz deney ve figürleri ile yardım için Rodney McPhail tavsiye için teşekkür ederim.

Tarifler Chick Ringers <table border="1"><tbody><tr><td> 7.2 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0.23 g </td><td> CaCl 2 + 2H 2 O </td></tr><tr><td> 0.37 g </td><td> KCl </td></tr><tr><td> 0,115 g </td><td> Na 2 HPO 4 </td></tr><tr><td> 900 ml </td><td> Su (Doku kültürü notu) </td></tr></tbody></table> Not: pH 7.4 &#39;e ayarlayın. 1000 ml su ile son hacim kazandırın. 10X PBS <table bord...

<ol>
	<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+in+the+inner+ear.">Axon guidance in the inner ear.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 549-549 (2007).</li><li>Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inner+ear+afferent+connections:+forming+primary+neurons+and+connecting+them+to+the+developing+sensory+epithelia.">Development of inner ear afferent connections: forming primary neurons and connecting them to the developing sensory epithelia.</a> Brain Res. Bull. 60 (5-6), 423-423 (2003).</li><li>Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+conveys+semaphorin+and+VEGF+signaling+during+neural+and+cardiovascular+development.">Neuropilin-1 conveys semaphorin and VEGF signaling during neural and cardiovascular development.</a> Dev. Cell. 5 (1), 45-45 (2003).</li><li>Tessarollo, L., Coppola, V., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NT-3+replacement+with+brain-derived+neurotrophic+factor+redirects+vestibular+nerve+fibers+to+the+cochlea.">NT-3 replacement with brain-derived neurotrophic factor redirects vestibular nerve fibers to the cochlea.</a> J. Neurosci. 24 (10), 2575-2575 (2004).</li><li>Avila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+support+the+survival+and+neuritogenesis+response+of+developing+cochleovestibular+ganglion+neurons.">Brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 support the survival and neuritogenesis response of developing cochleovestibular ganglion neurons.</a> Dev. Biol. 159 (1), 266-266 (1993).</li><li>Bianchi, L. M., Cohan, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+neurotrophins+and+CNTF+on+developing+statoacoustic+neurons:+comparison+with+an+otocyst-derived+factor.">Effects of the neurotrophins and CNTF on developing statoacoustic neurons: comparison with an otocyst-derived factor.</a> Dev. Biol. 159 (1), 353-353 (1993).</li><li>Juurlink, B. e. r. n. h. a. r. d. H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Spinal+Somatic+Motoneurons+in+Culture.">Chick Spinal Somatic Motoneurons in Culture.</a> Protocols for Neural Cell Culture.. 59, (2001).</li><li>Fantetti, K. N., Zou, Y., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnts+and+Wnt+inhibitors+do+not+influence+axon+outgrowth+from+chicken+statoacoustic+ganglion+neurons.">Wnts and Wnt inhibitors do not influence axon outgrowth from chicken statoacoustic ganglion neurons.</a> Hear. Res. , (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-49 (1951).</li><li>Bourikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+commissural+axons+along+the+longitudinal+axis+of+the+spinal+cord.">Sonic hedgehog guides commissural axons along the longitudinal axis of the spinal cord.</a> Nat. Neurosci. 8 (3), 297-297 (2005).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2251 (2005).</li><li>Augsburger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs+as+mediators+of+roof+plate+repulsion+of+commissural+neurons.">BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons.</a> Neuron. 24 (1), 127-127 (1999).</li><li>Lyuksyutova, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+guidance+of+commissural+axons+by+Wnt-frizzled+signaling.">Anterior-posterior guidance of commissural axons by Wnt-frizzled signaling.</a> Science. 302 (5652), 1984-1984 (2003).</li></ol>

