Name: reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis
Uploaded: 2012-02-22T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами NIH K08NS065157 (для TAF) Кроме того, Пенн центра опорно-двигательного аппарата, премии Количество P30AR050950 из Национального института артрита, костно-мышечной и кожных заболеваний поддержала эту работу (TAF и Стивен С. Шерер). Наконец, Shriners Детская научно-исследовательский центр Начальное финансирование (TAF) поддержал эту работу. Мы хотели бы поблагодарить д-р Ен Джина Сына сначала демонстрируют все горе процедуры и Эми А. Кима за помощь в создании эскизов на рисунке 1.

1. Животное субъектов 1.1. Лечение <ol><li> Все животные процедуры должны выполняться с одобрения местных животных Учреждения по уходу и Комитет по этике и в соответствии с использованием и Комитета и Национального института здоровья принципы, меры, принимаемые для минимизац...

<ol>
	<li>Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neurotoxic+and+neuroprotective+agents+on+peripheral+nerve+regeneration+assayed+by+time-lapse+imaging+in+vivo.">Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).</li><li>Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinnervation+of+the+tibialis+anterior+following+sciatic+nerve+crush+injury:+A+confocal+microscopic+study+in+transgenic+mice.">Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice.</a> Exp. Neurol. 207, 64-74 (2007).</li><li>Amado, S., Sim&#241;es, M. J., Armada-da-Silva, P. A. S., Lu&#237;s, A. L., Shirosaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+hybrid+chitosan+membranes+and+N1E-115+cells+for+promoting+nerve+regeneration+in+an+axonotmesis+rat+model.">Use of hybrid chitosan membranes and N1E-115 cells for promoting nerve regeneration in an axonotmesis rat model.</a> Biomaterials. 29, 4409-4419 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Rodrigues, J. M., Geuna, S., Amado, S., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+cell+transplantation+effects+on+sciatic+nerve+regeneration+after+a+standardized+crush+injury+in+the+rat.">Neural cell transplantation effects on sciatic nerve regeneration after a standardized crush injury in the rat.</a> Microsurgery. 28, 458-470 (2008).</li><li>Lu&#237;s, A. L., Amado, S., Geuna, S., Rodrigues, J. M., Sim&#240;es, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp.">Long-term functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J. Neurosci. Methods. 163, 92-104 (2007).</li><li>Baptista, A. F., de Souza Gomes, J. R., Oliveira, J. T., Santos, S. M. G., Vannier-Santos, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+to+assess+function+after+sciatic+nerve+lesion+in+the+mouse+-+adaptation+of+the+sciatic+static+index.">A new approach to assess function after sciatic nerve lesion in the mouse - adaptation of the sciatic static index.</a> J. Neurosci. Methods. 161, 259-264 (2007).</li><li>Ronchi, G., Raimondo, S., Varej&#227;o, A. S. P., Tos, P., Perroteau, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+crush+injury+of+the+mouse+median+nerve.">Standardized crush injury of the mouse median nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 71-75 (2010).</li><li>Berg, A., Zelano, J., Cullheim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin+G-2+ligand+mRNA+is+downregulated+in+spinal+motoneurons+after+sciatic+nerve+lesion.">Netrin G-2 ligand mRNA is downregulated in spinal motoneurons after sciatic nerve lesion.</a> Neuroreport. 21, 782-785 (2010).</li><li>Girolami, E. I., Bouhy, D., Haber, M., Johnson, H., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+and+potential+role+of+SOCS1+and+SOCS3+in+Wallerian+degeneration+in+injured+peripheral+nerve.">Differential expression and potential role of SOCS1 and SOCS3 in Wallerian degeneration in injured peripheral nerve.</a> Exp. Neurol. 223, 173-182 (2010).</li><li>Hossain-Ibrahim, M. K., Rezajooi, K., Stallcup, W. B., Lieberman, A. R., Anderson, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+axonal+regeneration+in+the+central+and+peripheral+nervous+systems+of+the+NG2-deficient+mouse.">Analysis of axonal regeneration in the central and peripheral nervous systems of the NG2-deficient mouse.</a> BMC Neurosci. 8, 80-80 (2007).</li><li>Thornton, M. R., Mantovani, C., Birchall, M. A., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+N-CAM+and+N-cadherin+expression+in+axotomized+and+crushed+rat+sciatic+nerve.">Quantification of N-CAM and N-cadherin expression in axotomized and crushed rat sciatic nerve.</a> J. Anat. 206, 69-78 (2005).</li><li>Beer, G. M., Steurer, J., Meyer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardizing+nerve+crushes+with+a+non-serrated+clamp.">Standardizing nerve crushes with a non-serrated clamp.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 531-534 (2001).</li></ol>

