Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
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Les auteurs tiennent à remercier les membres du laboratoire Lwigale pour la critique du manuscrit. SLG est soutenu par une bourse de Ruth L. Kirschstein NRSA du National Eye Institute (F32 EY02167301). PYL est soutenu par le National Eye Institute (EY018050).

1. Incuber poussin et oeufs de caille à l&#39;étape désirée Pour HH9 embryons, les durées d&#39;incubation typiques vont de 29-33 heures à 38 ° C. 63 <ol><li> Laver les débris sur les oeufs avec l&#39;eau tiède. </li><li> Disposer des œufs de poule sur le plateau horizontalement. Marquer le côté orienté vers le haut avec le crayon; ce correspond à la région où l&#39;embryon est localisé. Incuber oeufs de caille extrémité émoussée vers le haut. </li><li> Lieu...

Le greffage du tube neural de caille dans des embryons de poulet d&#39;accueil décrit ici est une technique simple et peu coûteuse pour le traçage des sous-populations spécifiques de la migration CCN émanant de différentes régions le long de l&#39;axe rostro-caudal 21,67-69. Cette technique tire avantage de la facilité d&#39;accès aux embryons d&#39;oiseaux (par rapport aux embryons de mammifères) et peuvent être combinés avec d&#39;autres techniques, telles que l&#39;ablation des tissus, l&#39;in...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif </td><td> Entreprise </td><td> Le numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Le poussin oeufs </td><td> Divers - nous utilisons la Texas A &amp; M University Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Les oeufs de caille </td><td> Divers - nous utilisons Société Egg Ozarks, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Egg incubateur (affichage numérique 1502 Sportsman Incubateur w / Humidité alternatif de 110-120 volts) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA forceps, Inox revêtement époxy </td><td> Outils belle science </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Ruban adhésif </td><td> N&#39;importe quel magasin de fournitures de bureau </td><td></td></tr><tr><td> Courbé Iris pince </td><td> Outils belle science </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Jende d&#39;encre </td><td> Tout magasin de fournitures artistiques </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (pénicilline, streptomycine) Solution </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Clair ruban d&#39;emballage </td><td> N&#39;importe quel magasin de fournitures de bureau </td><td></td></tr><tr><td> Aiguille appareil de traction </td><td> Narashige, le Japon </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Aiguille de verre tiré, fait de 1,5 à 1,8 x tube de verre de borosilicate 100mm capillaire </td><td> Kimble Chase </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Tiré de verre pipette, fabriqué à partir de 5 ¾ &quot;pipette Pasteur </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Bouche pipette appareil (tube aspirateur pour pipettes microcapillaire calibré) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 forceps </td><td> Outils belle science </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tonneaufil gsten, diamètre 0,1 mm </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Porte-aiguilles (support de broche nickelé) </td><td> Outils belle science </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antisérum </td><td> Des études de développement de la Banque d&#39;hybridome, Université de l&#39;Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor anticorps secondaire (par exemple, Alexa Fluor 594 chèvre anti-souris IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Une solution de Ringer (2L): <ul><li> 14,4 g de NaCl </li><li> 0,34 g de CaCl 2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g de KH 2 PO 4 </li><li> ddH 2 O à 2L </li><li> Filtre à l&#39;autoclave </li></ul></td><td> Tous les réactifs de Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Embryons aviaires fournir une plate-forme unique pour l&#39;étude de nombreux vertébrés processus de développement, en raison de la facilité d&#39;accès des embryons dans l&#39;œuf. Chimériques embryons aviaires, dans lequel le tissu des bailleurs de fonds de caille est transplanté dans un embryon de poulet in ovo, combiner la puissance de l&#39;étiquetage génétique indélébile de populations de cellules avec la facilité de manipulation présenté par l&#39;embryon aviaire. Quail-chiches chimères sont un outil classique pour tracer migratoires des cellules de la crête neurale (CCN) 1-3. CCN sont une population de passage migratoire des cellules dans l&#39;embryon, qui sont originaires de la région dorsale de la 4 du tube neural en développement. Ils subissent une transition épithélio-mésenchymateuse et migrent vers d&#39;autres régions de l&#39;embryon, où ils se différencient en différents types cellulaires, y compris le cartilage 5-13, 11,14-20 mélanocytes, les neurones et cellules gliales 21-32. CCN sont multipotentes, et leur sort ultime est influencéeexpérimentés par 1) la région du tube neural dont ils sont issus le long de l&#39;axe rostro-caudale de l&#39;embryon 11,33-37, 2) des signaux provenant des cellules voisines de leur migration 38-44, et 3) le micro-ultime de leur destination à l&#39;intérieur de l&#39;embryon 45,46. Suivre ces cellules à partir de leur point d&#39;origine à du tube neural, à leur position finale et le sort au sein de l&#39;embryon, donne un aperçu important dans les processus de développement qui régulent structuration et de l&#39;organogenèse. Transplantation des régions complémentaires du tube neural des bailleurs de fonds (homotopes greffage) ou différentes régions du tube neural des bailleurs de fonds (hétérotopique greffage) peut révéler des différences dans pré-spécification de CCN le long de l&#39;axe rostro-caudal 2,47. Cette technique peut être en outre adapté pour transplanter un compartiment unilatérale du tube neural, de telle sorte que d&#39;un côté est dérivé du tissu du donneur, et les restes côté controlatéral imperturbable dans l&#39;embryon d&#39;accueil, yiElding un contrôle interne au sein du même échantillon 2,47. Il peut également être adapté pour la transplantation de segments du cerveau chez les embryons plus tard, après HH10, lorsque le tube neural antérieur a fermé 47. Nous rapportons ici les techniques pour générer des cailles-chiches chimères par transplantation du tube neural, qui permettent de tracer des CNC migratoires provenant d&#39;un segment distinct du tube neural. Spécifique à l&#39;espèce marquage des cellules dérivées des bailleurs de fonds avec l&#39;anticorps spécifique à la caille QCPN 48-56 permet au chercheur de distinguer des donateurs et des cellules hôtes au point de fin d&#39;expérimentation. Cette technique est simple, peu coûteux, et a de nombreuses applications, y compris le sort de cartographie, la lignée cellulaire de traçage et l&#39;identification des pré-patterning événements le long de l&#39;axe rostro-caudal 45. En raison de la facilité d&#39;accès à l&#39;embryon aviaire, la technique de greffe caille-poussin peut être combiné avec d&#39;autres manipulations, y compris mais non limité à 4 ablation lentille0, l&#39;injection de molécules inhibitrices 57,58, ou la manipulation génétique par électroporation de plasmides d&#39;expression 59-61, afin d&#39;identifier la réponse de certains flux migratoires de CCN à des perturbations dans le programme de développement de l&#39;embryon. En outre, cette technique de greffage peut aussi être utilisé pour générer d&#39;autres embryons interspécifiques chimériques tels que la caille-canard chimères d&#39;étudier la contribution de la CCN à la morphogenèse cranio-faciale, ou la souris-chiches chimères de combiner la puissance de la génétique de la souris avec la facilité de manipulation de l&#39;embryon aviaire 62.

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Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Une approche pour l&#39;analyse des migrations et le destin éventuel de cellules aviaires de la crête neurale chez la caille-poulet embryons chimériques est décrite. Cette méthode est une technique simple et directe pour le traçage des cellules de la crête neurale au cours de la migration et la différenciation qui seraient autrement difficiles à distinguer au sein d&#39;un embryon de poulet non manipulée.

Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation

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La détection de l&#39;hypoxie dans le cortex de souris microrégionale cérébrale par imagerie à deux photons de fluorescence endogène NADH

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