Name: therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles
Uploaded: 2012-01-04T13:00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü Kanser Kanser Nanoteknoloji Mükemmeliyet Merkezi (CCNE) hibe U54-CA151881 Nanoteknoloji Alliance tarafından desteklenmiştir.

<ol>
	<li>Vimalachandran, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+prevention+of+pancreatic+cancer.">Genetics and prevention of pancreatic cancer.</a> Cancer. Control. 11, 6-14 (2004).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+evaluation+of+thiol-modified+gelatin+nanoparticles+for+intracellular+DNA+delivery+in+response+to+glutathione.">Preparation and evaluation of thiol-modified gelatin nanoparticles for intracellular DNA delivery in response to glutathione.</a> Bioconjug. Chem. 16, 1423-1432 (2005).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ethylene+glycol)-modified+thiolated+gelatin+nanoparticles+for+glutathione-responsive+intracellular+DNA+delivery.">Poly(ethylene glycol)-modified thiolated gelatin nanoparticles for glutathione-responsive intracellular DNA delivery.</a> Nanomedicine. 3, 32-42 (2007).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenic+gene+therapy+with+systemically+administered+sFlt-1+plasmid+DNA+in+engineered+gelatin-based+nanovectors.">Antiangiogenic gene therapy with systemically administered sFlt-1 plasmid DNA in engineered gelatin-based nanovectors.</a> Cancer. Gene. Ther. 14, 488-498 (2007).</li><li>Kommareddy, S., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+pharmacokinetic+analysis+of+long-circulating+thiolated+gelatin+nanoparticles+following+systemic+administration+in+breast+cancer-bearing+mice.">Biodistribution and pharmacokinetic analysis of long-circulating thiolated gelatin nanoparticles following systemic administration in breast cancer-bearing mice.</a> J. Pharm. Sci. 96, 397-407 (2007).</li><li>Kaul, G., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeted+gene+delivery+using+poly(ethylene+glycol)-modified+gelatin+nanoparticles:+in+vitro+and+in+vivo+studies.">Tumor-targeted gene delivery using poly(ethylene glycol)-modified gelatin nanoparticles: in vitro and in vivo studies.</a> Pharm. Res. 22, 951-961 (2005).</li><li>Bardeesy, N., DePinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+biology+and+genetics.">Pancreatic cancer biology and genetics.</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 897-909 (2002).</li><li>Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+novel+peptide+ligand+of+epidermal+growth+factor+receptor+for+targeted+delivery+of+therapeutics.">Identification and characterization of a novel peptide ligand of epidermal growth factor receptor for targeted delivery of therapeutics.</a> FASEB. J. 19, 1978-1985 (2005).</li><li>McCormick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+therapy:+fringe+or+cutting+edge.">Cancer gene therapy: fringe or cutting edge.</a> Nat. Rev. Cancer. 1, 130-141 (2001).</li><li>Green, D. R., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+functions+of+the+tumour+suppressor+p53.">Cytoplasmic functions of the tumour suppressor p53.</a> Nature. 458, 1127-1130 (2009).</li><li>Barton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormalities+of+the+p53+tumour+suppressor+gene+in+human+pancreatic+cancer.">Abnormalities of the p53 tumour suppressor gene in human pancreatic cancer.</a> Br. J. Cancer. 64, 1076-1082 (1991).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Kontrol ve EGFR hedef thiolated jelatin nanopartiküller verimli DNA kapsülleme ve istikrar ile hazırlanmıştır. Tüm bu sistemlerin parçacık boyutları, çapı 150-250 nm aralığında. Zeta potansiyeli, bu sistemi biraz daha negatif bir sistem olduğunu kanıtladı. SEM analizi ile, nanoparçacıkların boyutları Zetasizer sonuç ile aynıydı. ESCA analizi, PEG ve peptid yüzey modifikasyonu onaylamak. Western Blot analizi Panc-1 hücreleri yüksek EGFR ekspresyon düzeyleri vardı ve bu hücre hattında in vitro çalışmalar için kullanılmış olduğunu gösterdi. Panc-1 hücreleri ve kontrol yüzeyi modifiye nanopartiküller PEI ile karşılaştırıldığında göreceli olarak daha az sitotoksik edildi. Hücre ticareti çalışmaları hızlı alımı ve EGFR-hedefli nanoparçacıkların Panc-1 hücrelerinde plazmid sürümü gösterdi. EGFR-hedefli nanopartiküller ifade muhabiri plazmid DNA Teslim en yüksek seviyelerindeLipofectin-complexed DNA da dahil olmak üzere diğer denetimleri, GFP ifade. Wt-p53 plazmid ile aynı sistem ile transfeksiyon mansap apoptotik yolağı ve Panc-1 hücreleri kaynaklı hızlı apoptozu tetikledi. Bu ön sonuçlar EGFR-hedefli thiolated jelatin nanopartiküller, pankreas kanseri için bir tedavi olarak gen tedavisi için güvenli ve verimli bir DNA dağıtım sistemi olarak hizmet verebilir öneririz.