Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Авторы выражают благодарность членам Lwigale лаборатории критику рукописи. SLG поддерживается Рут Л. Kirschstein НРСА стипендии от Национального института глаза (F32 EY02167301). Пыл при поддержке Национального института глаза (EY018050).

1. Инкубируйте куриных и перепелиных яиц желаемый этап Для HH9 эмбрионов, типичное время инкубации составляет от 29-33 часов при 38 ° C. 63 <ol><li> Смойте остатки из яиц с теплой водой. </li><li> Упорядочить куриные яйца на подносе по горизонтали. Отметить вверх с карандашом, это ...

Прививки перепела нервной трубки эмбриона в принимающей куриных описанный здесь простой и недорогой способ для отслеживания конкретных субпопуляций мигрирующих НКЦ, исходящие из разных регионов по-ростро хвостовой оси 21,67-69. Эта техника использует легкость доступа к птичьему э...

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> Чик яйца </td><td> Различные - мы используем Техас &amp; M университета Кафедра птицы, штат Техас. </td><td></td></tr><tr><td> Перепелиные яйца </td><td> Различные - мы используем Ozarks Яйцо компании, МО. </td><td></td></tr><tr><td> Яйцо инкубатор (цифровой дисплей 1502 Спортсмен инкубатор ж / Влажность 110-120 вольт переменного тока) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Дюмон А.А. щипцы, нержавеющей стали с эпоксидным покрытием </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Скотч </td><td> Любой магазин канцелярских товаров </td><td></td></tr><tr><td> Изогнутые щипцы Iris </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Яndia чернила </td><td> Любой магазин художественных изделий </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (пенициллин, стрептомицин) решение </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Очистить Упаковочная лента </td><td> Любой магазин канцелярских товаров </td><td></td></tr><tr><td> Иглы потянув аппарат </td><td> Narashige, Япония </td><td> ПЭ-21 </td></tr><tr><td> Тянут стекло иглой, из 1,5-1,8 х 100 мм боросиликатного стекла капилляра </td><td> Кимбл погони </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Тянут стеклянную пипетку, из 5 ¾ &quot;пипетки Пастера </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Рот пипетки аппарата (аспиратор трубкой для калиброванного микрокапиллярных пипетки) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52А </td></tr><tr><td> Дюмон # 5 щипцы </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Тунgsten проволоки, диаметром 0,1 мм </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Иглодержатели (никелированная контактный держатель) </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN антисыворотки </td><td> Развития исследований Hybridoma банк, Университет штата Айова </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor вторичные антитела (например, Alexa Fluor 594 антимышиного IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Рингера раствор (2 л): <ul><li> 14.4g NaCl </li><li> 0.34g CaCl 2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0.04g KH 2 PO 4 </li><li> DDH 2 O до 2 литров </li><li> Фильтр и автоклава </li></ul></td><td> Все реагенты от Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. Chimeric avian embryos, in which quail donor tissue is transplanted into a chick embryo in ovo, combine the power of indelible genetic labeling of cell populations with the ease of manipulation presented by the avian embryo.
Quail-chick chimeras are a classical tool for tracing migratory neural crest cells (NCCs)1-3. NCCs are a transient migratory population of cells in the embryo, which originate in the dorsal region of the developing neural tube4. They undergo an epithelial to mesenchymal transition and subsequently migrate to other regions of the embryo, where they differentiate into various cell types including cartilage5-13, melanocytes11,14-20, neurons and glia21-32. NCCs are multipotent, and their ultimate fate is influenced by 1) the region of the neural tube in which they originate along the rostro-caudal axis of the embryo11,33-37, 2) signals from neighboring cells as they migrate38-44, and 3) the microenvironment of their ultimate destination within the embryo45,46. Tracing these cells from their point of origin at the neural tube, to their final position and fate within the embryo, provides important insight into the developmental processes that regulate patterning and organogenesis.
Transplantation of complementary regions of donor neural tube (homotopic grafting) or different regions of donor neural tube (heterotopic grafting) can reveal differences in pre-specification of NCCs along the rostro-caudal axis2,47. This technique can be further adapted to transplant a unilateral compartment of the neural tube, such that one side is derived from donor tissue, and the contralateral side remains unperturbed in the host embryo, yielding an internal control within the same sample2,47. It can also be adapted for transplantation of brain segments in later embryos, after HH10, when the anterior neural tube has closed47.
Here we report techniques for generating quail-chick chimeras via neural tube transplantation, which allow for tracing of migratory NCCs derived from a discrete segment of the neural tube. Species-specific labeling of the donor-derived cells with the quail-specific QCPN antibody48-56 allows the researcher to distinguish donor and host cells at the experimental end point. This technique is straightforward, inexpensive, and has many applications, including fate-mapping, cell lineage tracing, and identifying pre-patterning events along the rostro-caudal axis45. Because of the ease of access to the avian embryo, the quail-chick graft technique may be combined with other manipulations, including but not limited to lens ablation40, injection of inhibitory molecules57,58, or genetic manipulation via electroporation of expression plasmids59-61, to identify the response of particular migratory streams of NCCs to perturbations in the embryo's developmental program. Furthermore, this grafting technique may also be used to generate other interspecific chimeric embryos such as quail-duck chimeras to study NCC contribution to craniofacial morphogenesis, or mouse-chick chimeras to combine the power of mouse genetics with the ease of manipulation of the avian embryo.62

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Подход к анализу миграции и в конечном итоге судьба птичьего клеток нервного гребня в перепелиных-химерных эмбрионов куриных описано. Этот метод является простым и техника для отслеживания клеток нервного гребня во время миграции и дифференциации, которые иначе трудно различить в unmanipulated куриного эмбриона.

Анализ нейронной миграции Крест и дифференциация по межвидовой трансплантации

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Роста и дифференцировки взрослых гиппокампа земли Арктики Белка нервные стволовые клетки

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Производство Чик извлечение эмбрионов для выращивания мышей нервных стволовых клеток Крест

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Физиологические, морфологические и нейрохимические Характеристика нейронов модулируется движением

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Выделение и культуры нервного гребня стволовых клеток из человеческих волоса

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-лабиринту Принудительное чередование и влево-вправо дискриминации Задачи для оценки рабочей и обращение к памяти у мышей

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Анализ Магистральные нейронной клеточной миграции Crest с использованием модифицированного Zigmond пробирной палаты

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Обнаружение микрорегиональном Гипоксия в мышь коры головного мозга на два фотона изображений эндогенной флуоресценции NADH

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Воспроизводимые мыши седалищного нерва и Давка Последующие оценки регенерации полного анализа горы мышц

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Выделение и культуры клеток нервного гребня из эмбриональных мышей нервной трубки

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Гальванотаксис пробирного анализа нейронных клеток-предшественников Кинетика миграции извне постоянного тока электрическое поле

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...