Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

De auteurs danken de leden van de Lwigale laboratorium voor kritiek op het manuscript. SLG wordt ondersteund door een Ruth L. Kirschstein NRSA Fellowship van de National Eye Institute (F32 EY02167301). Pyl wordt ondersteund door de National Eye Institute (EY018050).

1. Incubate kuiken en kwarteleitjes op de gewenste fase Voor HH9 embryo&#39;s, typische incubatietijd varieert 29 tot 33 uur bij 38 ° C 63 <ol><li> Was de puin van de eieren met lauw water. </li><li> Horizontaal Leg eieren op de tray. Markeer de zijde naar boven met potlood, dit komt overeen met de regio waar het embryo zal worden gelokaliseerd. Incubeer kwarteleitjes stomp eindigen. </li><li> Plaats in 38 ° C bevochtigde incubator. Zet schommelen functie. </li></ol><p class="...

Het enten van kwartel neurale buis in gastheercellen kippenembryo&#39;s die hier beschreven is een eenvoudige en goedkope techniek voor het opsporen van specifieke subpopulaties van het migreren van NCC&#39;s afkomstig uit verschillende regio&#39;s langs de Rostro-caudale as 21,67-69. Deze techniek maakt gebruik van de bereikbaarheid van aviaire embryo&#39;s (ten opzichte van zoogdieren embryo) en kan worden gecombineerd met andere technieken, zoals weefsel ablatie injectie remmende moleculen of genetische ma...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Chick eieren </td><td> Various - we gebruiken Texas A &amp; M University&#39;s Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Kwarteleitjes </td><td> Various - we gebruiken Ozarks Egg Company, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Egg incubator (digitale uitlezing 1502 Sportsman Incubator w / Vochtigheid 110-120 Volt AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA tang, Inox epoxy-coating </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Plakband </td><td> Elke kantoorboekhandel </td><td></td></tr><tr><td> Gebogen Iris tang </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Ikndia inkt </td><td> Elke kunst aanbod op te slaan </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (penicilline, streptomycine) Oplossing </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Duidelijke verpakkingstape </td><td> Elke kantoorboekhandel </td><td></td></tr><tr><td> Naald trekken apparatuur </td><td> Narashige, Japan </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Getrokken glas naald, gemaakt +1,5 tot +1,8 x 100mm borosilicaatglas capillair </td><td> Kimble achtervolging </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Getrokken glazen pipet, gemaakt van 5 ¾ &quot;Pasteur pipet </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Mond pipet apparatuur (aspirator buis assemblage voor gekalibreerd microcapillaire pipet) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 tang </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Vatgsten draad, 0,1 mm diameter </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Naaldhouders (Vernikkelde penhouder) </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> Developmental Studies Hybridoma Bank, de Universiteit van Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor secundair antilichaam (bijv. Alexa Fluor 594 geit anti-muis IgG 1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Ringer-oplossing (2L): <ul><li> 14.4g NaCl </li><li> 0.34g CaCl2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g KH 2 PO 4 </li><li> DDH 2 O tot 2L </li><li> Filter en autoclaaf </li></ul></td><td> Alle reagentia van Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Aviaire embryo&#39;s bieden een uniek platform voor het bestuderen van vele gewervelde ontwikkelingsprocessen, als gevolg van de gemakkelijke toegang van de embryo&#39;s in het ei. Chimère aviaire embryo&#39;s, waarbij kwartel donor weefsel wordt in een kippenembryo getransplanteerd in ovo, combineren de kracht van onuitwisbare genetische kenmerken van celpopulaties met het gemak van manipulatie door het aviaire embryo. Quail-chick hersenspinsels zijn een klassiek instrument voor het opsporen van trekkende neurale lijst cellen (NCC&#39;s) 1-3. NCC&#39;s zijn een tijdelijke trekkende populatie van cellen in het embryo, die van oorsprong in het dorsale gebied van de ontwikkeling van neurale buis 4. Ze ondergaan een epitheliale naar mesenchymale transitie en vervolgens migreren naar andere regio&#39;s van het embryo, waar ze differentiëren in verschillende soorten cellen, waaronder kraakbeen 5-13, melanocyten 11,14-20, neuronen