Name: ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection
Uploaded: 2012-11-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection at JoVE.com

Stödet från Lions Eye Bank of Delaware Valley var ovärderlig för detta arbete. Primär mus monoklonal antikropp mot ICP8 var en vänlig gåva från Dr David Knipe (Harvard Medical School). Vi tackar också Dr Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) och Dr Peter Laibson (Wills Eye Institute) för hjälp diskussioner och expertis.

Alla reagens och utrustning köptes sterila eller steriliserades före förfarandet. I den här artikeln beskrivs steg för att starta den ex vivo-modellen börjar med en pre-utan kärna öga. I våra experiment använder vi färska hela ögonglober från unga (8-12 veckor) albinokaniner (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). Dessutom använder vi människor hornhinnor som erhållits från den lokala ögonbank. Om du utför enucleation själv noga med att undvika skador på hornhinnan eller limbus under förfaran...

<ol>
	<li>Kaye, S., Choudhary, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+keratitis.">Herpes simplex keratitis.</a> Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).</li><li>Holmberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enucleation+of+exotic+pets.">Enucleation of exotic pets.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).</li><li>Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+herpes+simplex+virus+keratitis:+the+pathogenesis+revisited.">Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited.</a> Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).</li><li>Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+organ+culture+model+for+assessing+the+effects+of+growth+factors+on+corneal+re-epithelialization.">A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization.</a> Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).</li><li>Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+organ+culture+model+for+assessing+epithelial+responses+to+surfactants.">Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants.</a> Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).</li><li>Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+gene+therapy.">Corneal gene therapy.</a> J. Control Release. 124, 107-133 (2007).</li><li>Halford, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ICP0+antagonizes+Stat+1-dependent+repression+of+herpes+simplex+virus:+implications+for+the+regulation+of+viral+latency.">ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency.</a> Virol. J. 3, 44 (2006).</li><li>Bhattacharjee, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+ocular+HSK+with+a+human+apolipoprotein+E+mimetic+peptide+in+a+mouse+eye+model.">Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model.</a> Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).</li><li>Novitskaya, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difficulties+imaging+herpes+simplex+keratitis+with+fluorescein+isothiocynate-labeled+anti-HSV-1+antibodies+in+an+ex+vivo+model.">Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model.</a> Cornea. 28, 421-425 (2009).</li><li>Sharma, A., Shimeld, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+immunofluorescence+to+diagnose+herpes+simplex+virus+keratitis+in+mice.">In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).</li></ol>

I denna video artikeln beskriver vi en metod för att studera akut hornhinneepitel HSV-1-infektion i en ex vivo-modell. Denna modell är ett bra språngbräda mellan in vitro och in vivo-modeller, eftersom den möjliggör fysiologiskt korrekt validering av resultat cellodling och därmed begränsar mängden djurförsök som måste utföras. Dessutom ger den ex vivo-modellen en unik och ovärderlig möjlighet att studera epitelial herpesinfektion i intakta humana hornhinnor. N...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens / tillbehör </td><td> Företag </td><td> Catalogue # </td></tr><tr><td> Minimum Essential Medium (MEM) </td><td> Mediatech </td><td> 10-010-CV </td></tr><tr><td> Icke-essentiella aminosyror (100x lösning) </td><td> Mediatech </td><td> 25-025-Cl </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-Cl </td></tr><tr><td> Penicillin G natriumsalt </td><td> Sigma </td><td> P3032 </td></tr><tr><td> Streptomycin sulfatsalt </td><td> Sigma </td><td> S9137 </td></tr><tr><td> Agaros </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td></tr><tr><td> Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) </td><td> Framställdes i lab </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Trypsin EDTA (1x) &lt;/ Td&gt; <td> Mediatech </td><td> 25-053-Cl </td></tr><tr><td> DNeasy Blood &amp; Tissue Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 69.504 </td></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 74.104 </td></tr><tr><td> Laemmli buffert </td><td> Framställdes i lab </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Optimal Cutting Temperature (oktober) Förening </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Hela kaninögon (unga) </td><td> Pel-Freez </td><td> 41211-2 </td></tr><tr><td> Mänskliga Hornhinnor och hela Eyes </td><td> Lokal ögonbank </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 12 Väl Porslin Spot Plate </td><td> Avogadros Lab Supply </td><td> 1877 </td></tr><tr><td> 35 mm vävnadsodlingsskål </td><td> Falcon </td><td> 353.001 </td></tr><tr><td> 6 VälCell Culture Plate </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 657.160 </td></tr><tr><td> Cryomold Intermediate </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4566 </td></tr></tbody></table>

