Name: reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis
Uploaded: 2012-02-22T12:00:00
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この作品は、関節リウマチの国立研究所からの筋骨格系疾患のためのペンセンター、賞の数P30AR050950さらに、NIHの助成金K08NS065157（TAFまで）によってサポートされていました、筋骨格系と皮膚疾患は、（TAFとSteven S.シェーラー）この作業をサポートしていました。最後に、シュライナーズ小児研究センターのシード資金（TAF）は、この作業をサポートしていました。私たちは、最初に図1のスケッチを製造する彼女の援助全体のマウント手順とエイミーA.キムを示すために博士·ヨンジンの息子に感謝します。

1。動物の科目 1.1。治療<ol><li>すべての動物の手順は、痛みや不快感を最小限に抑えるためにとられた措置で、地元の金融機関の動物のケアと倫理委員会の承認を得て衛生ガイドラインの使用と委員会と国立研究所に従って実行する必要があります。 </li><li>私たちのマウスは、給餌マウス飼料および水を自由に摂取しながら、12時間逆明暗サイクルで温度制御された条件?...

<ol>
	<li>Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neurotoxic+and+neuroprotective+agents+on+peripheral+nerve+regeneration+assayed+by+time-lapse+imaging+in+vivo.">Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).</li><li>Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinnervation+of+the+tibialis+anterior+following+sciatic+nerve+crush+injury:+A+confocal+microscopic+study+in+transgenic+mice.">Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice.</a> Exp. Neurol. 207, 64-74 (2007).</li><li>Amado, S., Sim&#241;es, M. J., Armada-da-Silva, P. A. S., Lu&#237;s, A. L., Shirosaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+hybrid+chitosan+membranes+and+N1E-115+cells+for+promoting+nerve+regeneration+in+an+axonotmesis+rat+model.">Use of hybrid chitosan membranes and N1E-115 cells for promoting nerve regeneration in an axonotmesis rat model.</a> Biomaterials. 29, 4409-4419 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Rodrigues, J. M., Geuna, S., Amado, S., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+cell+transplantation+effects+on+sciatic+nerve+regeneration+after+a+standardized+crush+injury+in+the+rat.">Neural cell transplantation effects on sciatic nerve regeneration after a standardized crush injury in the rat.</a> Microsurgery. 28, 458-470 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Amado, S., Geuna, S., Rodrigues, J. M., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp.">Long-term functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J. Neurosci. Methods. 163, 92-104 (2007).</li><li>Baptista, A. F., de Souza Gomes, J. R., Oliveira, J. T., Santos, S. M. G., Vannier-Santos, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+to+assess+function+after+sciatic+nerve+lesion+in+the+mouse+-+adaptation+of+the+sciatic+static+index.">A new approach to assess function after sciatic nerve lesion in the mouse - adaptation of the sciatic static index.</a> J. Neurosci. Methods. 161, 259-264 (2007).</li><li>Ronchi, G., Raimondo, S., Varej&#227;o, A. S. P., Tos, P., Perroteau, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+crush+injury+of+the+mouse+median+nerve.">Standardized crush injury of the mouse median nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 71-75 (2010).</li><li>Berg, A., Zelano, J., Cullheim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin+G-2+ligand+mRNA+is+downregulated+in+spinal+motoneurons+after+sciatic+nerve+lesion.">Netrin G-2 ligand mRNA is downregulated in spinal motoneurons after sciatic nerve lesion.</a> Neuroreport. 21, 782-785 (2010).</li><li>Girolami, E. I., Bouhy, D., Haber, M., Johnson, H., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+and+potential+role+of+SOCS1+and+SOCS3+in+Wallerian+degeneration+in+injured+peripheral+nerve.">Differential expression and potential role of SOCS1 and SOCS3 in Wallerian degeneration in injured peripheral nerve.</a> Exp. Neurol. 223, 173-182 (2010).</li><li>Hossain-Ibrahim, M. K., Rezajooi, K., Stallcup, W. B., Lieberman, A. R., Anderson, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+axonal+regeneration+in+the+central+and+peripheral+nervous+systems+of+the+NG2-deficient+mouse.">Analysis of axonal regeneration in the central and peripheral nervous systems of the NG2-deficient mouse.</a> BMC Neurosci. 8, 80-80 (2007).</li><li>Thornton, M. R., Mantovani, C., Birchall, M. A., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+N-CAM+and+N-cadherin+expression+in+axotomized+and+crushed+rat+sciatic+nerve.">Quantification of N-CAM and N-cadherin expression in axotomized and crushed rat sciatic nerve.</a> J. Anat. 206, 69-78 (2005).</li><li>Beer, G. M., Steurer, J., Meyer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardizing+nerve+crushes+with+a+non-serrated+clamp.">Standardizing nerve crushes with a non-serrated clamp.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 531-534 (2001).</li></ol>

