Name: ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection
Uploaded: 2012-11-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection at JoVE.com

O apoio do Banco de Olhos do Lions de Delaware Valley foi inestimável para este trabalho. Anticorpo monoclonal contra o principal do mouse ICP8 foi um presente tipo de Dr. David Knipe (Harvard Medical School). Agradecemos também o Dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) e Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) para discussões úteis e conhecimentos.

Todos os reagentes e equipamentos foram comprados estéreis ou foram esterilizadas antes do procedimento. Este artigo descreve as etapas de implementação do modelo ex vivo começando com um olho pré-enucleado. Em nossos experimentos, utilizamos frescos olhos inteiros de jovens (8-12 semanas) coelhos albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). Além disso, usamos córneas humanas obtidos a partir do banco de olhos local. Se realizar a enucleação si mesmo, tome cuidado para não danificar a córnea ou o lim...

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	<li>Kaye, S., Choudhary, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+keratitis.">Herpes simplex keratitis.</a> Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).</li><li>Holmberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enucleation+of+exotic+pets.">Enucleation of exotic pets.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).</li><li>Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+herpes+simplex+virus+keratitis:+the+pathogenesis+revisited.">Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited.</a> Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).</li><li>Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+organ+culture+model+for+assessing+the+effects+of+growth+factors+on+corneal+re-epithelialization.">A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization.</a> Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).</li><li>Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+organ+culture+model+for+assessing+epithelial+responses+to+surfactants.">Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants.</a> Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).</li><li>Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+gene+therapy.">Corneal gene therapy.</a> J. Control Release. 124, 107-133 (2007).</li><li>Halford, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ICP0+antagonizes+Stat+1-dependent+repression+of+herpes+simplex+virus:+implications+for+the+regulation+of+viral+latency.">ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency.</a> Virol. J. 3, 44 (2006).</li><li>Bhattacharjee, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+ocular+HSK+with+a+human+apolipoprotein+E+mimetic+peptide+in+a+mouse+eye+model.">Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model.</a> Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).</li><li>Novitskaya, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difficulties+imaging+herpes+simplex+keratitis+with+fluorescein+isothiocynate-labeled+anti-HSV-1+antibodies+in+an+ex+vivo+model.">Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model.</a> Cornea. 28, 421-425 (2009).</li><li>Sharma, A., Shimeld, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+immunofluorescence+to+diagnose+herpes+simplex+virus+keratitis+in+mice.">In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).</li></ol>

Neste artigo de vídeo foi descrito um método para o estudo agudo epitelial da córnea infecção por HSV-1 em um modelo ex vivo. Este modelo é um degrau entre a utilidade in vitro e a modelos in vivo, uma vez que permite a validação fisiologicamente precisa dos resultados de cultura de células e, deste modo, limita a quantidade de experimentação animal, que deve ser realizada. Além disso, o modelo ex vivo proporciona uma oportunidade única e valiosa para estudar a i...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentes / Suprimentos </td><td> Companhia </td><td> Catálogo # </td></tr><tr><td> Meio Essencial Mínimo (MEM) </td><td> Mediatech </td><td> 10-010 CV- </td></tr><tr><td> Não-aminoácidos essenciais (solução 100x) </td><td> Mediatech </td><td> 25-025 CI- </td></tr><tr><td> L-Glutamina </td><td> Mediatech </td><td> 25-005 CI- </td></tr><tr><td> Penicilina G Sal de sódio </td><td> Sigma </td><td> P3032 </td></tr><tr><td> O sal de sulfato de estreptomicina </td><td> Sigma </td><td> S9137 </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td></tr><tr><td> Tampão fosfato salino (PBS) </td><td> Preparado no laboratório </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Tripsina EDTA (1x) &lt;/ Td&gt; <td> Mediatech </td><td> 25-053 CI- </td></tr><tr><td> Sangue Dneasy &amp; Kit Tecido </td><td> QIAGEN </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> Kit Mini RNeasy </td><td> QIAGEN </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> Tampão de Laemmli </td><td> Preparado no laboratório </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Temperatura ideal de corte composto (OCT) </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Inteiros olhos do coelho (jovem) </td><td> Pel-Freez </td><td> 41.211-2 </td></tr><tr><td> As córneas humanas e olhos inteiros </td><td> Banco de Olhos local </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 12 Placa local bem Porcelana </td><td> Abastecimento de Avogadro Lab </td><td> 1877 </td></tr><tr><td> 35 placas de cultura de tecidos milímetros </td><td> Falcão </td><td> 353001 </td></tr><tr><td> 6 BemPlaca de cultura de células </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 657160 </td></tr><tr><td> Cryomold Intermediário </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4566 </td></tr></tbody></table>

ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection

Ceratite herpética é uma das mais graves patologias associadas com o vírus do herpes simplex tipo 1 (HSV-1). Ceratite herpética é actualmente a principal causa de cegueira córnea tanto derivados e infecção associada no mundo desenvolvido. Apresentação típica de ceratite herpética inclui infecção do epitélio da córnea e, por vezes, o estroma eo endotélio da córnea profunda, conduzindo a tais patologias corneanas permanentes como cicatrizes, desbaste, e opacidade 1. Corneal infecção HSV-1 é tradicionalmente estudada em dois tipos de modelos experimentais. O modelo in vitro, em que as monocamadas de culturas de células epiteliais da córnea são infectadas numa placa de Petri, oferece nível simplicidade, elevado de reprodutibilidade, experiências rápidas, e custos relativamente baixos. Por outro lado, o modelo in vivo, em que os animais, tais como coelhos ou ratos são inoculados directamente na córnea, oferece uma fisiológica altamente sofisticadosistema, mas tem custos mais elevados, experimentos mais longos, cuidado de animais necessário, e um maior grau de variabilidade. Neste artigo de vídeo, que proporcionam uma demonstração detalhada de um novo modelo ex vivo de corneal epitelial infecção HSV-1, que combina as vantagens de ambos os vitro e em modelos in vivo o. O modelo ex vivo utiliza córneas intactas organotypically mantidas em cultura e infectadas com HSV-1. A utilização do modelo ex vivo permite conclusões altamente fisiologicamente baseados, no entanto, é bastante barato e requer compromisso de tempo comparável à do modelo in vitro.

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Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Neste artigo de vídeo que descreve o uso de um novo<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo de herpes simplex vírus tipo agudos eu infecção do epitélio da córnea.

Ex Vivo modelo organotípico córnea de Agudos Herpes simplex vírus tipo epiteliais eu Infecção

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1).  Herpes keratitis is currently the leading ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

A cultura Ex vivo de todo, o desenvolvimento cerebral de Drosophila

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Neurociência

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

A córnea microbolsa Ensaio: Um modelo de angiogênese no mouse Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex vivo preparações da Intacta Vomeronasal Órgão e acessórios bulbo olfatório

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Um<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Induzida por laser Lesão Medular modelo para avaliar mecanismos de axonal Degeneration em tempo real

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observação do movimento ciliar de células epiteliais do plexo coróide<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo optogenética Dissection de Circuitos medo no cérebro Slices

Optogenetic approaches are now widely used to study the function of neural populations and circuits by combining targeted expression of light-activated ...

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Visualização e imagem ao vivo do Oligodendrocyte organelas em fatias Organotypic cérebro usando microscopia Confocal e vírus Adeno-associado

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In situ Visualização da Dinâmica do Cone de Crescimento e Crescimento do Axon em Culturas agudas de fatias de cérebro embrionário ex vivo

During neuronal development, axons navigate the cortical environment to reach their final destinations and establish synaptic connections. Growth cones ...

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Culturas organotípicas do córtex humano adulto como modelo ex vivo para transplante e validação de células-tronco humanas

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Using Chick Embryo Brain as a Model to Study Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior (Video) | JoVE 

Uso do Cérebro de Embriões de Pintinhos como Modelo para Análises In Vivo e Ex Vivo do Comportamento Celular de Glioblastoma Humano

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...