Name: ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection
Uploaded: 2012-11-03T13:00:00
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L&#39;appui de la Banque d&#39;yeux des Lions du Delaware Valley a été inestimable pour ce travail. Anticorps de souris monoclonal primaire contre ICP8 était un gentil cadeau du Dr David Knipe (Harvard Medical School). Nous remercions également le Dr Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) et le Dr Peter Laibson (Wills Eye Institute) pour des discussions utiles et d&#39;expertise.

Tous les réactifs et du matériel ont été achetés stérile ou ont été stérilisés avant la procédure. Cet article décrit les étapes de mise en place du modèle ex vivo en commençant par un œil énucléé avant. Dans nos expériences, nous utilisons de nouveaux globes oculaires entières de jeunes (8-12 semaines) lapins albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). En outre, nous utilisons des cornées humaines obtenues à partir de la banque des yeux locale. Si vous effectuez vous-même l&#39;énucl?...

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	<li>Kaye, S., Choudhary, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+keratitis.">Herpes simplex keratitis.</a> Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).</li><li>Holmberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enucleation+of+exotic+pets.">Enucleation of exotic pets.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).</li><li>Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+herpes+simplex+virus+keratitis:+the+pathogenesis+revisited.">Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited.</a> Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).</li><li>Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+organ+culture+model+for+assessing+the+effects+of+growth+factors+on+corneal+re-epithelialization.">A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization.</a> Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).</li><li>Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+organ+culture+model+for+assessing+epithelial+responses+to+surfactants.">Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants.</a> Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).</li><li>Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+gene+therapy.">Corneal gene therapy.</a> J. Control Release. 124, 107-133 (2007).</li><li>Halford, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ICP0+antagonizes+Stat+1-dependent+repression+of+herpes+simplex+virus:+implications+for+the+regulation+of+viral+latency.">ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency.</a> Virol. J. 3, 44 (2006).</li><li>Bhattacharjee, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+ocular+HSK+with+a+human+apolipoprotein+E+mimetic+peptide+in+a+mouse+eye+model.">Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model.</a> Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).</li><li>Novitskaya, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difficulties+imaging+herpes+simplex+keratitis+with+fluorescein+isothiocynate-labeled+anti-HSV-1+antibodies+in+an+ex+vivo+model.">Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model.</a> Cornea. 28, 421-425 (2009).</li><li>Sharma, A., Shimeld, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+immunofluorescence+to+diagnose+herpes+simplex+virus+keratitis+in+mice.">In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).</li></ol>

Dans cet article, vidéo, nous décrivons une méthode pour étudier aiguë épithélium cornéen infection HSV-1 dans un modèle ex vivo. Ce modèle est un tremplin utile entre le in vitro et dans des modèles in vivo de l&#39;, car elle permet de valider physiologiquement précise des résultats de culture cellulaire et, par conséquent, limite le montant de l&#39;expérimentation animale qui doit être effectuée. En outre, le modèle ex vivo fournit une occasion unique et...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactifs / fournitures </td><td> Entreprise </td><td> Catalogue # </td></tr><tr><td> Minimum Essential Medium (MEM) </td><td> Mediatech </td><td> 10-010-CV </td></tr><tr><td> Non-acides aminés essentiels (solution 100x) </td><td> Mediatech </td><td> 25-025-CI </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> Mediatech </td><td> 25 à 005-CI </td></tr><tr><td> Sel de sodium de pénicilline G </td><td> Sigma </td><td> P3032 </td></tr><tr><td> Sel de sulfate de streptomycine </td><td> Sigma </td><td> S9137 </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td></tr><tr><td> Phosphate Buffered Saline (PBS) </td><td> Préparé dans le laboratoire </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Trypsine EDTA (1x) &lt;/ Td&gt; <td> Mediatech </td><td> 25 à 053-CI </td></tr><tr><td> Sang DNeasy Tissue Kit &amp; </td><td> QIAGEN </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> Tampon Laemmli </td><td> Préparé dans le laboratoire </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Température optimale de coupe (PTOM) composé </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Yeux lapin entier (Young) </td><td> Pel-Freez </td><td> 41211-2 </td></tr><tr><td> Les cornées humaines et Yeux entiers </td><td> Banque des yeux locale </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 12 Plaque Bien spot Porcelaine </td><td> Alimentation de laboratoire d&#39;Avogadro </td><td> 1877 </td></tr><tr><td> Boîte de 35 mm Tissue Culture </td><td> Faucon </td><td> 353001 </td></tr><tr><td> 6 BienPlaque de culture cellulaire </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 657160 </td></tr><tr><td> Cryomold intermédiaire </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4566 </td></tr></tbody></table>

ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection

Kératite herpétique est une des pathologies les plus sévères associés au virus de l&#39;herpès simplex de type 1 (HSV-1). Kératite herpétique est actuellement la principale cause de cécité cornéenne deux dérivés et associée à l&#39;infection dans le monde développé. Présentation typique de kératite herpétique comprend également l&#39;infection de l&#39;épithélium cornéen et parfois le stroma cornéen profond et l&#39;endothélium, conduisant à de telles pathologies cornéennes permanents comme des cicatrices, l&#39;éclaircissage et l&#39;opacité 1. Cornée infection HSV-1 est traditionnellement étudiée dans deux types de modèles expérimentaux. Le modèle in vitro, dans lequel monocouches de culture de cellules épithéliales cornéennes sont infectées dans une boîte de Pétri, offre simplicité, niveau élevé de reproductibilité, des expériences rapides et des coûts relativement faibles. D&#39;autre part, le modèle in vivo, dans lesquelles les animaux comme les lapins ou les souris sont inoculés directement dans la cornée, propose un état ​​physiologique hautement sophistiquésystème, mais coûte plus cher, plus les expériences, les soins aux animaux nécessaires, et un plus grand degré de variabilité. Dans cet article, vidéo, nous fournissons une démonstration détaillée d&#39;un modèle ex vivo nouvelle épithélium cornéen infection HSV-1, qui combine les forces des deux in vitro et la le des modèles in vivo. Le modèle ex vivo utilise des cornées intactes organotypically maintenues en culture et infectées par le HSV-1. L&#39;utilisation du modèle ex vivo permet de tirer des conclusions très base physiologique, mais il est assez peu coûteux et exige un engagement de temps comparable à celle du modèle in vitro.

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Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Dans cet article, nous décrivons vidéo l&#39;utilisation d&#39;une nouvelle<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modèle de l&#39;herpès simplex virus de type aiguës je cornée infection épithéliale.

Ex Vivo modèle organotypique cornéenne aiguë de l&#39;herpès simplex virus type épithéliales je infection

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1).  Herpes keratitis is currently the leading ...

Research

JoVE Journal

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Using Chick Embryo Brain as a Model to Study Human Glioblastoma Cell Behavior

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Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior (Video) | JoVE 

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