Name: therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles
Uploaded: 2012-01-04T13:00:00
Duration: 8 min 35 s
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이 연구는 암 나노기술 우수에 대한 암 센터 (CCNE) 부여 U54 - CA151881에 대한 나노기술의 국립 암 연구소의 연합에 의해 지원되었다.

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	<li>Vimalachandran, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+prevention+of+pancreatic+cancer.">Genetics and prevention of pancreatic cancer.</a> Cancer. Control. 11, 6-14 (2004).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+evaluation+of+thiol-modified+gelatin+nanoparticles+for+intracellular+DNA+delivery+in+response+to+glutathione.">Preparation and evaluation of thiol-modified gelatin nanoparticles for intracellular DNA delivery in response to glutathione.</a> Bioconjug. Chem. 16, 1423-1432 (2005).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ethylene+glycol)-modified+thiolated+gelatin+nanoparticles+for+glutathione-responsive+intracellular+DNA+delivery.">Poly(ethylene glycol)-modified thiolated gelatin nanoparticles for glutathione-responsive intracellular DNA delivery.</a> Nanomedicine. 3, 32-42 (2007).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenic+gene+therapy+with+systemically+administered+sFlt-1+plasmid+DNA+in+engineered+gelatin-based+nanovectors.">Antiangiogenic gene therapy with systemically administered sFlt-1 plasmid DNA in engineered gelatin-based nanovectors.</a> Cancer. Gene. Ther. 14, 488-498 (2007).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+pharmacokinetic+analysis+of+long-circulating+thiolated+gelatin+nanoparticles+following+systemic+administration+in+breast+cancer-bearing+mice.">Biodistribution and pharmacokinetic analysis of long-circulating thiolated gelatin nanoparticles following systemic administration in breast cancer-bearing mice.</a> J. Pharm. Sci. 96, 397-407 (2007).</li><li>Kaul, G., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeted+gene+delivery+using+poly(ethylene+glycol)-modified+gelatin+nanoparticles:+in+vitro+and+in+vivo+studies.">Tumor-targeted gene delivery using poly(ethylene glycol)-modified gelatin nanoparticles: in vitro and in vivo studies.</a> Pharm. Res. 22, 951-961 (2005).</li><li>Bardeesy, N., DePinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+biology+and+genetics.">Pancreatic cancer biology and genetics.</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 897-909 (2002).</li><li>Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+peptide+ligand+of+epidermal+growth+factor+receptor+for+targeted+delivery+of+therapeutics.">Identification and characterization of a novel peptide ligand of epidermal growth factor receptor for targeted delivery of therapeutics.</a> FASEB. J. 19, 1978-1985 (2005).</li><li>McCormick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+therapy:+fringe+or+cutting+edge.">Cancer gene therapy: fringe or cutting edge.</a> Nat. Rev. Cancer. 1, 130-141 (2001).</li><li>Green, D. R., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+functions+of+the+tumour+suppressor+p53.">Cytoplasmic functions of the tumour suppressor p53.</a> Nature. 458, 1127-1130 (2009).</li><li>Barton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormalities+of+the+p53+tumour+suppressor+gene+in+human+pancreatic+cancer.">Abnormalities of the p53 tumour suppressor gene in human pancreatic cancer.</a> Br. J. Cancer. 64, 1076-1082 (1991).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

