Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

המחברים מודים אנשי המעבדה Lwigale לביקורת של כתב היד. SLG נתמך על ידי ל &#39;רות Kirschstein NRSA אחוות מן הלאומי Eye Institute (F32 EY02167301). PYL נתמך על ידי National Eye Institute (EY018050).

1. דגירה אפרוח וביצים שליו לשלב הרצוי עבור HH9 עוברים, זמני דגירה טיפוסי נע בין 29-33 שעות ב 38 ° C. 63 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את כל הפסולת מן הביצים עם מים פושרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סדר ביצי ?...

השתלת של הצינור העצבי שליו לעוברי חומוס המארחות המתוארת כאן היא טכניקה פשוטה וזולה לאיתור subpopulations ספציפיות של העברת NCCs שמקורם באזורים שונים לאורך ציר הזנב rostro-21,67-69. שיטה זו מנצלת את הקלות של גישה עוברי העופות (לעומת עוברי יונקים) ו ניתן בשילוב עם טכניקות אחרות, ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> חומוס ביצים </td><td> שונים - אנו משתמשים טקסס A &amp; M University עופות המדע של המחלקה, טקסס. </td><td></td></tr><tr><td> שליו ביצים </td><td> שונים - אנו משתמשים Ozarks החברה ביצה, מיזורי. </td><td></td></tr><tr><td> ביצה חממה (הצג הדיגיטלי 1502 ספורטאי החממה w / לחות 110-120 וולט AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> דומון AA מלקחיים, Inox אפוקסי מצופה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> נייר דבק </td><td> כל חנות לציוד משרדי </td><td></td></tr><tr><td> עקום איריס מלקחיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> אניndia דיו </td><td> כל ההיצע בחנות האמנות </td><td></td></tr><tr><td> פן / דלקת (פניצילין, סטרפטומיצין) פתרון </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> סרט אריזה ברור </td><td> כל חנות לציוד משרדי </td><td></td></tr><tr><td> מנגנון משיכת המחט </td><td> Narashige, יפן </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> זכוכית מחט הוציא, עשה 1.5-1.8 צינור x 100mm בורוסיליקט זכוכית נימי </td><td> קימבל מרדף </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> משך זכוכית פיפטה, עשוי 5 ¾ &quot;פיפטה פסטר </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> הפה פיפטה המנגנון (צינור aspirator הרכבה על פיפטה microcapillary מכויל) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52 א </td></tr><tr><td> דומון # 5 מלקחיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> חבית גדולהחוט gsten, קוטר 0.1mm </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> מחזיקי מחט (מצופה ניקל בעל קוד אישי) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק, אוניברסיטת איווה </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa פלואוריד משני נוגדנים (למשל, Alexa פלואוריד 594 עיזים נגד העכבר IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> הצלצול של פתרון (2L): <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 14.4g NaCl </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.34g CaCl 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.74g KCl </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.04g KH 2 PO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DDH 2 O ל-2L </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון החיטוי </li></ul></td><td> כל ריאגנטים של פישר סיינטיפיק </td><td><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7647-14-5 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10043-52-4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7447-40-7 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7558-79-4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

