Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Forfatterne takker medlemmene av Lwigale laboratorium for kritikk av manuskriptet. SLG er støttet av en Ruth L. Kirschstein NRSA Fellowship fra National Eye Institute (F32 EY02167301). PYL støttes av National Eye Institute (EY018050).

1. Inkuber dama og vaktler egg til ønsket scene For HH9 embryoer, typiske inkubasjonstider varierer fra 29-33 timer ved 38 ° C. 63 <ol><li> Vask eventuelle rester fra eggene med lunkent vann. </li><li> Ordne kylling egg på brett horisontalt. Marker den siden som vender opp med blyant, og dette vil tilsvare den regionen hvor embryoet vil bli lokalisert. Inkuber vaktel egg butte enden opp. </li><li> Plass i 38 ° C fuktet inkubator. Slå på gyngefunksjon. </li></ol><p class="j...

Den pode av vaktel nevralrøret inn vert kyllingembryo beskrevet her er en enkel og billig teknikk for å spore spesifikke subpopulasjoner trekkende NCCer kommer fra ulike regioner langs Rostro-kaudal aksen 21,67-69. Denne teknikken tar nytte av enkel tilgang til avian embryoer (i forhold til pattedyr embryoer) og kan kombineres med andre teknikker, for eksempel vev ablasjon, injeksjon av hemmende molekyler, eller genetisk manipulasjon via electroporation av uttrykk plasmider, til eksperimentelt undersøke re...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Chick egg </td><td> Various - vi bruker Texas A &amp; M University Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Quail egg </td><td> Various - vi bruker Ozarks Egg Company, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Egg inkubator (Digital Timer 1502 Sportsman Inkubator w / Fuktighet 110-120 Volt AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA tang, Inox Epoxy-belagt </td><td> Fine Science Verktøy </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Scotch tape </td><td> Enhver kontor supply butikken </td><td></td></tr><tr><td> Buet Iris tang </td><td> Fine Science Verktøy </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Jegndia blekk </td><td> Enhver art forsyning butikk </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (Penicillin, streptomycin) Solution </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Klar Pakking tape </td><td> Enhver kontor supply butikken </td><td></td></tr><tr><td> Needle trekke apparater </td><td> Narashige, Japan </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Trakk glass nål, laget 1,5 til 1,8 x 100mm borsilikatglass kapillarrør </td><td> Kimble chase </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Trakk glass pipette, laget av 5 ¾ &quot;Pasteur pipette </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Munn pipette apparater (aspirator slange for kalibrert microcapillary pipette) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 tang </td><td> Fine Science Verktøy </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tungsten wire, 0.1mm diameter </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Needle Holder (Forniklet pin holderen) </td><td> Fine Science Verktøy </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> Utviklingsstudier hybridoma Bank, University of Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor sekundært antistoff (f.eks Alexa Fluor 594 geit anti-mus IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Ringer Solution (2L): <ul><li> 14.4g NaCl </li><li> 0.34g CaCl 2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0.04g KH 2 PO 4 </li><li> DDH 2 O til 2L </li><li> Filter og autoklav </li></ul></td><td> Alle reagenser fra Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Avian embryoer gir en unik plattform for å studere mange virveldyr utviklingsprosesser, på grunn av enkel tilgang av embryoene i egget. Chimeric avian embryo, der vaktel donor vev blir transplantert inn en kylling embryo i ovo, kombinere kraften uutslettelige genetisk merking av celle populasjoner med enkel manipulasjon presenteres av aviær embryo. Quail-chick chimeras er et klassisk verktøy for å spore vandrende neural crest cellene (NCCer) 1-3. NCCer er en forbigående vandringer populasjon av celler i embryoet, som stammer i den dorsale delen av å utvikle nevralrøret 4. De gjennomgår en epitelial til mesenchymale overgang og deretter migrere til andre regioner av embryoet, hvor de differensiere i ulike celletyper, inkludert 5-13 brusk, melanocytter 11,14-20, nevroner og gliaceller 21-32. NCCer er multipotent, og deres endelige skjebne er innflytelsepåvirket av 1) den delen av nevralrøret hvor de stammer langs Rostro-kaudal aksen av embryoet 11,33-37, 2) signaler fra nabocellene som de vandrer 38-44, og 3) mikromiljøet av deres endelige destinasjon i fosteret 45,46. Følge disse cellene fra deres synspunkt opprinnelse i nevralrøret, til sin endelige posisjon og skjebne innenfor fosteret, gir viktig innsikt i de utviklingsprosesser som regulerer mønster og organogenesen. Transplantasjon av komplementære områder av donor nevralrøret (homotopic pode) eller ulike regioner av donor nevralrøret (heterotop pode) kan avsløre forskjeller i pre-spesifikasjon av NCCer langs Rostro-kaudal aksen 2,47. Denne teknikken kan videre tilpasses transplantere en ensidig kupé av nevralrøret, slik at den ene siden er avledet fra donor vev, og motsatt side restene uaffisert i verten embryo, yiElding en intern kontroll innenfor samme prøve 2,47. Det kan også tilpasses for transplantasjon av hjernen segmenter i senere embryoer, etter HH10, når den fremre nevralrøret har stengt 47. Her rapporterer vi teknikker for å generere vaktel-chick chimeras via nevralrøret transplantasjon, som gir mulighet for sporing av trekkende NCCer avledet fra en diskret del av nevralrøret. Artsspesifikk merking av donor-deriverte celler med vaktel-spesifikt QCPN antistoff 48-56 tillater forskeren å skille donor og vertsceller ved eksperimentelle endepunktet. Denne teknikken er enkel, billig, og har mange bruksområder, inkludert skjebne-mapping, celle avstamning sporing, og identifisere pre-mønster hendelser langs Rostro-kaudal aksen 45. På grunn av den enkle tilgangen til avian embryo, kan vaktel-chick pode teknikk kombineres med andre manipulasjoner, inkludert men ikke begrenset til objektiv ablasjon 40, injeksjon av hemmende molekyler 57,58, eller genetisk manipulering via electroporation av uttrykk plasmider 59-61, for å identifisere responsen av bestemte trekkende strømmer av NCCer til forstyrrelsene i embryoet utviklingstrinn program. Videre kan dette pode teknikken også brukes til å generere andre interspecific chimeric embryoer som vaktel-Duck chimeras å studere NCC bidrag til kraniofaciale morphogenesis, eller mus-chick chimeras å kombinere kraften til musen genetikk med den enkle manipulering av aviær embryoet . 62

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

En tilnærming for å analysere migrasjon og eventuell skjebne av aviær neural crest cellene i vaktel-chick chimeric embryoer er beskrevet. Denne metoden er en enkel og grei teknikk for sporing neural crest cellene under trekket og differensiering som ellers er vanskelig å skille innenfor en unmanipulated kylling embryo.

Analyse av Neural Crest Migrasjon og differensiering av Cross-arter Transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolasjon og kultur av neural crest stamceller fra Human Hair Follikler

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-labyrint Tvunget Veksling og venstre-høyre Diskriminering Oppgaver for vurdering Working and Reference Minne i Mus

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Påvisning av Microregional Hypoksi i Mus Cerebral Cortex av to-foton Imaging av endogen NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproduserbar Mouse hoftenervene Crush og påfølgende vurdering av Regeneration av Whole Mount Muscle Analysis

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering og kultur neural crest Celler fra Embryonic murin Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

En Galvanotaxis Assay for analyse av Neural forløper celle migrasjon Kinetics i en eksternt anvendes Direct Current elektrisk felt

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...