Name: analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Yazarlar yazının eleştirisi Lwigale laboratuvar üyelerine teşekkür ederim. SLG, Ruth L. Kirschstein NRSA, Ulusal Göz Enstitüsü (F32 EY02167301) Kardeşliği tarafından desteklenmektedir. PYL Ulusal Göz Enstitüsü (EY018050) tarafından desteklenmektedir.

1. Istenen aşamada, inkübe civciv ve bıldırcın yumurtası HH9 embriyo için, tipik inkübasyon sürelerinde 38 ° C 63 29-33 saat arasında değişmektedir <ol><li> Herhangi bir enkaz yumurta ılık su ile yıkayın. </li><li> Yatay tepside tavuk yumurtası düzenleyin. Kalem ile yukarı bakacak şekilde yan işaretleyin; bu embriyo lokalize edilecektir bölge karşılık gelecektir. Bıldırcın yumurtası künt sonuna kadar inkübe edin. </li><li> Yeri 38 ° C nemlendiril...

Postero-kaudal ekseni 21,67-69 boyunca farklı bölgelerden kaynaklanan NCCS göç belirli subpopülasyonunun izlemek için basit ve ucuz bir tekniktir host civciv embriyolarının içine bıldırcın nöral tüp grefti Burada anlatılan. Bu teknik deneysel olarak araştırmak, kuş embriyoları (memeli embriyo göre) erişim kolaylığı yararlanır ve elektroporasyon yoluyla ifade plazmidlerin doku ablasyonu, inhibitör moleküllerin enjeksiyon veya genetik manipülasyon gibi diğer teknikleri ile kombine e...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Civciv yumurta </td><td> Çeşitli - Texas A &amp; M Üniversitesi Kanatlı Bilimleri Bölümü, Teksas. </td><td></td></tr><tr><td> Bıldırcın yumurtası </td><td> Çeşitli - Ozarks Yumurta Şirket, MO kullanın. </td><td></td></tr><tr><td> Kuluçka (Dijital Saati 1502 Sporcu İnkübatör w / Nem 110-120 Volt AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> , Dumont AA forseps, Inox Epoksi kaplı </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Seloteyp </td><td> Herhangi bir ofis malzemeleri satan bir mağazadan </td><td></td></tr><tr><td> Eğri İris forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Benndia mürekkep </td><td> Herhangi bir sanat malzemeleri satan bir mağazadan </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (Penisilin, Streptomisin) Çözüm </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Şeffaf Ambalaj bant </td><td> Herhangi bir ofis malzemeleri satan bir mağazadan </td><td></td></tr><tr><td> İğne çekme aparatı </td><td> Narashige, Japonya </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Çekti cam iğne, 1.5-1.8 x 100mm borosilikat cam kılcal tüp yapılmış </td><td> Kimble kovalamaca </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> 5 yapılmış cam pipet, ¾ &quot;Pasteur pipeti çekti </td><td> Fisher Scientific </td><td> : 13-678-6A </td></tr><tr><td> Ağız pipet aparatı (kalibre microcapillary pipet için aspiratör tüp montajı) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tungsten tel, 0.1mm çap </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Iğne tutucu (Nikel kaplama pin tutucu) </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> Gelişim Çalışmaları, Hibridoma Bankası, University of Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor sekonder antikor (örneğin, Alexa Fluor 594 keçi anti-fare IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Ringer çözeltisi (2L): <ul><li> 14.4g NaCl </li><li> 0.34g CaCl 2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> : 0.04g KH 2 PO 4 </li><li> GKD 2 O 2L için </li><li> Filter ve otoklav </li></ul></td><td> Fisher Scientific Tüm reaktifler </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analysis of neural crest migration and differentiation by cross-species transplantation