עוברי העופות לספק פלטפורמה ייחודית לחקר תהליכים התפתחותיים רבים החוליות, בשל גישה קלה של עוברים בתוך הביצה. עוברי העופות chimeric, שבו הרקמה שליו התורם הושתלו העובר חומוס ב לג&#39;ימי, לשלב את העוצמה של תיוג גנטי של אוכלוסיות תאים בל יימחה בקלות מניפולציה שהוצגו על ידי העובר העופות. שליו, חומוס מפלצות הם כלי קלאסי עבור מעקב אחר תאים נודדים לפסגה עצביים (NCCs) 1-3. NCCs הם אוכלוסייה נודדות חולפות של התאים בעובר, אשר מקורם באזור הגבי של 4 בפיתוח בצינור העצבי. הם עוברים אפיתל המעבר mesenchymal ובהמשך נודדים לאזורים אחרים של העובר, שם הם להתמיין לסוגי תאים שונים, כולל 5-13 סחוס, מלנוציטים 11,14-20, הנוירונים גליה 21-32. NCCs הם multipotent, ואת גורלם האולטימטיבי שלהם משפיעיםenced לפי אזור 1) של הצינור העצבי שבו הם נובעים לאורך ציר rostro-הזנב של העובר 11,33-37, 2) לאותות ששיגרו התאים הסמוכים כשהם נודדים 38-44, ו - 3) microenvironment של האולטימטיבי שלהם היעד בתוך העובר 45,46. מעקב אחר התאים האלה מנקודת המוצא אל הצינור העצבי, למיקום הסופי וגורלו בתוך העובר, מספק תובנה חשובה לתוך התהליכים ההתפתחותיים המווסתים דפוסים ו organogenesis. השתלת אזורים משלימים של הצינור העצבי התורם (homotopic השתלת) או באזורים שונים של הצינור העצבי התורם (heterotopic השתלת) יכול לגלות הבדלים במפרט מראש של NCCs לאורך ציר rostro-הזנב 2,47. טכניקה זו ניתן להתאים עוד יותר להשתיל תא החד צדדית של הצינור העצבי, כך שצד אחד נגזר רקמות התורם, ואת שרידי בצד הנגדי מוטרד בעובר המארח, ייelding הבקרה הפנימית בתוך מדגם זהה 2,47. זה גם יכול להיות מותאמים עבור השתלת קטעי מוח עוברי מאוחר יותר, לאחר HH10, כאשר בצינור העצבי הקדמי סגר 47. כאן אנו מדווחים על טכניקות להפקת שליו, חומוס מפלצות באמצעות השתלת בצינור העצבי, אשר מאפשרים מעקב אחר NCCs נודדים שמקורם קטע נפרד של הצינור העצבי. מינים ספציפיים תיוג של התורם הנגזרות תאים עם נוגדן ספציפי QCPN שליו 48-56 מאפשרת לחוקר להבחין התורם תאים המארחות בנקודת סיום הניסוי. טכניקה זו היא פשוטה, זולה, ויש לה יישומים רבים, כולל מיפוי, גורל, השושלת תא מעקב, זיהוי דפוסים מראש אירועים לאורך ציר הזנב rostro-45. בגלל הקלות של גישה העובר העופות, הטכניקה שליו, חומוס שתל עשוי להיות משולב עם מניפולציות אחרות, כולל אך לא רק, אבלציה העדשה 40, הזרקה של מולקולות מעכבות 57,58 או מניפולציה גנטית דרך electroporation של פלסמידים הביטוי 59-61, כדי לזהות את התגובה של זרמים נודדות מיוחדות של NCCs על הפרעות בתוכנית ההתפתחות של העובר. יתר על כן, שיטה זו השתלת יכול לשמש גם כדי לייצר אחרים עוברים interspecific chimeric כמו שליו, ברווז מפלצות ללמוד תרומה NCC כדי המורפוגנזה Craniofacial או עכבר חומוס מפלצות לשלב את כוחה של הגנטיקה העכבר בקלות מניפולציה של העובר העופות . 62

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

הגישה לניתוח הגירה גורלו הסופי של העופות לפסגה תאים עצביים שליו, חומוס עוברים chimeric מתואר. שיטה זו היא טכניקה פשוטה וישירה לאיתור תאים עצביים לפסגה במהלך הגירה והבחנה שקשה אחרת להבחין בתוך העובר גוזל unmanipulated.

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

גדילה והתמיינות של מבוגרים בהיפוקמפוס סנאי הארקטי קרקע תאים גזע עצביים

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

הפקה של חילוץ העובר צ&#39;יק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

אפיון פיזיולוגיים, מורפולוגי והעצבית של נוירונים מווסתת על ידי תנועת

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-מבוך לסירוגין בכפייה של שמאל וימין משימות אפליה להערכת עבודה וזיכרון העזר עכברים

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

זיהוי של היפוקסיה Microregional בקליפת עכבר מוחין על ידי הדמיה של שני הפוטונים אנדוגני NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Assay Galvanotaxis לניתוח של קינטיקס נדידת תאים העצביים המבשר בשדה חשמלי נוכחי לשימוש חיצוני ישיר

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...