Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Forfatterne takker medlemmer Lwigale laboratorium for kritik af manuskriptet. SLG understøttes af en Ruth L. Kirschstein NRSA Fellowship fra National Eye Institute (F32 EY02167301). Pyl er støttet af National Eye Institute (EY018050).

1. Inkuber kylling og vagtelæg til den ønskede scene For HH9 embryoner variere typiske inkubationstider fra 29-33 timer ved 38 ° C. 63 <ol><li> Vask eventuelle rester fra æggene med lunkent vand. </li><li> Arranger kylling æg på bakken vandret. Markerer opad med blyant, hvilket vil svare til den region, hvor embryoet vil blive lokaliseret. Inkuber vagtelæg stumpe ender. </li><li> Sted i 38 ° C befugtet inkubator. Tænd rokkende funktion. </li></ol> ...

Den podning af vagtler neuralrøret i host kyllingeembryoer beskrevet her er en enkel og billig teknik til at spore specifikke subpopulationer af trækkende NCCer stammer fra forskellige regioner langs Rostro-caudale akse 21,67-69. Denne teknik udnytter den lette adgang til aviære embryoner (sammenlignet med pattedyr embryoner) og kan kombineres med andre teknikker, såsom vævsablation, injektion af inhibitoriske molekyler, eller genetisk manipulation via elektroporation af ekspressionsplasmider til eksperi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Firma </td><td> Katalog nr. </td></tr><tr><td> Chick æg </td><td> Various - vi bruger Texas A &amp; M University har Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Vagtelæg </td><td> Various - vi bruger Ozarks Egg Company, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Æg inkubator (digital udlæsning 1502 Sportsman Incubator m / Fugtighed 110-120 Volt AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA pincet, Inox Epoxybemalet </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Tape </td><td> Enhver kontor forsyning butik </td><td></td></tr><tr><td> Buet Iris tang </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Jegndia blæk </td><td> Enhver art levering butik </td><td></td></tr><tr><td> Pen / strep (penicillin, streptomycin) Opløsning </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Klar indpakningstapen </td><td> Enhver kontor forsyning butik </td><td></td></tr><tr><td> Needle trække apparater </td><td> Narashige, Japan </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Trukket glas nål, fremstillet 1,5-1,8 x 100mm borsilicatglas kapillarrør </td><td> Kimble chase </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Trukket glas pipette, fremstillet af 5 ¾ &quot;Pasteur-pipette </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Mouth pipette apparater (sugning slange for kalibreret mikrokapillær pipette) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 tænger </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tungsten wire, 0,1 mm diameter </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Needle indehavere (Forniklet pin indehaver) </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> Developmental Studies Hybridoma Bank, University of Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor sekundært antistof (f.eks Alexa Fluor 594 gede-anti-muse IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Ringers opløsning (2L): <ul><li> 14,4 g NaCl </li><li> 0,34 g CaCl2 </li><li> 0,74 g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g KH 2 PO 4 </li><li> DdH 2 O til 2L </li><li> Filter og autoklaver </li></ul></td><td> Alle reagenser fra Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Avian embryoner skabe en unik platform for at studere mange hvirveldyr udviklingsprocesser, som følge af den nemme adgang af embryonerne i ægget. Kimæriske fugle embryoner, som vagtler donorvæv er transplanteret ind i en kyllingeembryo i ovo og kombinerer kraften i uudsletteligt genetisk mærkning af cellepopulationer med lethed af manipulation forelagt af aviær embryo. Quail-chick kimærer er en klassisk redskab til at spore migrerende neurale kamceller (NCCer) 1-3. NCC&#39;erne er en forbigående vandrende population af celler i embryonet, som har oprindelse i det dorsale område af udviklingen neuralrøret 4. De gennemgår en epitelial til mesenkymale overgang og derefter migrere til andre områder af embryo, hvor de differentierer til forskellige celletyper, herunder brusk 5-13, melanocytter 11,14-20, neuroner og glia 21-32. NCC&#39;erne er multipotente, og deres endelige skæbne er indflydelseket ved 1) den region af neuralrøret, som de stammer langs Rostro-caudale akse af embryonet 11,33-37, 2) signaler fra naboceller, når de trækker 38-44, og 3) mikromiljø deres endelige destination inden for fosteret 45,46. Sporing af disse celler fra deres udgangspunkt i neuralrøret, at deres endelige position og skæbne i embryo, giver et vigtigt indblik i de udviklingsmæssige processer, der regulerer mønster og organogenesen. Transplantation af komplementære områder af donor neuralrøret (homotopic podning) eller forskellige regioner i donor neuralrøret (heterotop podning) kan afsløre forskelle i præ-specifikation af NCCer langs Rostro-caudale akse 2,47. Denne teknik kan tilpasses yderligere til at transplantere en ensidig rum i neuralrøret, således at den ene side stammer fra donorvæv og den kontralaterale side forbliver uforstyrrede i værten embryo, yiElding en intern kontrol inden for den samme prøve 2,47. Det kan også være indrettet til transplantation af hjernen segmenter i senere embryoner efter HH10, når den forreste neuralrøret er lukket 47. Her rapporterer vi teknikker til generering vagtel-chick kimærer via neuralrøret transplantation, som tillader sporing af vandrende NCC&#39;erne afledt af en diskret del af neuralrøret. Species-specifik mærkning af de donor-afledte celler med vagtel-specifikke QCPN antistof 48-56 tillader forskeren at skelne donor og værtsceller på det eksperimentelle slutpunktet. Denne teknik er enkel, billig, og har mange applikationer, herunder skæbne-mapping, celleafstamning sporing og identifikation af præ-mønster begivenheder langs Rostro-caudale akse 45. På grund af den lette adgang til aviær embryo, kan vagtel-chick transplantat teknik kombineres med andre manipulationer, herunder men ikke begrænset til linsen ablation 40, injektion af inhibitoriske molekyler 57,58 eller genetisk manipulation via elektroporering af ekspressionsplasmider 59-61, til at identificere respons bestemt migrerende strømme af NCC&#39;erne til perturbationer i fosterets udviklingsmæssige program. Endvidere kan denne podning teknik også anvendes til at generere andre interspecifikke kimære embryoer, såsom vagtel-Ande-kimærer til at studere NCC bidrag til kraniofaciale morfogenese eller muse-chick kimærer til at kombinere kraften af ​​muse genetik med lette manipulation af aviært embryon . 62

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

En metode til analyse af indvandring og eventuel skæbne aviære neurale crest celler i vagtel-chick kimære embryoner er beskrevet. Denne fremgangsmåde er en enkel og ligetil teknik til sporing crista neuralis-celler under migrering og differentiering, som ellers er vanskelige at skelne i en manipuleret chick embryo.

Analyse af Neural Crest migrering og differentiering af Cross-arter Transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolering og Kultur neuralkam stamceller fra menneskelige hårsække

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-labyrint Tvungen Alternation og Venstre-højre forskelsbehandling Opgaver for vurdering af arbejds-og referencedokument Hukommelse i mus

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Påvisning af Microregional Hypoxia i mus hjernebarken ved to-foton Imaging af endogent NADH Fluorescens

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproducerbar Mouse iskiasnerven Crush og efterfølgende vurdering af Regeneration af Whole Mount Muskel Analyse

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering og dyrkning af neurale kamceller fra embryonale Murin Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

En Galvanotaxis Assay for Analyse af neurale Prækursormaterialer cellemigration Kinetics i en eksternt påført Direct Current Electric Field

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...