Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Författarna tackar medlemmar Lwigale laboratorium för kritik av manuskriptet. SLG stöds av en Ruth L. Kirschstein NRSA stipendium från National Eye Institute (F32 EY02167301). Pyl stöds av National Eye Institute (EY018050).

1. Inkubera brud och vaktelägg till önskad scenen För HH9 embryon, typiska inkubationstider sträcka sig från 29-33 timmar vid 38 ° C. 63 <ol><li> Tvätta eventuellt skräp från äggen med ljummet vatten. </li><li> Ordna hönsägg på brickan horisontellt. Markera sidan uppåt med en penna, vilket kommer att motsvara den region där embryot kommer att lokaliseras. Inkubera vaktelägg trubbiga änden uppåt. </li><li> Rum i 38 ° C fuktad inkubator. Slå på gungfunktion. <...

Ympning av vaktlar neuralröret till embryon värd brud som beskrivs här är en enkel och billig teknik för att spåra specifika subpopulationer av migrera NCC kommer från olika regioner längs rostro-caudal axeln 21,67-69. Denna teknik drar fördel av den lättillgänglighet för fågelembryon (jämfört med däggdjursceller embryon) och kan kombineras med andra tekniker, såsom vävnadsablation, injektion av inhiberande molekyler, eller genetisk manipulering via elektroporering av expressionsplasmider f?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Chick ägg </td><td> Various - vi använder Texas A &amp; M University Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Vaktelägg </td><td> Various - vi använder Ozarks Egg Company, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Ägg inkubator (digital avläsning 1502 Sportsman Incubator w / Luftfuktighet 110-120 Volt AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA pincett, Inox epoxi-belagd </td><td> Fina Science Tools </td><td> 11.210-10 </td></tr><tr><td> Tejp </td><td> Varje kontor leverans butik </td><td></td></tr><tr><td> Krökt Iris pincett </td><td> Fina Science Tools </td><td> 11.065-07 </td></tr><tr><td> Jagndien bläck </td><td> Någon konst leverans butik </td><td></td></tr><tr><td> Pen / strep (penicillin, streptomycin) Lösning </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Klart förpackningstejpen </td><td> Varje kontor leverans butik </td><td></td></tr><tr><td> Nålen dras anordningen </td><td> Narashige, Japan </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Drog glasnål, tillverkad från 1,5 till 1,8 x 100 mm borosilikatglas kapillärrör </td><td> Kimble chase </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Drog glaspipett, tillverkad av 5 ¾ &quot;pasteurpipett </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Mun pipett apparat (suganordning röraggregat för kalibrerad pipett mikrokapillär) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 tång </td><td> Fina Science Tools </td><td> 11.251-30 </td></tr><tr><td> Tungsten tråd, 0,1 mm diameter </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Nålhållare (Förnicklad pin hållare) </td><td> Fina Science Tools </td><td> 26.018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> Developmental Studies Hybridom Bank, University of Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor sekundär antikropp (t.ex., Alexa Fluor 594 get-anti-mus IgG 1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Ringers lösning (2L): <ul><li> 14,4 g NaCl </li><li> 0,34 g CaCl2- </li><li> 0,74 g KCl </li><li> 0,230 g Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g KH 2 PO 4 </li><li> ddHaO 2 O 2L </li><li> Filter och autoklav </li></ul></td><td> Alla reagenser från Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Fågelembryon ger en unik plattform för att studera många ryggradsdjur utvecklingsprocesser, på grund av enkel tillgång av embryon i ägget. Chimära fågelembryon, där vaktel donatorvävnad transplanteras in i en brud embryo i ovo, kombinerar kraften i outplånlig genetiska märkning av cellpopulationer med enkel manipulation presenteras av aviär embryot. Quail-chick chimärer är ett klassiskt verktyg för att spåra migrerande neurallistceller (NCC) 1-3. NCC är en övergående vandrande population av celler i embryot, som har sitt ursprung i den dorsala regionen av att utveckla neuralröret 4. De genomgår en epitelial till mesenkymal övergången och därefter migrera till andra delar av embryot, där de differentieras till olika celltyper, inklusive brosk 5-13, melanocyter 11,14-20, nervceller och glia 21-32. NCC är multipotenta, och deras slutliga öde är inflytandepåverkas mest av 1) den region av neuralröret, i vilken de har sitt ursprung längs rostro-kaudala axel av embryot 11,33-37, 2) signaler från angränsande celler, eftersom de migrerar 38-44, och 3) mikromiljön hos deras slutliga destination inom embryot 45,46. Spåra dessa celler från deras utgångspunkt i neuralröret till den slutliga position och öde i embryot, ger viktiga insikter i de utvecklingsprocesser som reglerar mönstring och organogenesen. Transplantation av kompletterande områden av donator neuralrörsdefekter (homotop ympning) eller olika regioner om givarens neuralrörsdefekter (heterotopisk ympning) kan avslöja skillnader i pre-specifikation NCC längs rostro-caudal axeln 2,47. Denna teknik kan vidare anpassas att transplantera en ensidig utrymme i neuralröret, så att en sida är härledd från donatorvävnad, och den kontralaterala sidan resterna ostörda i värden embryot, yiElding en intern kontroll inom samma prov 2,47. Den kan även anpassas för transplantation av hjärnan segment i senare embryon efter HH10, när den främre neuralröret har stängt 47. Här rapporterar vi tekniker för att generera vaktel-chick chimärer via neuralröret transplantation, som möjliggör spårning av flyttande NCC som härrör från en diskret segment av neuralröret. Art-specifik märkning av givar-härledda celler med vaktel-specifika QCPN antikroppen 48-56 gör det möjligt för forskaren att skilja donator och värdceller på experimentstadiet slutpunkten. Denna teknik är enkel, billig, och har många tillämpningar, inklusive öde-mapping, cellhärstamning spårning och identifiering av pre-mönstring evenemang längs rostro-caudal axeln 45. På grund av möjligheterna till aviär embryot kan vaktel-chick transplantat tekniken kombineras med andra manipulationer, inklusive men inte begränsat till objektiv ablation 40, injektion av inhiberande molekyler 57,58 eller genetisk manipulering via elektroporering av expressionsplasmider 59-61, för att identifiera svaret hos vissa migrerande strömmar av NCC till störningar i embryots utvecklingsprogrammet. Dessutom kan denna ympningstekniken också användas för att generera andra interspecifika chimära embryon som vaktlar-Duck chimärer att studera NCC bidrag till kraniofacial morfogenes, eller mus-chick chimärer att kombinera kraften i musen genetik med enkel manipulation av aviär embryot 62 i

