Name: ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection
Uploaded: 2012-11-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection at JoVE.com

El apoyo del Banco Leonístico de Delaware Valley fue muy valiosa para este trabajo. Anticuerpo monoclonal de ratón contra ICP8 primaria fue una especie de regalo del doctor David Knipe (Harvard Medical School). También agradecemos al Dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) y el Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) útil para los debates y la experiencia.

Todos los reactivos y equipos se compraron estéril o se esterilizaron antes del procedimiento. En este artículo se describen los pasos para la implantación del modelo ex vivo a partir de la vista pre-enucleado. En nuestros experimentos, utilizamos ojos frescos enteros de jóvenes (8-12 semanas) conejos albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). Además, utilizamos córneas humanas obtenidas a partir del banco de ojos local. Si se realiza enucleación usted mismo, tenga cuidado de no dañar la córnea o el ...

<ol>
	<li>Kaye, S., Choudhary, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+keratitis.">Herpes simplex keratitis.</a> Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).</li><li>Holmberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enucleation+of+exotic+pets.">Enucleation of exotic pets.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).</li><li>Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+herpes+simplex+virus+keratitis:+the+pathogenesis+revisited.">Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited.</a> Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).</li><li>Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+organ+culture+model+for+assessing+the+effects+of+growth+factors+on+corneal+re-epithelialization.">A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization.</a> Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).</li><li>Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+organ+culture+model+for+assessing+epithelial+responses+to+surfactants.">Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants.</a> Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).</li><li>Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+gene+therapy.">Corneal gene therapy.</a> J. Control Release. 124, 107-133 (2007).</li><li>Halford, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ICP0+antagonizes+Stat+1-dependent+repression+of+herpes+simplex+virus:+implications+for+the+regulation+of+viral+latency.">ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency.</a> Virol. J. 3, 44 (2006).</li><li>Bhattacharjee, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+ocular+HSK+with+a+human+apolipoprotein+E+mimetic+peptide+in+a+mouse+eye+model.">Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model.</a> Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).</li><li>Novitskaya, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difficulties+imaging+herpes+simplex+keratitis+with+fluorescein+isothiocynate-labeled+anti-HSV-1+antibodies+in+an+ex+vivo+model.">Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model.</a> Cornea. 28, 421-425 (2009).</li><li>Sharma, A., Shimeld, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+immunofluorescence+to+diagnose+herpes+simplex+virus+keratitis+in+mice.">In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).</li></ol>

En este artículo de vídeo se describe un método para el estudio agudo corneal epitelial infección HSV-1 en un modelo ex vivo. Este modelo es un escalón útil entre la in vitro y la modelos in vivo, ya que permite la validación fisiológicamente precisa de los resultados de cultivo de células y, por lo tanto, limita la cantidad de experimentación animal que debe ser realizada. Además, el modelo ex vivo ofrece una oportunidad única y valiosa para estudiar la infecció...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivos / Materiales </td><td> Empresa </td><td> Catálogo # </td></tr><tr><td> Medio Esencial Mínimo (MEM) </td><td> Mediatech </td><td> 10 a 010-CV </td></tr><tr><td> No aminoácidos esenciales (solución 100x) </td><td> Mediatech </td><td> 25 a 025-CI </td></tr><tr><td> L-Glutamina </td><td> Mediatech </td><td> 25 a 005-CI </td></tr><tr><td> La penicilina G sal de sodio </td><td> Sigma </td><td> P3032 </td></tr><tr><td> Sal de sulfato de estreptomicina </td><td> Sigma </td><td> S9137 </td></tr><tr><td> Agarosa </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td></tr><tr><td> Tampón fosfato salino (PBS) </td><td> Preparada en laboratorio </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Tripsina EDTA (1x) &lt;/ Td&gt; <td> Mediatech </td><td> 25 a 053-CI </td></tr><tr><td> Sangre y DNeasy Tissue Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> Tampón de Laemmli </td><td> Preparada en laboratorio </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Temperatura óptima de corte (OCT) Compuesto </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Ojos enteros conejo (joven) </td><td> Pel-Freez </td><td> 41211-2 </td></tr><tr><td> Las córneas humanas y los ojos enteros </td><td> Banco de Ojos Local </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 12 Pues Porcelana Plata al contado </td><td> Suministro de Avogadro Lab </td><td> 1877 </td></tr><tr><td> 35 mm placa de cultivo de tejidos </td><td> Halcón </td><td> 353001 </td></tr><tr><td> 6 BienPlaca de cultivo de la célula </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 657160 </td></tr><tr><td> Criomolde Intermedio </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4566 </td></tr></tbody></table>

ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection

La queratitis herpética es una de las patologías más graves asociadas con el virus del herpes simple de tipo 1 (HSV-1). La queratitis herpética es actualmente la principal causa de ceguera tanto córnea-derivado y las infecciones asociadas-en el mundo desarrollado. Presentación típica de la queratitis por herpes incluye la infección del epitelio corneal y el estroma a veces córnea más profunda y el endotelio, lo que conduce a patologías corneales tales como cicatrices permanentes, adelgazamiento, y la opacidad 1. Corneal infección HSV-1 es tradicionalmente estudiado en dos tipos de modelos experimentales. El modelo in vitro, en el que las monocapas de cultivo de células epiteliales corneales infectadas en una placa de Petri, ofrece simplicidad, alto nivel de replicabilidad, experimentos rápidos y los costos relativamente bajos. Por otro lado, el modelo in vivo, en el que los animales tales como conejos o ratones se inoculan directamente en la córnea, ofrece una fisiológica altamente sofisticadosistema, pero tiene costos más altos, más largos experimentos, cuidado de animales necesario, y un mayor grado de variabilidad. En este artículo de vídeo, se proporciona una demostración detallada de un modelo ex vivo de nuevo corneal epitelial infección HSV-1, que combina las ventajas tanto de la vitro y en modelos in vivo en el. El modelo ex vivo utiliza córneas intactas organotypically mantenidas en cultivo e infectadas con HSV-1. El uso del modelo ex vivo permite conclusiones altamente fisiológicamente basadas, sin embargo, es bastante barato y requiere dedicación de tiempo comparable a la del modelo in vitro.

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection at JoVE.com

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

En este artículo de vídeo se describe el uso de un nuevo<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo de herpes simplex virus tipo agudas que la infección del epitelio corneal.

Ex Vivo organotípicos Modelo corneal aguda de herpes simplex virus tipo epitelial que la infección

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1).  Herpes keratitis is currently the leading ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex cultivo in vivo de la Plenaria, los cerebros en desarrollo de Drosophila

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Investigación

Neurociencias

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

El microbolsa Ensayo corneal: un modelo de angiogénesis en el ojo del ratón

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex vivo la Producción de la Bombilla órgano vomeronasal y accesorios olfativa Intacto

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Una<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Médula espinal inducida por láser Lesiones modelo para evaluar los mecanismos de degeneración axonal en tiempo real

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observación del Movimiento ciliar de las células epiteliales del plexo coroideo<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenética Disección de circuitos del miedo en rodajas de cerebro

Optogenetic approaches are now widely used to study the function of neural populations and circuits by combining targeted expression of light-activated ...

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Visualización y en proyección de imagen del Oligodendrocyte organelos en rebanadas de cerebro Organotypic mediante Virus Adeno-asociado y Microscopía Confocal

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In situ Visualización del crecimiento de axones y la dinámica de los conos de crecimiento en cultivos agudos de cortes cerebrales embrionarios ex vivo

During neuronal development, axons navigate the cortical environment to reach their final destinations and establish synaptic connections. Growth cones ...

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Cultivos organotípicos de corteza humana adulta como modelo ex vivo para el trasplante y validación de células madre humanas

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Using Chick Embryo Brain as a Model to Study Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior (Video) | JoVE 

Uso del cerebro del embrión de pollo como modelo para análisis in vivo y ex vivo del comportamiento de las células de glioblastoma humano

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...