ex vivo organotypic corneal model of acute epithelial herpes simplex virus type i infection

Herpes keratit är ett av de mest allvarliga patologier associerade med herpes simplex-virus-typ 1 (HSV-1). Herpes keratit är idag den ledande orsaken till både hornhinnan härrörande och infektion-associerad blindhet i den utvecklade världen. Typiska presentation av herpes keratit inbegriper infektion av hornhinnans epitel och ibland djupare hornhinnestroma och endotel, vilket leder till sådana permanenta hornhinnan patologier som ärrbildning, gallring, och opacitet 1. Korneal HSV-1-infektion traditionellt studerats i två typer av experimentella modeller. In vitro-modell, där odlade monoskikt av hornhinneepitelceller infekteras i en petriskål, erbjuder enkelhet, hög reproduktionsförmåga snabba experiment och relativt låga kostnader. Å andra sidan, erbjuder in vivo-modell, där djur såsom kaniner eller möss ympas direkt i hornhinnan, en mycket sofistikerad fysiologisksystemet, men har högre kostnader, längre experiment, nödvändig djuromsorg och en högre grad av variabilitet. I denna video artikeln, tillhandahåller vi en detaljerad demonstration av en ny ex vivo modell av korneaepitelet HSV-1-infektion, vilken kombinerar styrkan i både in vitro-och in vivo-modeller. Ex vivo-modellen använder intakta hornhinnor organotypically upprätthålls i kultur och infekterade med HSV-1. Användningen av ex vivo-modellen möjliggör höggradigt fysiologiskt baserade slutsatser, men det är ganska billig och kräver tid engagemang jämförbar med den in vitro-modell.

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection at JoVE.com

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

I denna video artikeln beskriver vi användningen av en ny<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modell av akut herpes simplex-virus typ I korneaepitelet infektion.

Ex vivo organotypisk hornhinnan modell av akut epitelial herpes simplex virus typ I-infektion

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1).  Herpes keratitis is currently the leading ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Odling av Hel, Utveckla Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

Hornhinnans Micropocket Analys: En modell av angiogenes i mus Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex vivo Beredningar av den Intakt vomeronasala orgel och tillbehör luktbulben

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-inducerad ryggmärgsskada modell för bedömning Mekanismer axonal degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation av ciliarrörelse av plexus chorioideus epitelceller<em&gt; Ex vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex vivo optogenetic Dissekering av skräck kretsar i hjärnan skivor

Optogenetic approaches are now widely used to study the function of neural populations and circuits by combining targeted expression of light-activated ...

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Visualisering och levande avbildning av Oligodendrocyte organeller i Organotypic hjärnan skivor med hjälp av Adeno-associerade Virus och konfokalmikroskopi

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In situ Visualisering av axontillväxt och tillväxtkondynamik i akuta ex vivo embryonala hjärnskivor

During neuronal development, axons navigate the cortical environment to reach their final destinations and establish synaptic connections. Growth cones ...

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypiska kulturer av vuxna mänskliga cortex som en ex vivo-modell för human stamcellstransplantation och validering

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Using Chick Embryo Brain as a Model to Study Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior (Video) | JoVE 

Använda kycklingembryohjärnan som modell för in vivo- och ex vivo-analyser av humant glioblastomcellbeteende

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...