我々は、クラッシュサイトの正確なマーキングを確実に完全に坐骨神経のときめきを取得する方法を提案した。前述のように、坐骨神経のときめきは、マウスとラットの末梢神経損傷の一般的なモデルです。ときめきの各メソッドは、その長所と短所がありますが、我々は、このメソッドは、簡単に特殊な装置（例えば特殊なクランプ、等）の最小値でマークされた完全なクラッシュを作り?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>第0000ブレードミニクリッパー</td><td> Roboz </td><td> RC-5903 </td></tr><tr><td> Nairさんヘアリムーバー（9オンス） </td><td>教会とドワイト株式会社</td><td> N / A </td></tr><tr><td> Betadine外科スクラブ（1ガロン） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 19066452 </td></tr><tr><td>眼軟膏（1オンス） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 19082795 </td></tr></tbody></table> 手術のツール： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> FST 250ホットビーズ滅菌器</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 18000から45 </td> &lt;/ TR&gt; <tr><td>アイリスはさみ（11センチ） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500216 </td></tr><tr><td>ポッツ·スミスピンセット（ストレート18センチメートル、1x2の歯） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11024から18 </td></tr><tr><td>マクファーソン·Vannasはさみ（5 mmのブレード） </td><td>世界の精密機器</td><td> 14124-G </td></tr><tr><td>デュモン＃5鉗子 - Dumoxel標準的なチップ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252から30 </td></tr><tr><td>デュモン＃45分の5鉗子 - Dumoxel標準的なチップ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11251から35 </td></tr><tr><td>ウルトラファインHemostats（ストレートスムーズ内側の表面） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 13020から12 </td></tr><tr><td>粉末活性炭（500グラム） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> C272-500 </td></tr><tr><td> C-1ニードル（滅菌、絹、黒、編んだ、とサイズ6から0縫合糸非吸収性、18 &quot;長さ、36のボックス） </td><td> Roboz </td><td> SUT-1073から1011 </td></tr><tr><td>反射クリッププライヤ（9ミリメートルクリップ用） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500345 </td></tr><tr><td> 9ミリメートルステンレス鋼反射クリップ（100/box） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500346 </td></tr></tbody></table> 動物のケア： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> 0.9％塩化ナトリウム注射液（防腐剤フリー、20 mL）で</td><td>ホスピーラ</td><td> 0409-4888-20 </td></tr><tr><td>柔軟性の高いプローブを用いた完全な恒温動物ブランケットシステム（ミディアム、115 VAC、60 Hz）を</td><td>ハーバード装置</td><td> 507222F </td></tr></tbody></table> 外科Platformとトラクター。 （地元の金物店で購入） <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/） </td><td> 量 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼のプラットフォーム（ミルド。〜12 &quot;X12&quot; X1 / 8 &quot;） </td><td> 1 </td></tr><tr><td>ボタンマグネット（例：EclipseのE825） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>ステンレスボルト（3 &quot;ロング、ボタンマグネットによって決定される直径） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>ステンレスナット（ボルトに合わせてサイズ） </td><td> 9 </td></tr><tr><td>ゴムバンド（ライトテンション） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>虫ピン（両端がフックをフォームにベント） </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> セミ薄く： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー&lt;/強い&gt; </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド（1キロ） </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム二塩基性無水（500グラム、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>ナトリウム一塩基性リン酸無水（1キロ、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド（50％、10×10 mL）で</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18431 </td></tr><tr><td>四酸化オスミウム（4％水溶液、10×10 mL）で</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18465 </td></tr><tr><td>プロピレンオキサイド（450 mL）を</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18601 </td></tr><tr><td>埋め込み812（キット、ハードブロック/高画像コントラストのために） </td><td>電子顕微鏡学</td><td> 14120 </td></tr><tr><td> ToluidiNEブルー（25グラム） </td><td>テッド·ペラ社</td><td> 19451 </td></tr></tbody></table>全体のマウント筋の調製と免疫組織化学： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド（1キロ） </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム二塩基性無水（500グラム、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>ナトリウム一塩基性リン酸無水（1キロ、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> 10％BSA希釈液/ブロッキング溶液（200 mL）で</td><td>キルケゴール＆ペリー·ラボラトリーズ社</td><td> 50-61-00 </td></tr><tr><td>トリトンX-100（100mL）中</td&gt; <td>ドットサイエンティフィック株式会社</td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td>グリシン、98％（1キロ） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC12007-0010 </td></tr><tr><td>組織テッククライオ-OCT化合物（12の場合、4オンスボトル） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 14-373-65 </td></tr><tr><td> Sylgardダウ170（2ポンドキット） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> NC9492579 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼の昆虫ピン、サイズ1（100/pkg） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26001から40 </td></tr><tr><td>テトラメチルローダミン-ブンガロトキシン（0.5 mg）を</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> T0195-.5MG </td></tr><tr><td> SMI-312（0.1 mL）をに対するマウスモノクローナル抗体</td><td> Covance </td><td> SMI-312R </td></tr><tr><td> SV2（0.1 mL）をに対するマウスモノクローナル抗体</td><td>発達研究ハイブリドーマバンク（DSHB） </td><td> SV2 </td></tr><tr><td>ウサギポリGAP-43に対するモノクローナル抗体</td><td>ノーバスバイオ</td><td> NB300-143 </td></tr><tr><td> Flourescein共役ヤギ抗マウスIgG、Fcγ受容サブクラス1特異的</td><td>ジャクソンイムノ</td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=115-095-205&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">11 5-095-205</a> </td></tr><tr><td> DyLight 649共役ロバ抗ウサギIgG </td><td>ジャクソンイムノ</td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=711-495-152&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">711-495-152</a> </td></tr><tr><td> 4 &#39;,6-ジアミジノ-2 - フェニルインドール（DAPI、dilactate、10 mg）を</td><td>インビトロジェン</td><td> D3571 </TD&gt; </tr><tr><td> Vectashield封入剤（10mL）中</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td> H-1000 </td></tr><tr><td> Superfrostプラス顕微鏡スライド（ホワイト、サイズ：75×25ミリメートル、144のパック） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Fisherfinestプレミアムカバーガラス（サイズ：40×22ミリメートル、1オンスのパック）。 </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12から548-5C </td></tr></tbody></table>

reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis

末梢神経系（PNS）の再生が広く、両方のヒトの疾患との関連性について検討されており、それによっておそらくCNS再生1の障害を照らすPNSニューロンによってマウントされた堅牢な回生応答を理解する。坐骨神経のときめき（軸索断裂）は、げっ歯類の2の末梢神経損傷の最も一般的なモデルの一つです。その再生が3,4に最適ですので、破砕の割り込みはすべての軸索がシュワン細胞基底層は保持されます。これは研究者が正確にシュワン細胞と基底層4の両方と相互作用する軸索成長の能力を研究することができます。ラットは、一般的に実験的な神経の粉砕のための好ましい動物モデルをされている。彼らは広く入手可能であり、その病変坐骨神経は、ヒトの神経病変5,4の合理的な近似値を提供しています。ラットの神経よりもサイズが小さくても、マウスの神経は、多くの類似した性質を持​​っています。最も重要なのはしかし、覚書Eモデルがあるためトランスジェニック系統の幅広い可用性、ますます貴重なものになりまし神経再生6、7の重要な個々の分子の詳細な解剖を可能にします。前の調査官は、単純な直角鉗子、チルド鉗子、止血鉗子、血管クランプ、および治験責任医師に設計されたクランプ8,9,10,11,12含む神経クラッシュやけがを生成するために複数のメソッドを使用しています。捜査官はまた、縫合糸、炭素粒子と蛍光ビーズ13,14,1含む損傷部位のマーキングの様々な方法を使用しています。我々は、クラッシュサイトのマーキングを正確かつ永続的な細かい止血鉗子とそれに続く炭素ときめきサイトマーキングを使用して再現性を完全に坐骨神経のときめきを得るための手法を説明します。坐骨神経挫滅手順の我々の記述の一部として、我々はまた我々はその後再生を定量化するために使用するマウント筋肉全体の比較的単純な方法が含まれている。

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Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

本報告では、マウス坐骨神経を粉砕する方法を説明します。このメソッドは、容易に利用可能な止血鉗子を使用して、簡単かつ再現性を完全に坐骨神経のときめきを生成します。さらに、坐骨神経挫滅後の神経再生の解析に適した筋肉全体のマウントを準備する方法について説明します。

ホールマウントマッスル分析による再現性のあるマウスの坐骨神経クラッシュと再生のその後の評価

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

ラット坐骨神経からの軸索原形質分離

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

網膜色素上皮の全マウントするためのマウスの眼の解剖

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

成人の全体のマウントの準備ショウジョウバエ</emジャイアント繊維染料注入のための>腹神経索

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

全マウント神経筋接合解析のための トランス対アブドミン筋 の解剖

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

マウスの胚感覚軸索投影のホールマウントイメージング

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

成体マウス蝸牛のホールマウント解剖および免疫蛍光

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

エレクトロポレーションによる齧歯類坐骨神経内のシュワン細胞へのインビボ遺伝子導入で

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

坐骨神経クラッシュ損傷のラットモデルにおける機能的評価のための3D運動学的解析

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

菌体、円周体、口蓋味覚芽の全山染色、可視化、分析

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...