Мы представили метод получения полного надежно седалищный нерв давка с точной маркировки давке сайта. Как упоминалось ранее, седалищный нерв давка общую модель повреждения периферического нерва у мышей и крыс. Хотя каждый метод имеет давка свои преимущества и недостатки, мы нашли это?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Наименование (описание / кол-во) </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Мини Clipper с № 0000 Лезвие </td><td> Roboz </td><td> RC-5903 </td></tr><tr><td> Наир для удаления волос (9 гр.) </td><td> Церковь и Дуайт завод, ОАО </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Бетадин хирургических скраб (1 галлон) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19066452 </td></tr><tr><td> Офтальмологическая мазь (1 унция). </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19082795 </td></tr></tbody></table> Хирургические инструменты: <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование (описание / кол-во) </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> FST 250 Горячий шарик стерилизатор </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 18000-45 </td> &lt;/ TR&gt; <tr><td> Iris Ножницы (11 см) </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 500216 </td></tr><tr><td> Поттс-Смит Пинцет (прямой, 18 см, 1x2 зубы) </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11024-18 </td></tr><tr><td> Макферсон-Vannas Ножницы (5 лезвий мм) </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 14124-G </td></tr><tr><td> Дюмон # 5 щипцы - Dumoxel Стандартный совет </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11252-30 </td></tr><tr><td> Дюмон # 5/45 Пинцет - Dumoxel Стандартный совет </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11251-35 </td></tr><tr><td> Ultra Fine Hemostats (прямые, гладкие поверхности внутри) </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 13020-12 </td></tr><tr><td> Угольный порошок (500 г) </td><td> Fisher Scientific </td><td> C272-500 </td></tr><tr><td> Размер 6-0 Швы с C-1 иглы (стерильный, шелк, черный, плетеные,Невсасываемые, 18 &quot;Length; коробка из 36) </td><td> Roboz </td><td> SUT-1073-11 </td></tr><tr><td> Reflex клип объекта применения (для 9 мм клипов) </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 500345 </td></tr><tr><td> 9-мм нержавеющей стали Reflex клипы (100/box) </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 500346 </td></tr></tbody></table> Animal Care: <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование (описание / кол-во) </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> 0,9% раствор хлорида натрия инъекций (без консервантов, 20 мл) </td><td> Hospira </td><td> 0409-4888-20 </td></tr><tr><td> Полное Homeothermic системы одеяло с гибкий зонд (средний, 115 В переменного тока, 60 Гц) </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> 507222F </td></tr></tbody></table> Хирургическое Platforм и ретракторы: (Куплены в местном хозяйственном магазине) <table border="1"><tbody><tr><td> Имя (описание /) </td><td> Количество </td></tr><tr><td> Платформа из нержавеющей стали (молотый; ~ 12 &quot;x12&quot; x1 / 8 &quot;) </td><td> 1 </td></tr><tr><td> Кнопка магниты (Пример: Eclipse E825) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> Болты из нержавеющей стали (3: &quot;Да, Диаметр Определяется магнитов Button) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> Гайки из нержавеющей стали (размер подходит для болтов) </td><td> 9 </td></tr><tr><td> Резинки (Light напряжения) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> Насекомые выводов (с обеих сторон Бент к форме крючки) </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> Полу-Thins: <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование (описание / кол-во) </td><td> Поставщик &lt;/ STRONG&gt; </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Параформальдегид (1 кг) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1 кг </td></tr><tr><td> Диаммоний фосфат натрия безводный (500 г, для приготовления фосфатный буфер) </td><td> Fisher Scientific </td><td> S375-500 </td></tr><tr><td> Одноосновного фосфата натрия безводный (1 кг, используются для подготовки фосфатный буфер) </td><td> Fisher Scientific </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> Глутаральдегид (50%, 10 х 10 мл) </td><td> Тед Пелла, Inc </td><td> 18431 </td></tr><tr><td> Осмия (4% водный, 10 х 10 мл) </td><td> Тед Пелла, Inc </td><td> 18465 </td></tr><tr><td> Окиси пропилена (450 мл) </td><td> Тед Пелла, Inc </td><td> 18601 </td></tr><tr><td> Код для вставки 812 (комплект для жестких блоков / высокой контрастностью изображения) </td><td> Электронная микроскопия наук </td><td> 14120 </td></tr><tr><td> Toluidiпе Blue (25 г) </td><td> Тед Пелла, Inc </td><td> 19451 </td></tr></tbody></table> Всего горы мышц Подготовка и иммуногистохимического: <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование (описание / кол-во) </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Параформальдегид (1 кг) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1 кг </td></tr><tr><td> Диаммоний фосфат натрия безводный (500 г, для приготовления фосфатный буфер) </td><td> Fisher Scientific </td><td> S375-500 </td></tr><tr><td> Одноосновного фосфата натрия безводный (1 кг, используются для подготовки фосфатный буфер) </td><td> Fisher Scientific </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> 10% BSA Разбавитель / Блокирование решения (200 мл) </td><td> Киркегор &amp; Perry Laboratories, Inc </td><td> 50-61-00 </td></tr><tr><td> Тритон Х-100 (100 мл) </td&gt; <td> Dot Научно инкорпорейтед </td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Глицин, 98% (1 кг) </td><td> Fisher Scientific </td><td> AC12007-0010 </td></tr><tr><td> Ткань-Tek Cryo-OCT соединений (на примере 12, 4 унции бутылки) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-373-65 </td></tr><tr><td> Sylgard DOW 170 (2 фунта Kit) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9492579 </td></tr><tr><td> Нержавеющая сталь насекомых пальцы, размер 1 (100/pkg) </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 26001-40 </td></tr><tr><td> Tetramethylrhodamine-A-бунгаротоксина (0,5 мг) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T0195-.5MG </td></tr><tr><td> Мышь моноклональных антител против SMI-312 (0,1 мл) </td><td> Covance </td><td> SMI-312R </td></tr><tr><td> Мышь моноклональных антител против SV2 (0,1 мл) </td><td> Развития исследований Hybridoma банка (DSHB) </td><td> SV2 </td></tr><tr><td> Кролик Polyклонального антитела против GAP-43 </td><td> Novus биологические </td><td> NB300-143 </td></tr><tr><td> Flourescein сопряженных антимышиного IgG, Fcγ Подкласс 1 Удельный </td><td> Джексон ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=115-095-205&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">11 5-095-205</a> </td></tr><tr><td> DyLight 649 Сопряженные Donkey Anti-IgG кролика </td><td> Джексон ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=711-495-152&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">711-495-152</a> </td></tr><tr><td> 4 &#39;,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI, dilactate, 10 мг) </td><td> Invitrogen </td><td> D3571 </TD&gt; </tr><tr><td> Vectashield Монтаж среднего (10 мл) </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-1000 </td></tr><tr><td> SuperFrost Plus микроскопа (белый, Размеры: 75 х 25 мм, в упаковке 144) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Fisherfinest Премиум покровные стекла (размер: 40 х 22 мм, в упаковке 1 гр.) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-548-5C </td></tr></tbody></table>

reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis

Регенерация в периферической нервной системы (ПНС) широко изучается как для его отношение к болезни человека и понять, надежная регенеративный ответ монтируется нейронов ПНС что, возможно, освещение неудач ЦНС регенерации 1. Седалищный нерв давке (axonotmesis) является одним из наиболее распространенных моделей повреждения периферического нерва у грызунов 2. Дробление прерывания все аксоны, но Шванн клетки базальной пластинки сохраняются, так что восстановление оптимального 3,4. Это позволяет исследователю изучать именно способность растущих аксонов взаимодействовать как с клетки Шванн и базальной пластинки 4. Крысы в ​​целом были предпочтительным животных моделей для экспериментальных давке нерва. Они широко доступны и их пораженном седалищного нерва дает разумное приближение человека поражения нерва 5,4. Несмотря на меньший размер, чем нерва крысы, мыши нерв имеет много схожих качеств. Самое главное, хотя, меморандумы о взаимопониманииэлектронной модели становятся все более ценными из-за широкой доступности трансгенных линий теперь позволяет для детального расчленения отдельных молекул важны для регенерации нерва 6, 7. До исследователи использовали несколько методов для получения давке нерва или травмы, включая простой угловой пинцет, охлажденные щипцы, пинцеты гемостаза, сосудистые зажимы, и следователь-зажимы предназначены 8,9,10,11,12. Исследователи также использовали различные методы маркировки в месте повреждения, включая шовный материал, частицы углерода и люминесцентные бусины 13,14,1. Мы описываем наш метод получения полного воспроизводимо седалищного нерва с поклонников точных и постоянных маркировки краш-сайт с помощью тонкой гемостаза щипцы и последующих углерода краш-сайт маркировки. В рамках нашего описания седалищного нерва процедура давки мы также включили относительно простой метод мышечного все смонтировать мы используем, чтобы в дальнейшем количественно регенерации.

Watch this Scientific Journal Video about Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis at JoVE.com

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

В этом докладе мы описываем способ раздавить мышь седалищного нерва. Этот метод использует доступны гемостаза щипцы и легко воспроизводимым и производит полный седалищный нерв давка. Кроме того, мы опишем способ подготовить мышцы все крепления подходят для анализа регенерации нерва после седалищный нерв давка.

Воспроизводимые мыши седалищного нерва и Давка Последующие оценки регенерации полного анализа горы мышц

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Аксоплазме Изоляция от седалищного нерва крысы

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Препарирование Мышь Око за полного горе пигментный эпителий сетчатки

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Всего Подготовка горе взрослых Drosophila Брюшной нервной для инъекций Гигантские Dye Волоконно

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Рассечение мышц Transversus Abdominis для анализа нервно-мышечной развязки

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Оценка сосудистой регенерации в ЦНС Использование мыши Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Всего монтажа Визуализация эмбриона мыши Сенсорная Axon прогнозам

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

В естественных условиях переноса гена к шванновских клеток в нерве Грызун седалищного путем электропорации

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D кинематический анализ для функциональной оценки в Крыса Модель Сиатический нерв Давка травмы

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Окрашивание, визуализация и анализ грибковых, циркумваллятных и нёбных вкусовых рецепторов

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...