en glia 21-32. NCC&#39;s zijn multipotente, en hun uiteindelijke lot is invloedbeïnvloed door 1) het gebied van de neurale buis waaruit zij van oorsprong langs de Rostro-caudale as van het embryo 11,33-37, 2) signalen van naburige cellen als ze 38-44 migreren, en 3) de micro-omgeving van hun uiteindelijke bestemming binnen het embryo 45,46. Tracing deze cellen vanuit hun oorsprong in de neurale buis, op hun definitieve standpunt en het lot in het embryo, levert belangrijke inzicht in de ontwikkelingsprocessen die patronen en organogenese te reguleren. Transplantatie van complementaire regio&#39;s van donor neurale buis (homotopic enten) of verschillende regio&#39;s van donor neurale buis (heterotope enten) kan onthullen verschillen in de pre-specificatie van NCC&#39;s langs de Rostro-caudale as 2,47. Deze techniek kan verder worden aangepast aan een eenzijdige compartiment van de neurale buis, zodat een zijde uit donorweefsel transplanteren en contralaterale zijde blijft onverstoord in de gastheer embryo, yielding een interne controle binnen hetzelfde monster 2,47. Het kan ook worden aangepast voor transplantatie van hersenen segmenten later embryo na HH10 wanneer de voorste neurale buis gesloten 47. Hier melden wij technieken voor het genereren van kwartel-chick hersenschimmen via neurale buis transplantatie, die het mogelijk maken voor het traceren van de trekkende NCC&#39;s afgeleid van een discrete segment van de neurale buis. Soortspecifieke kenmerken van de donor-afgeleide cellen met de kwartel-specifieke antilichaam QCPN 48-56 kan de onderzoeker om donor en gastheercellen te onderscheiden in een experimentele eindpunt. Deze techniek is eenvoudig, goedkoop, en heeft vele toepassingen, waaronder het lot-mapping, cellijn opsporen en identificeren van pre-patronen evenementen langs de Rostro-caudale as 45. Vanwege het gemak van toegang tot de aviaire embryo, kan de kwartel-chick graft techniek worden gecombineerd met andere bewerkingen, met inbegrip van maar niet beperkt tot lens ablatie 40, injectie van remmende moleculen 57,58, of genetische manipulatie via elektroporatie van meningsuiting plasmiden 59-61, om de reactie van bepaalde trekkende stromen van NCC&#39;s tot verstoringen in ontwikkeling van het embryo-programma te identificeren. Bovendien kan deze enten techniek ook gebruikt worden om andere interspecifieke chimere embryo&#39;s, zoals kwartel-eend hersenschimmen genereren NCC bijdrage aan craniofaciale morfogenese, of muis-chick hersenschimmen om de kracht van de muis genetica te combineren met het gemak van manipulatie van de aviaire embryo te bestuderen 62.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Een benadering voor het analyseren van migratie en de uiteindelijke lot van aviaire neurale lijst cellen in kwartel-chick chimere embryo&#39;s wordt beschreven. Deze methode is een eenvoudige en directe techniek voor het opsporen van neurale lijst cellen tijdens migratie en differentiatie die anders moeilijk te onderscheiden binnen een ongemanipuleerde kippenembryo.

Analyse van de neurale lijst migratie en differentiatie door Cross-soorten transplantatie

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Groei en differentiatie van volwassen hippocampus Arctic grondeekhoorn neurale stamcellen

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Productie van Chick Embryo Extract voor de teelt van Muizen neurale lijst Stem Cells

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Fysiologische, morfologische en neurochemische Karakterisering van neuronen gemoduleerd door Movement

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-doolhof Gedwongen Afwisseling en links-rechts Discriminatie Taken voor de beoordeling van Werken en Reference geheugen in Muizen

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Analyse van Trunk neurale cel migratie met behulp van een gewijzigd Zigmond Kamer Assay

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Detectie van Microregional Hypoxie in Mouse Cerebral Cortex door twee-foton Imaging van endogene NADH fluorescentie

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproduceerbare Mouse heupzenuw Crush en de daaropvolgende beoordeling van Regeneratie door Whole Mount Muscle Analyse

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Een Galvanotaxis Assay voor Analyse van neurale precursoren celmigratie Kinetics in een extern aangelegd Direct Current Electric Field

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...