제어 및 EGFR 대상 thiolated 젤라틴 nanoparticles는 효율적인 DNA의 캡슐화 및 안정성과 함께 준비했다. 이러한 시스템의 모든 입자 크기는 직경 150-250 nm의 범위에 있었다. 제타 전위는이 시스템이 약간 부정적인 시스템입니다 것을 증명했다. SEM 분석, nanoparticles의 크기는 Zetasizer 결과와 동일한되었습니다. ESCA 분석 PEG와 펩타이드 표면 수정을 확인 수 있습니다. 서양 얼룩 분석 Panc - 1 세포가 높은 EGFR 발현 수준을했고이 셀 라인은 체외 연구에서 사용되었다 것으로 나타났다. PEI에 비해 제어 및 표면 수정 nanoparticles 모두 Panc - 1 세포에서 상대적으로 덜 세포 독성되었습니다. 세포 밀매 연구 빠른 이해와 Panc - 1 세포에서 EGFR 타겟 nanoparticles의 플라스미드 릴리스를 보여주었다. EGFR 타겟 nanoparticles로 표현 기자 plasmids의 DNA의 배달의 최고 수준의 결과Lipofectin - complexed DNA 등 다른 컨트롤에 상대적으로 GFP의 표현. 동일한 시스템으로 wt - p53의 플라스미드와 함께 transfection은 하류 apoptotic 통로 및 Panc - 1 세포에서 유도된 apoptosis 빠른 울렸어요. 이러한 예비 결과는 EGFR 타겟 thiolated 젤라틴 nanoparticles는 췌장암에 대한 치료로 유전자 치료를위한 안전하고 효율적인 유전자 전달 시스템으로 사용할 수있는 것이 좋습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 타입 B 젤라틴, 블룸 225 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> G9391 </td><td></td></tr><tr><td> 2 iminothiolane 하이드로 클로라이드 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> I6256 </td><td></td></tr><tr><td> pEGFP - N1 플라스미드 </td><td> Elim Biopharm </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> pORF - hp53 E. 대장균 </td><td> Invivogen </td><td> porf - hp53 </td><td></td></tr><tr><td> Glyoxal 솔루션 (H 2 O에 40wt. %) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 128,465 </td><td></td></tr><tr><td> 글리신 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 410225 - 250G </td><td></td></tr><tr><td> QIA 필터 플라스미드 메가 키트 </td><td> QiageN </td><td> 12,281 </td><td></td></tr><tr><td> 베크 만 LE 80K의 초원 심 분리기 </td><td> 베크 만 </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> FreeZone 6 리터 콘솔 드라이 시스템을 고정 </td><td> Labconco </td><td> 7,753,020 </td><td></td></tr><tr><td> MPEG - SCM, MW 2000 다 </td><td> Laysan </td><td> MPEG - SCM - 2K - 1g </td><td></td></tr><tr><td> 말 - PEG - SCM, MW 2000 다 </td><td> Jenkem 기술 </td><td> A5001 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> Zetasizer 나노 </td><td> Malvern </td><td> Zetasizer 나노 ZS </td><td></td></tr><tr><td> 전자 현미경 스캐닝 히타치 4800 전계 방출 </td><td> 히타치 </td><td> S - 4800 UHR FE - SEM </td><td></td></tr><tr><td> 양의 - IT PicoGreen dsDNA 시약 및 키트 </td><td> Invitrogen </td><td> P7589 </td><td></td></tr><tr><td> Lipofectin Transfection 시약 </td><td> Invitrogen </td><td> 18292011 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Mediatech cellgro </td><td> 10 013 CM </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Mediatech cellgro </td><td> 50 020 PB </td><td></td></tr><tr><td> 피어스 BCA 단백질 분석 키트 </td><td> 써모 과학 </td><td> 23,225 </td><td></td></tr><tr><td> iBlot 드라이 Blotting 시스템 </td><td> Invitrogen </td><td> IB1001 </td><td></td></tr><tr><td> XCell SureLock 미니 셀 및 XCell II 얼룩 모듈 키트 CE 마크 </td><td> Invitrogen </td><td> EI0002 </td><td></td></tr><tr><td> 피어스 ECL 웨스턴 기판 Blotting </td><td> 써모 과학 </td><td> 32,109 </td><td></td></tr><tr><td> 코닥 디지털 X - 선 표본 (DXS) 시스템 </td><td> 코닥 </td><td> N / A </td><td>; </td></tr><tr><td> CellTiter 96 AQ ueous 하나의 솔루션 세포 증식 분석 (MTS) </td><td> Promega </td><td> G3580 </td><td></td></tr><tr><td> BioTek SynergyHT 플레이트 리더 </td><td> BioTek </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop 2000 </td><td> 써모 과학 </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> 한 단계 RT - PCR 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 210,212 </td><td></td></tr><tr><td> 염색질은 응축 / 분리막 투과율 / 죽은 세포 Apoptosis 키트 </td><td> Invitrogen </td><td> V23201 </td><td></td></tr><tr><td> APO - ONE 동차 Caspase - 7분의 3 분석 키트 </td><td> Promega </td><td> G7790 </td><td></td></tr><tr><td> Hybaid PCR 스프린트 열 자전거 타는 사람 </td><td> 써모 과학 </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> EGF 수용체 항체 </td><td> 세포신호 </td><td> 2232 </td><td></td></tr><tr><td> β - 굴지의 항체 </td><td> 세포 신호 </td><td> 4967 </td><td></td></tr><tr><td> 안티 - 토끼 IgG, HRP - 연결된 항체 </td><td> 세포 신호 </td><td> 7074 </td><td></td></tr><tr><td> 마우스 단클론 항체 GFP </td><td> Novus 체액 </td><td> NB600 - 597 </td><td></td></tr><tr><td> 염소 Polyclonal 항체 GFP (알카라인 인산 가수 분해 효소) </td><td> Novus 체액 </td><td> NB600 - 1502 </td><td></td></tr><tr><td> 인산 가수 분해 효소 기판 키트 </td><td> 써모 과학 </td><td> 37,620 </td><td></td></tr></tbody></table>

therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles

32,000 명 이상의 환자가 매년 미국에서 췌장암 진단을하고 있으며이 질병은 매우 높은 사망률 1 연결되어 있습니다. 긴급 필요 췌장암 환자의 음침한 생존 통계에 향상시킬 수있는 소설 임상 - 번역 치료 전략을 개발하기 위해 존재합니다. 암의 유전자 치료는 엄청난 약속을 보여주었다 있지만, 가장 큰 문제는 지속적인 transgene 발현으로 이어질 수있는 안전하고 효과적인 전달 시스템의 개발에 있습니다. 젤라틴은 널리 음식과 의약품에 사용되는 가장 다용도 천연 생체 고분자 중 하나입니다. 저희 연구실에서 이전 연구는 B 타입 젤라틴 실제 세포내 전달시 플라스미드 향상된 transfection 효율의 supercoiled 구조를 보존 DNA를 캡슐 수있는 것으로 나타났습니다. 젤라틴의 thiolation으로 sulfhydryl 그룹은 고분자에 도입 F 것이 될 수전체 복잡하고 한번 이황화 결합을 안정화 nanoparticles 이내 orm의 이황화 결합은 cytosol에서 글루타티온의 존재로 인해 고장, 페이로드는 2-5 출시 것입니다. 폴리 (에틸렌 글리콜) (PEG) - 수정 GENS, 체계 유통 관리, 긴 순환 시간을 제공하며 우선적으로 향상된 투자율 및 유지 효과 6 neovasculature의 하이퍼 투자율에 의한 종양 미사를 대상으로하고 있습니다. 연구 Panc - 1 인간의 췌장 선암 세포 7 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 표현을 통해 보여주었다. 적극적으로 췌장암 세포주를 대상으로하기 위해서는 EGFR 특정 펩타이드가 PEG 스페이서를 통해 입자 표면에 복합되었습니다 8. 대부분의 안티 종양 유전자 요법은 9 세포에서 프로 apoptotic 기능을 복원하는 등 야생 유형 p53의 (wt - p53의)와 같은 종양 억제 유전자,의 관리에 초점을 맞추고있다 </&gt;를 한모금. 중요한 신호 apoptosis를 조절 세포 성장 경로, 세포주기 체포, 신진 대사 및 기타 프로세스 10 p53의 메커니즘 기능. 췌장암에서 대부분의 세포가 apoptotic 활동의 손실을 초래하는 p53 단백질에 돌연변이 있습니다. wt - p53의 도입과 함께, apoptosis는 수리 수 있으며 추가로 암 세포를 11 세포 죽음을 트리거합니다. 위의 근거를 바탕으로, 우리는 EGFR이 wt - p53의 유전자 전달 및 Panc - 1 세포에서 평가 배달 효율성 및 transfection을위한 펩타이드 - 수정 thiolated 젤라틴 nanoparticles을 대상으로 설계했습니다.

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Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

B 타입 젤라틴 기반 공학 nanovectors 시스템 (GENS)은 췌장암의 치료 체계 유전자 전달 및 transfection을 위해 개발되었습니다. 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) nanparticles의 표면에 특정 펩타이드와 수정함으로써, 그들은 EGFR 수용체에서 대상 수와 같은 높은 세포내 글루타티온의 농도로, 환경을 감소 밑에 플라스미드 놓습니다.

표피 성장 인자를 사용하여 인간의 췌장 암 세포의 유전자 전달 및 Transfection은 다행 기반 엔지니어링된 Nanovectors를 수용체 타겟

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

고분자 유전자 배달에 대한 평가는 Nanoparticle 추적 분석 및 높은 처리량 유동 세포 계측법에 의해 나노 입자

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

연구

생체공학

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

근육 재생의 마우스 모델에서 유도 만능 줄기 세포 유래 메소안지오블라스트 와 같은 근생 성 전구의 이식

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Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

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Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

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상호 현미경을 사용하여 본래 세포의 표피 성장 인자 수용체의 화학 양론을 공부

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양이온과 음이온 리포좀을 사용 CNS에 치료의 siRNA 배달

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