Biz bir yöntem serum koşullar altında, civciv, kültür E4 SAG ve E6 omurilik eksplantlar teşrih ve sunar. Bu prosedür şu anda SAG nöron hayatta kalma ve neurite akıbet çeşitli salgılanan ligandlar etkilerinin incelendiği laboratuvarda kullanılır. Bu protokolün Roman yönlerini, kültür eksplantlar ve SAG neurite akıbet etkilerini incelemek için büyüme faktörleri batırılmış boncuk kullanımı için serum ücretsiz sistem kullanımını içerir. Civciv omurilik 10 bizimkine benzer bir ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorum </td></tr><tr><td> Ekipman </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td></td><td></td><td> Biz aydınlık baz aydınlatma ile Leica M80 stereomikroskopta </td></tr><tr><td> Sıcak kaydırın. </td><td> CS &amp; E. </td><td></td><td> Kollajen polimerizasyon </td></tr><tr><td> Piliç kuluçka </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 37 ° C /% 5 CO 2 nemlendirilmiş hücre kültürü inkübatör </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon Malzemeleri </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgard &amp;kopyası; kaplı petri </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 24-kuyu hücre kültürü plaka </td><td> Corning </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 Dumont forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr><tr><td> # 55 Dumont forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Paslanmaz çelik diseksiyon pimleri </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26002-10 </td><td> Embriyo çivileme, ince diseksiyon </td></tr><tr><td> Moria delikli kaşık </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10370-17 </td><td> Embriyo hasat / transfer </td></tr><tr><td> 200 ul geniş ağız pipetlemeyin ipuçları </td><td> Nokta Scientific Inc </td><td> 118-96R </td><td> Eksplant transferi </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E4 ve E6 tavuk yumurtası </td><td></td><td></td><td> &amp; Nbsp; </td></tr><tr><td> Chick Ringer solüsyonu </td><td></td><td></td><td> Embriyo hasat </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264 </td><td> Diseksiyonu SAG </td></tr><tr><td> L15 orta </td><td> Sigma </td><td> L5520 </td><td> Omurilik diseksiyon orta </td></tr><tr><td> Fetal buzağı serumu </td><td> Atlanta Biyolojik </td><td> S11150 </td><td> Omurilik diseksiyon orta </td></tr><tr><td> Vannas Makas </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 501778 </td><td> Omurilik diseksiyonu </td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kollajen hazırlık </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rat-tail Kollajen Tip I </td><td> BD Biosciences </td><td> 354249 </td><td> Eksplant kültür </td></tr><tr><td> 10X PBS (Steril) </td><td></td><td></td><td> Neu içinkollajen tralize </td></tr><tr><td> 1N NaOH (Steril) </td><td></td><td></td><td> Kollajen nötralize </td></tr><tr><td> Damıtılmış su (Steril) </td><td></td><td></td><td> Kollajen nötralize </td></tr><tr><td> pH indikatör kağıtları (6,0-8,1) </td><td> Whatman </td><td> 2629-990 </td><td> Kollajen pH kontrol etmek için </td></tr><tr><td> 15 ml konik tüpler </td><td> Nokta Scientific Inc </td><td> 818-PG </td><td></td></tr><tr><td> 500 ul geniş ağız pipetlemeyin ipuçları </td><td> Nokta Scientific Inc </td><td> 119-R100 </td><td> Pipetlemeyin kollajen </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eksplant kültür </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 orta </td><td> Sigma </td><td> D8437 </td><td> Eksplant kültür ortamı </td></tr><tr><td> ITS 1 </td><td> Sigma </td><td> I2521 </td><td> Orta ek </td&gt; </tr><tr><td> Penisilin-Streptomisin </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> Orta ek </td></tr><tr><td> CNTF (sıçan) </td><td> Sigma </td><td> C3835 </td><td> Orta ek </td></tr><tr><td> NT-3 (insan) </td><td> Sigma </td><td> N1905 </td><td> Orta ek </td></tr><tr><td> Saflaştırılmış fare Wnt5a </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 645-WN-010 </td><td></td></tr><tr><td> Affi-gel Blue jel boncuklar </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7302 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> İmmünohistokimya </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Sigma </td><td> P6148 </td><td> Tespit </td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> Duruluk </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T9284 </td><td> Engelleme çözüm </td></tr><tr><td> Sodyumazid </td><td> Sigma </td><td> S8032 </td><td> Engelleme çözüm </td></tr><tr><td> Buzağı serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 16170-078 </td><td> Engelleme çözüm </td></tr><tr><td> Fare monoklonal IgG2b anti-β tubulin 1 + II antikor </td><td> Sigma </td><td> T8535 </td><td> Etiketler hücre gövdeleri ve neurites </td></tr><tr><td> Alexa Florlu 488 keçi anti-fare IgG2 b antikor </td><td> Invitrogen </td><td> A21141 </td><td> Β tubulin antikor Algılar </td></tr><tr><td> Teflon mikro spatula </td><td> VWR </td><td> 57949-033 </td><td> Kuyudan Yayın kollajen jeller </td></tr></tbody></table>

dissection and culture of chick statoacoustic ganglion and spinal cord explants in collagen gels for neurite outgrowth assays