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> B Tipi jelatin, Bloom 225 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9391 </td><td></td></tr><tr><td> 2-iminothiolane hidroklorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> I6256 </td><td></td></tr><tr><td> plazmid pEGFP-N1 </td><td> Elim Biopharm </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> pORF-hp53 E. coli </td><td> Invivogen </td><td> porf-hp53 </td><td></td></tr><tr><td> Glyoxal çözümü (H 2 O 40wt.%) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 128465 </td><td></td></tr><tr><td> Glisin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 410.225-250G </td><td></td></tr><tr><td> QIA filtre Plazmid Mega kiti </td><td> Qiagen </td><td> 12281 </td><td></td></tr><tr><td> Beckman LE 80K ultrasantrifüjdeki </td><td> Beckman </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> FreeZone 6 Litre Konsol Kuru Sistemleri Freeze </td><td> Labconco </td><td> 7753020 </td><td></td></tr><tr><td> MPEG-SCM, MW 2.000 Da </td><td> Laysan </td><td> MPEG-SCM-2K-1g </td><td></td></tr><tr><td> MAL-PEG-SCM, 2.000 MW Da </td><td> Jenkem Teknoloji </td><td> A5001-1 </td><td></td></tr><tr><td> Zetasizer Nano </td><td> Malvern </td><td> Zetasizer Nano ZS </td><td></td></tr><tr><td> Hitachi 4800 alan emisyonu taramalı elektron mikroskobu </td><td> Hitachi </td><td> S-4800 UHR FE-SEM </td><td></td></tr><tr><td> Quant-iT PicoGreen dsDNA Reaktif ve Kitleri </td><td> Invitrogen </td><td> P7589 </td><td></td></tr><tr><td> Lipofectin Transfeksiyon Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> 18292011 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Mediatech cellgro </td><td> 10 013 CM </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Mediatech cellgro </td><td> 50 020 PB </td><td></td></tr><tr><td> Pierce BCA Protein Testi Kiti </td><td> Thermo Scientific </td><td> 23225 </td><td></td></tr><tr><td> iBlot Kuru Blot Sistemi </td><td> Invitrogen </td><td> IB1001 </td><td></td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Hücre ve XCell II Blot Modülü Kit CE İşareti </td><td> Invitrogen </td><td> EI0002 </td><td></td></tr><tr><td> Pierce ECL Batı Yüzey Blotting </td><td> Thermo Scientific </td><td> 32109 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Dijital X-ray Örnek (DXS) Sistemi </td><td> Kodak </td><td> N / A </td><td>; </td></tr><tr><td> CellTiter 96 AQ ueous Tek Çözüm Hücre Çoğalması Assay (MTS) </td><td> Promega </td><td> G3580 </td><td></td></tr><tr><td> BioTek SynergyHT plaka okuyucu </td><td> BioTek </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop 2000 </td><td> Thermo Scientific </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Tek aşamalı RT-PCR kiti </td><td> Qiagen </td><td> 210212 </td><td></td></tr><tr><td> Kromatin Yoğunlaşma / Membran Geçirgenlik / Ölü Hücre Apoptoz Kiti </td><td> Invitrogen </td><td> V23201 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-ONE Homojen Kaspaz-3 / 7 Assay kiti </td><td> Promega </td><td> G7790 </td><td></td></tr><tr><td> Hybaid PCR Sprint Thermal Cycler </td><td> Thermo Scientific </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> EGF Reseptör Antikor </td><td> Hücresinyalizasyon </td><td> 2232 </td><td></td></tr><tr><td> β-Aktin Antikor </td><td> Hücre içi sinyal </td><td> 4967 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-tavşan IgG, HRP-bağlantılı Antikor </td><td> Hücre içi sinyal </td><td> 7074 </td><td></td></tr><tr><td> Fare Monoklonal GFP Antikor </td><td> Novus Biyolojik </td><td> NB600-597 </td><td></td></tr><tr><td> Keçi Poliklonal GFP antikor (Alkalin Fosfataz) </td><td> Novus Biyolojik </td><td> NB600-1502 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfataz Yüzey Kiti </td><td> Thermo Scientific </td><td> 37620 </td><td></td></tr></tbody></table>

therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles

32.000 &#39;den fazla hasta yılda Amerika Birleşik Devletleri, pankreas kanseri tanısı ve hastalığın, çok yüksek mortalite 1 ile ilişkilidir. Acil ihtiyaç, pankreas kanseri hastalarının kasvetli hayatta kalma istatistiklerine artırabilir roman klinik olarak çevrilebilir tedavi stratejileri geliştirmek için vardır. Kanser gen tedavisi muazzam bir söz gösterilmiş olsa da, en büyük zorluk, sürekli transgen ekspresyonu yol açabilir, güvenli ve etkili bir dağıtım sistemi gelişimi. Jelatin, gıda ve ilaç ürünlerinde yaygın olarak kullanılan çok yönlü doğal biopolimer biridir. Laboratuvarımızda Önceki çalışmalar, B tipi jelatin fiziksel DNA, hücre içi teslimat üzerine plazmid ve geliştirilmiş transfeksiyon verimlilik supercoiled yapısı korunarak kapsülleyen olduğunu göstermiştir. Jelatin thiolation sülfidril grupları polimer ve f. Olabilirnanopartiküller, tüm kompleks ve bir kez disülfit bağ dengeler içinde orm disülfit bağ cytosolda glutatyon varlığı nedeniyle bozuldu, yükü 2-5 serbest olacaktır. Poli (etilen glikol) (PEG) modifiye gens, sistemik dolaşıma uygulanan, uzun tirajlı kez sağlar ve gelişmiş geçirgenlik ve saklama etkisi 6 neovaskülarizasyon hiper geçirgenliği nedeniyle tümör kitlesi tercihen hedeflemektedir. Çalışmalar Panc-1 insan pankreatik adenokarsinoma hücreleri 7 epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR)-ifade göstermiştir. Pankreas kanseri hücre hattı aktif olarak hedef için, EGFR spesifik peptid PEG ayırıcı üzerinden parçacık yüzey üzerine konjuge 8 Çoğu anti-tümör gen terapileri, vahşi tip p53 (wt-P53) olarak 9 hücreleri pro-apoptotik fonksiyonu geri tümör baskılayıcı genler, yönetim üzerinde duruldu . </&gt; destek. Kritik bir sinyal apoptozis düzenleyen hücre büyümesi yolağı, hücre döngüsü tutuklama, metabolizma ve diğer işlemler 10 olarak p53 mekanizması fonksiyonları. Pankreas kanseri, en hücrelerin apoptotik aktivite kaybına neden, p53 proteini mutasyonlar var. Wt-p53 giriş apoptozis tamir edilebilir ve kanser hücrelerini 11 daha fazla hücre ölümü tetikler . Yukarıdaki mantığı dayanarak, EGFR wt-p53 geni teslimat ve Panc-1 hücreleri değerlendirilir teslim verimlilik ve transfeksiyon peptid modifiye thiolated jelatin nanopartiküller yönelik tasarladık.

Watch this Scientific Journal Video about Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles at JoVE.com

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

B Tipi jelatin tabanlı mühendislik nanovectors sistemi (gens), pankreas kanseri tedavisi sistemik gen teslimat ve transfeksiyon için geliştirilmiştir. Epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR) nanparticles yüzey üzerinde belirli peptid değişiklik, EGFR reseptör hedef olabilir ve plazmid gibi yüksek intrasellüler glutatyon konsantrasyonları olarak azaltılması, çevre altında serbest.

İnsan Pankreas Kanseri Hücrelerinde Epidermal Büyüme Faktörü kullanarak Gen Teslimat ve Transfeksiyon Jelatin Tabanlı Engineered Nanovectors Reseptör-hedefli

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Polimerik Gen Taşıyıcı Değerlendirilmesi Nanoparçacık İzleme Analizi ve Yüksek throughput Flow Sitometri tarafından Nanopartiküller

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

Kas Yenilenmesinin Fare Modellerinde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre türevi Mezoangioblast benzeri Miyojenik Progenitörlerin Nakli

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Electrospinning Growth Factor Releasing Microspheres into Fibrous Scaffolds

Lifli iskelelerinin içine Microspheres ibra Elektroeğirme Büyüme Faktörü

This procedure describes a method to fabricate a multifaceted substrate to direct nerve cell growth.  This system incorporates mechanical, topographical, ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Korelatif Mikroskopisi kullanılarak sağlam hücrelerde Epidermal Büyüme Faktörü Alıcısının stokiyometrisinden incelenmesi

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

Katyonik ve Anyonik lipozomlar kullanılarak merkezi sinir sistemine Terapötik siRNA teslimi

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

Heparin Binding Domain osteojenik Büyüme Faktörü Teslim polielektrolit Kompleksi

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

Manufacture and Drug Delivery Applications of Silk Nanoparticles

İpek Nanopartiküller imalatı ve İlaç Dağıtım Uygulamaları

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and ...

Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation

Sinir Büyümesi Faktörü Kapsüllemesi için Yeni HDL&#39;yi taklit eden Nanopartiküllerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

The objective of this article is to introduce preparation and characterization methods for nerve growth factor (NGF)-loaded, high-density, lipoprotein ...

Designing Porous Silicon Films as Carriers of Nerve Growth Factor

Gözenekli silisyum filmleri sinir büyüme faktörü taşıyıcı olarak tasarlama

Despite the great potential of NGF for treating neurodegenerative diseases, its therapeutic administration represents a significant challenge as the ...