Name: reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis
Uploaded: 2012-02-22T12:00:00
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这项工作是由国家卫生研究院资助K08NS065157（TAF），此外支持，宾夕法尼亚肌肉劳损，关节炎研究所奖号码P30AR050950，肌肉骨骼及皮肤疾病（TAF和史蒂文与舍雷尔）支持这项工作。最后，施赖纳斯儿科研究中心种子资金（TAF），支持这项工作。我们要感谢年轻的博士，金的儿子，初步证明她的援助，在整个安装过程和Amy A.金生产的草图图1。

1。动物主题 1.1。治疗<ol><li>所有动物的程序应与本地机构的动物护理和伦理委员会的批准，并按照使用和卫生准则委员会和国家机构，采取措施以减少疼痛和不适。 </li><li>我们的小鼠饲养温度控制在12小时的反向光明与黑暗周期条件下，而美联储鼠标议员和水随意。 </li><li>对于成人再生的研究，老鼠应该是年龄至少6周时，坐骨神经进行。这个年龄段是超出修剪polyneural神经?...

<ol>
	<li>Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neurotoxic+and+neuroprotective+agents+on+peripheral+nerve+regeneration+assayed+by+time-lapse+imaging+in+vivo.">Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).</li><li>Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinnervation+of+the+tibialis+anterior+following+sciatic+nerve+crush+injury:+A+confocal+microscopic+study+in+transgenic+mice.">Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice.</a> Exp. Neurol. 207, 64-74 (2007).</li><li>Amado, S., Sim&#241;es, M. J., Armada-da-Silva, P. A. S., Lu&#237;s, A. L., Shirosaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+hybrid+chitosan+membranes+and+N1E-115+cells+for+promoting+nerve+regeneration+in+an+axonotmesis+rat+model.">Use of hybrid chitosan membranes and N1E-115 cells for promoting nerve regeneration in an axonotmesis rat model.</a> Biomaterials. 29, 4409-4419 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Rodrigues, J. M., Geuna, S., Amado, S., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+cell+transplantation+effects+on+sciatic+nerve+regeneration+after+a+standardized+crush+injury+in+the+rat.">Neural cell transplantation effects on sciatic nerve regeneration after a standardized crush injury in the rat.</a> Microsurgery. 28, 458-470 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Amado, S., Geuna, S., Rodrigues, J. M., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp.">Long-term functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J. Neurosci. Methods. 163, 92-104 (2007).</li><li>Baptista, A. F., de Souza Gomes, J. R., Oliveira, J. T., Santos, S. M. G., Vannier-Santos, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+to+assess+function+after+sciatic+nerve+lesion+in+the+mouse+-+adaptation+of+the+sciatic+static+index.">A new approach to assess function after sciatic nerve lesion in the mouse - adaptation of the sciatic static index.</a> J. Neurosci. Methods. 161, 259-264 (2007).</li><li>Ronchi, G., Raimondo, S., Varej&#227;o, A. S. P., Tos, P., Perroteau, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+crush+injury+of+the+mouse+median+nerve.">Standardized crush injury of the mouse median nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 71-75 (2010).</li><li>Berg, A., Zelano, J., Cullheim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin+G-2+ligand+mRNA+is+downregulated+in+spinal+motoneurons+after+sciatic+nerve+lesion.">Netrin G-2 ligand mRNA is downregulated in spinal motoneurons after sciatic nerve lesion.</a> Neuroreport. 21, 782-785 (2010).</li><li>Girolami, E. I., Bouhy, D., Haber, M., Johnson, H., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+and+potential+role+of+SOCS1+and+SOCS3+in+Wallerian+degeneration+in+injured+peripheral+nerve.">Differential expression and potential role of SOCS1 and SOCS3 in Wallerian degeneration in injured peripheral nerve.</a> Exp. Neurol. 223, 173-182 (2010).</li><li>Hossain-Ibrahim, M. K., Rezajooi, K., Stallcup, W. B., Lieberman, A. R., Anderson, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+axonal+regeneration+in+the+central+and+peripheral+nervous+systems+of+the+NG2-deficient+mouse.">Analysis of axonal regeneration in the central and peripheral nervous systems of the NG2-deficient mouse.</a> BMC Neurosci. 8, 80-80 (2007).</li><li>Thornton, M. R., Mantovani, C., Birchall, M. A., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+N-CAM+and+N-cadherin+expression+in+axotomized+and+crushed+rat+sciatic+nerve.">Quantification of N-CAM and N-cadherin expression in axotomized and crushed rat sciatic nerve.</a> J. Anat. 206, 69-78 (2005).</li><li>Beer, G. M., Steurer, J., Meyer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardizing+nerve+crushes+with+a+non-serrated+clamp.">Standardizing nerve crushes with a non-serrated clamp.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 531-534 (2001).</li></ol>

我们已经提出了一个方法来获取可靠完整的坐骨神经与精确标记的美眉现场。如前所述，坐骨神经是一种常见的周围神经损伤的小鼠和大鼠模型。虽然每个美眉的方法都有其优点和缺点，我们发现，这种方法产生一个完整的挤压，很容易被一个特殊的设备（如特殊夹具等）的最低标记。 粉碎方法仪器用于小鼠坐骨神经的最常见的是5号直角钳。虽然它有可能...