Tavuk iç kulak duyu organları statoacoustic ganglion (SAG) nöronların periferik süreçleri tarafından innerve edilir. Duyu organı innervasyon akson rehberlik yörünge boyunca büyüyen aksonlar ve / veya duyu organı hedeflerine içinde bulunan ipuçları 1 ve hayatta kalma faktörleri 2 bir arada bağlıdır. Örneğin, klasik bir akson rehberlik sinyal yolağı, semaphorin-neuropilin ile fonksiyonel otik aksonlar 3 parazit misrouting oluşturulur. Ayrıca, çeşitli büyüme faktörleri nörotrofin-3 (NT-3) ve beyin türevli Nörotrofik Faktör (BDNF) de dahil olmak üzere, iç kulak duyu hedefler, ifade SAG aksonlar 4 misrouting yeniden lider, transgenik hayvanlar manipüle edilmiştir. Bu aynı molekülleri in vitro 5,6 hayatta kalma ve civciv SAG nöronların neurite akıbet teşvik. Burada, tarif ve in vitro yöntem şu anda u göstermekbilinen Wnts gibi morphogens yanı sıra SAG neurite akıbet ve nöron hayatta kalma teşvik için önemli olan büyüme faktörleri de dahil olmak üzere çözünür proteinler, civciv SAG neurites yanıt test için şarkı. Bu model sistemi kullanarak, salgılanan ligandlar SAG nöron hayatta kalma ve neurite akıbet uygulamayın ki etkileri hakkında sonuçlara varmak için umuyoruz. SAG eksplantlar, embriyonik gün 4 (E4) disseke ve 24 saat boyunca serum serbest koşullar altında, üç boyutlu kollajen jel kültür. İlk olarak, neurite yanıt verme, protein takviye orta kültür eksplantlar tarafından test edilir. Daha sonra, salgılanan ligandlar noktası kaynakları neurite akıbet yönlü etkilere sahip olup olmadığını sormak için, eksplantlar protein kaplı boncuklar ile co-kültürlü ve yerel teşvik etmek veya akıbet inhibe boncuk yeteneği test. Ayrıca diseksiyon gösteri (protokol 7 değiştirilmiş) ve E6, spinal kord eksplantlar kültürü içerir. Bizrutin proteinleri ve protein batırılmış boncuklar biyoaktivite onaylamak için omurilik eksplantlar kullanımı ve SAG eksplantlar aynı kültür koşulları altında, civciv dokusu ile türlerin çapraz reaktivite doğrulamak için. In vitro tayinlerde Bunlar hızlı bir şekilde özellikle in vivo çalışmalar gerçekleştirmeden önce, trofik (hayatta kalma) veya SAG nöronlar tropik (yönlü) etkilerini gösterirler molekülleri için tarama için uygundur. Dahası, bu yöntem yüksek nöron hayatta kalma 8, serum serbest şartlar altında bireysel moleküllerin test izin verir.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Biz civciv E4 statoacoustic ganglion ve E6 omurilik eksplantlar incelemek ve kültürüne nasıl gösterilmektedir. Eksplantlarındaki 24 saat için 3D kollajen jel serum serbest koşullar altında kültüre. Neurite yanıt büyüme faktörü desteği orta ve protein kaplı boncuklar ile test edilir.

Diseksiyon ve Chick Statoacoustic Ganglion ve Kollajen Jeller Omurilik eksplantlar Kültür Neurite akıbet Tahliller

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Kültür Bulaşık A Fonksiyonel Motor Birim: Omurilik Eksplantlarından ve Kas Hücrelerinin Co-kültür

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

Fare Dopaminerjik ve Üç Boyutlu Collagen Matrix Tahliller striatal Eksplantlarından diseksiyonu ve Kültür

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Tavuk embriyo Omurilik Dilim Kültür Protokolü

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

Diseksiyon ve Zebra balığı Embriyolar Yanal Montaj: Omurilik Kalkınma Analizi

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Sonradan wholemount için komple Omurilik Yaralanmalı ve Beyin Diseksiyon Protokolü<em&gt; Yerinde</em&gt; Larva Deniz taşemen içinde Hibritleşme

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

Electroporated Chick Embriyonik Omurilik Diferansiyel Gen İfade RNA Sıra Analizi

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Boyuna için bir Spinal Odası implantasyon için bir Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Omurilik Görüntüleme

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Yenidoğan Faresinden İzole Edilen Spinal Kord Nöronları İzolasyonu ve Kültürü

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...