Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
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Os autores agradecem os membros do laboratório Lwigale para a crítica do manuscrito. SLG é apoiado por uma L. Ruth Kirschstein NRSA Fellowship do National Eye Institute (F32 EY02167301). PYL é suportado pelo National Eye Institute (EY018050).

1. Incubar pintinho e ovos de codorna ao estágio desejado Para HH9 embriões, os tempos de incubação típicos variam de 29-33 horas a 38 ° C. 63 <ol><li> Lave todos os restos dos ovos com água morna. </li><li> Organizar os ovos de galinha na bandeja horizontal. Marcar o lado virado para cima com lápis, o que irá corresponder à região onde o embrião será localizado. Incubar ovos de codorna fim brusco para cima. </li><li> Lugar em 38 ° C incubadora umidificada. Ligue b...

O enxerto de tubo neural em embriões de galinha codorna acolhimento descrito aqui é uma técnica simples e barata para rastreamento subpopulações específicas de migração CNCC provenientes de diferentes regiões ao longo do eixo rostro-caudal 21,67-69. Esta técnica tira vantagem da facilidade de acesso para embriões aviários (em comparação com os embriões de mamíferos) e pode ser combinada com outras técnicas, tais como a ablação do tecido, a injecção de moléculas inibidoras, ou através de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td></tr><tr><td> Ovos Chick </td><td> Vários - usamos Texas A &amp; M University Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Ovos de codorna </td><td> Vários - usamos Ozarks Empresa Egg, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Ovo incubadora (Digital Leitura 1502 Sportsman Incubadora w / Umidade 110-120 V CA) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA fórceps, Inox revestido de epóxi </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Fita adesiva </td><td> Qualquer loja de material de escritório </td><td></td></tr><tr><td> Curvo Iris fórceps </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Eundia tinta </td><td> Qualquer loja de material de arte </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep Solution (penicilina, estreptomicina) </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> A fita de embalagem clara </td><td> Qualquer loja de material de escritório </td><td></td></tr><tr><td> Agulha aparelho puxando </td><td> Narashige, Japão </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Agulha de vidro puxado, fez 1,5-1,8 tubo de vidro de borosilicato x 100mm capilar </td><td> Kimble perseguição </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Puxado vidro pipeta, feita a partir de 5 ¾ &quot;pipeta Pasteur </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Aparelho de boca pipeta (tubo de aspirador de montagem para pipeta calibrada microcapilar) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 fórceps </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tonelarame gsten, diâmetro 0,1 milímetros </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Porta-agulhas (Niquelado titular pinos) </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN anti-soro </td><td> Desenvolvimento de Estudos Hybridoma Bank, da Universidade de Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa anticorpo Fluor secundário (por exemplo, Alexa Fluor 594 cabra anti-rato IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Solução de Ringer (2L): <ul><li> 14,4 g de NaCl </li><li> 0,34 g de CaCl2 </li><li> 0,74 g de KCl </li><li> 0.230g de Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g KH 2 PO 4 </li><li> ddH2O para 2L </li><li> Filtro e autoclave </li></ul></td><td> Todos os reagentes de Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Embriões de aves fornecer uma plataforma única para o estudo de muitos vertebrados processos de desenvolvimento, devido ao fácil acesso dos embriões dentro do ovo. Quiméricos embriões aviários, em que as codornizes tecido do dador é transplantado para um embrião de pinto in ovo, combinam o poder de rotulagem genética indelével de populações de células com a facilidade de manipulação apresentada pela embrião aviário. Quail chick-quimeras são uma ferramenta clássica para a detecção migratórias células da crista neural (CNCC) 1-3. CNCC são uma população transitória migratório das células do embrião, que se originam na região dorsal do tubo 4 desenvolvimento neural. Eles sofrem uma transição epitelial para mesenquimal e, posteriormente, migrar para outras regiões do embrião, onde se diferenciam em vários tipos celulares, incluindo cartilagem 5-13, melanócitos 11,14-20, neurônios e células gliais 21-32. CNCC são multipotentes, e seu destino final é influenciadoinfluenciada por 1) a região do tubo neural em que são originários ao longo do eixo rostro-caudal do embrião 11,33-37, 2) sinais de células vizinhas à medida que migram 38-44, e 3) o microambiente do seu final destino dentro do embrião 45,46. Rastreamento essas células a partir de seu ponto de origem no tubo neural, a sua posição final e destino dentro do embrião, fornece informação importante sobre os processos de desenvolvimento que regulam a padronização e organogênese. Transplante de regiões complementares de tubo neural doador (homotópico do miocárdio) ou diferentes regiões do tubo neural do doador (enxerto heterotópico) pode revelar diferenças de especificação pré-CNCC ao longo do eixo rostro-caudal 2,47. Esta técnica pode ser ainda adaptado para transplantar um compartimento unilateral do tubo neural, tal que um lado é derivado a partir de tecido do dador, e os restos lado contralateral não perturbada no embrião hospedeiro, yielding um controle interno, dentro da mesma amostra 2,47. Ele também pode ser adaptado para o transplante de segmentos cerebrais em embriões mais tarde, após HH10, quando o tubo neural anterior foi fechada 47. Relatamos aqui técnicas para a geração de codorniz chick-quimeras por transplantação tubo neural, que permitem a detecção de CNCC migratórios derivados a partir de um segmento discreta do tubo neural. Específica da espécie rotulagem das células derivadas de dador com o anticorpo QCPN codorniz-específica 48-56 permite que o pesquisador para distinguir dador e células hospedeiras no ponto final experimental. Esta técnica é simples, barato, e tem muitas aplicações, incluindo mapeamento de destino, a linhagem celular de rastreamento, identificação e padronização de pré-eventos ao longo do eixo rostro-caudal 45. Devido à facilidade de acesso para o embrião aviário, a técnica de enxerto codorniz-chick pode ser combinada com outras manipulações, incluindo mas não limitado a ablação da lente 40, a injecção de moléculas inibidoras 57,58, ou manipulação genética através de electroporação de plasmídeos de expressão 59-61, para identificar a resposta de determinados fluxos migratórias de CNCC a perturbações no programa de desenvolvimento do embrião. Além disso, esta técnica de enxerto pode também ser usado para gerar outros embriões interespecíficos quiméricos, tais como codorniz-pato quimeras para estudar NCC contribuição para a morfogénese craniofacial, ou rato chick-quimeras para combinar o poder de rato genética com a facilidade de manipulação do embrião aviário 62.