<table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/数量） </td><td> 供应商 </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td>迷你快船号0000刀片</td><td> roboz </td><td> RC-5903 </td></tr><tr><td>奈尔头发卸妆（9盎司） </td><td>教会和德怀特有限公司，公司</td><td> N / A </td></tr><tr><td>优碘外科磨砂（1加仑） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> 19066452 </td></tr><tr><td>眼药膏（1盎司） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> 19082795 </td></tr></tbody></table> 手术工具： <table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/数量） </td><td> 供应商 </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td>福斯特250热珠消毒</td><td>罚款科学工具</td><td> 18000-45 </td> &lt;/ TR&gt; <tr><td>虹膜剪刀（11厘米长） </td><td>世界精密仪器</td><td> 500216 </td></tr><tr><td>帕兹 - 史密斯钳（直;18厘米的; 1X2牙） </td><td>罚款科学工具</td><td> 11024-18 </td></tr><tr><td>麦克弗森Vannas剪刀（5毫米刀片） </td><td>世界精密仪器</td><td> 14124 - G </td></tr><tr><td>杜蒙＃5镊子 - Dumoxel标准提示</td><td>罚款科学工具</td><td> 11252-30 </td></tr><tr><td>杜蒙＃5/45钳 - Dumoxel小费标准</td><td>罚款科学工具</td><td> 11251-35 </td></tr><tr><td>精细止血超（直光滑的内表面） </td><td>罚款科学工具</td><td> 13020-12 </td></tr><tr><td>粉末活性炭（500克） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> C272-500 </td></tr><tr><td>大小6-0缝线的C-1针（不育，丝绸，黑色，编织，非吸收性; 18“的长度;盒36） </td><td> roboz </td><td>位SUT-1073-11 </td></tr><tr><td>反射的剪辑APPLIER（9毫米剪辑） </td><td>世界精密仪器</td><td> 500345 </td></tr><tr><td> 9mm不锈钢的反射剪辑（100/box） </td><td>世界精密仪器</td><td> 500346 </td></tr></tbody></table> 动物护理： <table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/数量） </td><td> 供应商 </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td> 0.9％氯化钠注射液（不含防腐剂; 20毫升） </td><td> Hospira公司</td><td> 0409-4888-20 </td></tr><tr><td>完整的柔性探头Homeothermic毛毯系统（中等，115伏，60赫兹） </td><td>哈佛仪器</td><td> 507222F </td></tr></tbody></table> 手术Platform和拉钩： （在当地的五金商店购买） <table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/） </td><td> 数量 </td></tr><tr><td>不锈钢平台（铣削〜12“X12”X1 / 8“） </td><td> 1 </td></tr><tr><td>按钮磁铁（例如：Eclipse的E825） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>不锈钢螺栓（长3“按钮磁铁决心直径） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>不锈钢螺母（大小以适合螺栓） </td><td> 9 </td></tr><tr><td>橡皮筋（轻张力） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>昆虫销（两端弯曲，形成挂钩） </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> 半变薄： <table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/数量） </td><td> 供应商&lt;/ STRONG&gt; </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td>多聚甲醛（1公斤） </td><td> Sigma-Aldrich公司</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>无水磷酸氢钠（500克;用于制备磷酸盐缓冲液） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>无水磷酸二氢钠（1公斤;用于制备磷酸盐缓冲液） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td>戊二醛（50％; 10×10毫升） </td><td>特德·佩拉，公司</td><td> 18431 </td></tr><tr><td>四氧化锇（4％水溶液，10×10毫升） </td><td>特德·佩拉，公司</td><td> 18465 </td></tr><tr><td>环氧丙烷（450毫升） </td><td>特德·佩拉，公司</td><td> 18601 </td></tr><tr><td>嵌入812（包，硬质块/图像对比度高） </td><td>电子显微镜科学</td><td> 14120 </td></tr><tr><td> toluidiNE蓝（25克） </td><td>特德·佩拉，公司</td><td> 19451 </td></tr></tbody></table>整个山肌肉的制备及免疫组化： <table border="1"><tbody><tr><td> 名称（描述/数量） </td><td> 供应商 </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td>多聚甲醛（1公斤） </td><td> Sigma-Aldrich公司</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>无水磷酸氢钠（500克;用于制备磷酸盐缓冲液） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>无水磷酸二氢钠（1公斤;用于制备磷酸盐缓冲液） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> 10％BSA稀释液/封闭液（200毫升） </td><td> kirkegaard佩里实验室，公司</td><td> 50-61-00 </td></tr><tr><td>的Triton X-100（100毫升） </td&gt; <td>点科技有限公司的</td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td>甘氨酸，98％（1公斤） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> AC12007-0010 </td></tr><tr><td>组织TEK的Cryo-OCT复合（12个案例; 4盎司瓶） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> 14-373-65 </td></tr><tr><td> sylgard陶氏170（2磅包） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> NC9492579 </td></tr><tr><td>不锈钢昆虫销，大小为1（100/pkg） </td><td>罚款科学工具</td><td> 26001-40 </td></tr><tr><td>四甲-A银环蛇毒素（0.5毫克） </td><td> Sigma-Aldrich公司</td><td> T0195-.5MG </td></tr><tr><td>单克隆抗体对SMI-312（0.1毫升） </td><td> Covance公司</td><td> SMI-312R </td></tr><tr><td>单克隆抗体反对SV2（0.1毫升） </td><td>发展研究杂交瘤细胞银行（DSHB） </td><td> SV2 </td></tr><tr><td>兔聚GAP-43单克隆抗体对</td><td> Novus公司生物制品</td><td> NB300-143 </td></tr><tr><td> flourescein标记的羊抗鼠IgG，Fcγ小类1比</td><td>杰克逊ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=115-095-205&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">11 5-095-205</a> </td></tr><tr><td> DyLight 649共轭的驴抗兔IgG </td><td>杰克逊ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=711-495-152&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">711-495-152</a> </td></tr><tr><td> 4&#39;,6-diamidino-2-苯基吲哚（DAPI，dilactate; 10毫克） </td><td> Invitrogen公司</td><td> D3571 </TD&gt; </tr><tr><td> vectashield安装介质（10毫升） </td><td>媒介实验室</td><td>的H-1000 </td></tr><tr><td> superfrost加上载玻片（白尺寸：75×25毫米; 144包） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td>高级盖眼镜fisherfinest（尺寸：40×22毫米; 1盎司包。） </td><td> Fisher Scientific则</td><td> 12-548-5C </td></tr></tbody></table>

reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis

再生周围神经系统（PNS）被广泛研究人类疾病的相关了解PNS的神经元，从而有可能阐明中枢神经系统再生1失败安装强大的再生反应。坐骨神经（axonotmesis）的是在啮齿类动物2周围神经损伤的最常见的车型之一。粉碎中断所有轴突，但雪旺氏细胞基部叶片，使再生的最佳3,4保留。这使得研究者，研究正是越来越轴突的互动能力与雪旺氏细胞和基底椎板4。大鼠一般都首选的动物模型实验神经压榨。它们被广泛使用，其损毁坐骨神经提供了一个合理的近似人类神经病变5,4。虽然在规模小于大鼠神经，鼠神经有许多相似的特质。但最重要的，谅解备忘录E型是由于转基因株系的广泛的可用性日益成为宝贵的，现在允许一个关键的单个分子神经再生6，7的详细解剖。此前研究者已经使用了多种方法来产生神经挤压或损伤，包括简单的直角钳，冷藏镊子，止血钳，血管钳，研究者设计的夹8,9,10,11,12。研究者还利用各种方法标记的损伤部位，包括缝合，碳粒子和荧光珠13,14,1。我们描述的方法来获取准确和持久性标志的使用罚款的止血钳和随后的碳爱恋标志着网站的爱恋现场1再现完整的坐骨神经。作为我们描述的坐骨神经过程的一部分，我们还包括肌肉整体的一个比较简单的方法安装，我们使用到随后量化再生。

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Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

在这份报告中，我们描述了一种方法来粉碎小鼠坐骨神经。这种方法使用现成的止血钳和轻松，重现产生完整的坐骨神经。此外，我们描述了一种方法来准备适合分析坐骨神经后神经再生肌肉整个坐骑。

重复性小鼠坐骨神经挤压和再生的后续评估整装肌肉分析

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

从大鼠坐骨神经轴浆隔离

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

科研

神经科学

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

解剖鼠标眼的视网膜色素上皮的全山

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

成人整装准备果蝇巨纤维染料注射腹侧神经索

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

全山神经肌肉交界分析的 横向解剖阿布多米尼斯 肌肉

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

血管再生在中枢神经系统中使用的小鼠视网膜评估

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

小鼠胚胎感觉轴突预测整个安装成像

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

全山解剖和成年小鼠耳蜗的免疫

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

体内基因转移到雪旺细胞在啮齿动物坐骨神经电穿孔

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

坐骨神经粉碎损伤大鼠模型中功能评估的3D运动学分析

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

真菌形态、环形和味觉味蕾的全镶嵌染色、可视化和分析

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...