Kuş embriyo yumurta içinde embriyo kolay erişim nedeniyle birçok omurgalı gelişimsel süreçleri, çalışmak için benzersiz bir platform sağlar. Bıldırcın donör doku, ovo içinde bir civciv embriyo nakli olduğu kimerik kuş embriyo, hücre popülasyonlarının, silinmez genetik etiketleme güç kuş embriyosunun tarafından sunulan manipülasyon kolaylığı ile birleştirir. Bıldırcın civciv kimeralar, 1-3 göç eden nöral krest hücrelerinden (NCCS) izlemek için klasik bir araçtır. NCCS embriyo hücreleri gelişmekte olan nöral tüp 4 dorsal bölgede kaynaklanan geçici bir göçmen nüfus vardır. Onlar, mezenkimal geçiş için bir epitel geçmesi ve daha sonra onlar, kıkırdak 5-13, melanositlere 11,14-20, nöronlar ve glia 21-32 dahil olmak üzere çeşitli hücre tipleri ayırt embriyonun diğer bölgelerine göç. NCCS multipotent, ve kendi nihai kaderini etkiler.1) bunlar, 11,33-37 embriyo, 2-kaudal postero ekseni boyunca kaynaklı olduğu sinirsel tüp bölge), bunlar 38-44 geçirmek olarak komşu hücreler sinyalleri, ve 3) nihai microenvironment tarafından çalışmalar la 45,46 embriyo içinde hedef. Embriyo içinde nihai pozisyon ve kaderine, nöral tüp kökenli bu hücreler izleme, modelleme ve organogenez düzenleyen gelişim süreçlerine önemli ipuçları sunuyor. , Donör nöral tüp (aşılama Homotopik) veya donör nöral tüp (heterotopik aşılama) farklı bölgelerinde tamamlayıcı bölgelerinde Nakli, 2,47 postero-kaudal eksen boyunca ön özellikli NCCS farklılıklar ortaya çıkarabilir. Bu teknik, daha fazla nöral tüp tek taraflı donör doku elde edilir bu tür tek taraflı bir bölmesi, nakli için uyarlanmış ve taraf kalıntıları ana embriyo yi soğukkanlı edilebilir2,47 içinde aynı örnek bir iç kontrol Elding. Bu, ayrıca ön sinirsel tüp 47 kapatıldı, HH10 sonra daha sonraki embriyolarda, beyin segmentlerinin transplantasyonu için adapte edilmiş olabilir. Burada nöral tüpün ayrı bir segment türetilen göçmen NCCS izlemek için izin nöral tüp nakli yoluyla bıldırcın-chick kimeralar üretme teknikleri sunduk. ,, Bıldırcın özel QCPN antikor 48-56 donör kaynaklı hücre türlerinin özel etiketleme araştırmacı deneysel uç noktasında donör ve alıcı hücreleri ayırt etmek için izin verir. Bu teknik, ucuz, kolay, ve kader haritalama, izleme hücre soyu, ve postero-kaudal ekseni 45 boyunca desenlendirme öncesi olayların saptanmasını da dahil olmak üzere birçok uygulama vardır. , Kolaylığı, avyan embriyo için erişim,-chick bıldırcın graft teknikle dahil olmak üzere diğer manipülasyonlar ile kombine edilebilir fakat, lens Ablasyon 4 sınırlı değildir0, embriyonun gelişim programı salınımları ile NCCS özellikle göç akımlarının yanıt belirlemek için inhibitör molekülleri 57,58, veya ifade plazmidler 59-61 elektroporasyon yoluyla genetik manipülasyon, enjeksiyon. Ayrıca, bu aşılama tekniği fare genetik kuş embriyo manipülasyonu kolaylığı ile gücünü birleştirmek için, kraniyofasiyal morfonogenezi, ya da fare civciv kimeralar KKK katkısını incelemek için bıldırcın-ördek kimeralar gibi diğer arası kimerik embriyo oluşturmak için kullanılan olabilir . 62

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation at JoVE.com

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Bıldırcın-chick kimerik embriyo kuş nöral krest hücrelerinin göç ve nihai kaderi analiz etmek için bir yaklaşım tarif edilmiştir. Bu yöntem, aksi ayarlanmamış bir civciv embriyo içinde ayırt etmek zor göç ve farklılaşma sırasında nöral krest hücrelerinden izlemek için basit ve kolay bir tekniktir.

Çapraz türler Nakli Sinir Crest Göç ve Farklılaşma Analiz

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Yetişkin Hipokampal Arctic Zemin Sincap Nöral Kök Hücre Büyüme ve Farklılaşma

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Civciv Embriyo Özü murin Sinir Crest Kök Hücre Yetiştiriciliği Üretimi

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Hareketi tarafından Modülasyonlu Nöronlar Fizyolojik, Morfolojik ve nörokimyasal Karakterizasyonu

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-labirent Zorla Değişim ve Çalışma ve Fareler Referans Bellek değerlendirilmesi için sağ-sol Ayrımcılık Görevler

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Bir Modifiye Zigmond Odası Testi kullanılarak Trunk Sinir Crest Hücre Göç Analizi

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Endojen NADH Floresans iki-foton Imaging tarafından Fare Serebral Korteks olarak Microregional Hipoksi Algılama

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Dıştan Uygulanan Doğru Akım Elektrik Alanında Nöral Prekürsör Hücre Göç Kinetik Analizi için galvanotaksis Assay

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...