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Ett tillvägagångssätt för att analysera migration och slutligen öde fågel neurallistceller i vaktel-chick chimära embryon beskrivs. Denna metod är en enkel och okomplicerad teknik för att spåra neurallistceller under migration och differentiering som annars är svåra att skilja inom ett obehandlade kycklingembryo.

Analys av Neural Crest migration och differentiering av Cross-arter Transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Tillväxt och differentiering av vuxna hippocampus Arctic Neurala jordekorre Stamceller

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Produktion av Chick Embryo Extract för odling av murina neurala celler Crest Stem

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Fysiologiska, morfologiska och neurokemiska karakterisering av nervceller moduleras av Movement

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolering och odling av neurala celler Crest härrör från mänskliga hårsäckar

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-labyrinten Påtvingad alterneringsledighet och vänster-höger uppgifter diskriminering bedöma arbets-och referens minne hos möss

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Analys av Trunk neurallist cellmigration med en modifierad Zigmond Chamber analys

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Detektion av Microregional hypoxi i mus Cerebral Cortex med två-foton Imaging av endogen NADH fluorescens

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproducerbar Mouse ischiasnerv krossa och påföljande bedömningen av Regeneration av Whole Mount Muscle Analys

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

En Galvanotaxis analys för analys av neurala Migration prekursorcell Kinetik i en extern Applied likström Electric Field

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...