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Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Uma abordagem para análise da migração e destino final dos aviários células da crista neural em codornas de-bico embriões quiméricos é descrito. Este método é uma técnica simples e direta para rastrear células da crista neural durante a migração e diferenciação que são de outra maneira difícil distinguir dentro de um embrião de galinha não-manipulado.

Análise de migração da crista neural e Diferenciação por Cross-espécies de Transplantes

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Crescimento e Diferenciação de Adultos Hippocampal terra ártico Squirrel células-tronco neurais

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Neurociência

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Produção de Extrato de embrião de galinha para o cultivo de células-tronco neurais murino Crest

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Caracterização fisiológica, morfológica e neuroquímicos de Neurônios Modulada por Movimento

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolamento e Cultura de células da crista neural-tronco de folículos capilares humanos

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-maze Alternância forçado e Tarefas esquerda-direita para a Avaliação da Discriminação de Trabalho e Memória de Referência em Ratos

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Análise de Tronco de Migração da crista neural celular usando uma modificação Zigmond Ensaio Câmara

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Detecção de hipóxia microrregional no Cortex Cerebral mouse por imagem de dois fótons de fluorescência endógena NADH

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reprodutível mouse esmagamento do nervo ciático e subsequente avaliação de Regeneração por Análise Whole Mount muscular

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolamento e cultivo de células da crista neural do tubo neural embrionário murino

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Um Ensaio Galvanotaxis para Análise de Precursores Neurais Cinética migração celular em um campo aplicado externamente Corrente Contínua Elétrica

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...