Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Wij danken dr. Michael Wooten voor zijn hulp bij de voorbereiding van het manuscript. Dit werk werd ondersteund door NIH 2RO1NS033661 (MWW).

1. Up Set-voor de oogst <ol><li> Om prenatale pups voor neuron oogst genereren, te plannen kweken tussen de volwassen muizen 19 dagen voorafgaand aan de dag van neuron isolatie. (C57BL / 6 muizen leeftijd 2-8 maanden werden gebruikt in paringen in het kader van de ontwikkeling van dit protocol). Geslaagde dekking kan worden bevestigd door de detectie van een vaginale plug in de vrouwelijke, hartkloppingen of een visuele bevestiging van de zwangerschap. </li><li> De dag voorafgaand aan de neuron isolatie: <ol ...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

Hippocampale culturen werden in de moleculaire biologie voor meer dan 20 jaar. Hoewel in principe neuronale kweken kan worden gemaakt van een deel van de hersenen, hebben hippocampale culturen gebleken de meest door de relatief eenvoudige structuur van de zenuw cellen in de hippocampus 7. Hippocampale culturen zijn meestal gemaakt van een laat stadium embryonaal weefsel. Dit weefsel is gemakkelijker om zich te distantiëren en bevat minder gliacellen dan wel volwassen hersenweefsel 1. Isolatie van ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Verkoper </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Rat Tail Collageen 1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> Poly-D-lysine oplossing </td><td> Chemicon </td><td> A-003-E </td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt Solution </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> Trypsine-oplossing (1X) 0,25%, vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> NeuroBasal Medium (1X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 supplement (50X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> L-Glutamine 200 mm (100X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> Penicilline (10.000 eenheden / ml) / streptomycine (10.000 ug / ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> HI-Donor Horse Serum </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

Primaire culturen van ratten en muizen hippocampale neuronen worden op grote schaal gebruikt om cellulaire mechanismen te onthullen in de neurobiologie. Door te isoleren en groeiende individuele neuronen, onderzoekers zijn in staat om eigenschappen met betrekking tot mobiele handel, cellulaire structuur en individuele eiwit lokalisatie behulp van een verscheidenheid van biochemische technieken te analyseren. De resultaten van dergelijke experimenten zijn van cruciaal belang voor het testen van theorieën het aanpakken van de neurale basis van het geheugen en leren. Echter ondubbelzinnig resultaten van deze experimenten vormen gebaseerd op het vermogen om neuronale kweken groeien minimum verontreinigende andere hersenen celtypen. In dit protocol gebruiken we specifieke media ontwikkeld voor neuron groei en zorgvuldige dissectie van de embryonale hippocampus weefsel om de groei van gezonde neuronen te optimaliseren terwijl het minimaliseren van vervuilende soorten cellen (dwz astrocyten). Embryonale muis hippocampale weefsel moeilijker te isoleren dan vergelijkbare knaagdier weefsel door de grootte van het monster voor dissection. We tonen gedetailleerde dissectie technieken van de hippocampus van embryonale dag 19 (E19) muis pups. Zodra de hippocampus weefsel wordt geïsoleerd, is zacht dissociatie van neuronale cellen bereikt met een verdunde concentratie van trypsine en mechanische verstoring ontworpen om afzonderlijke cellen van het bindweefsel, terwijl het verstrekken van minimale schade aan de individuele cellen. Een gedetailleerde beschrijving van het pipetten bereiden voor gebruik in de onderbreking is opgenomen. Optimale plating dichtheden zijn bedoeld voor immuno-fluorescentie protocollen voor een succesvolle celkweek te maximaliseren. Het protocol biedt een snelle (ongeveer 2 uur) en efficiënte techniek voor de cultuur van de neuronale cellen van de muis de hippocampus weefsel.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Wij bieden een protocol voor de cultuur van sterk gezuiverd hippocampale neuronen van prenatale muis hersenen zonder het gebruik van een feeder-gliale cellaag.

Isolatie en Cultuur van hippocampale neuronen van Prenatal Muizen

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection en Primaire Cultuur van de embryonale Mouse hippocampus en de corticale neuronen

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Calciumfosfaattransfectie van Primary hippocampus neuronen

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolatie en Cultuur van Gedissocieerde sensorische neuronen van Chick Embryo

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Isolatie, Cultuur en onderhoud op lange termijn van de Primary mesencefale dopaminerge neuronen uit embryonale knaagdieren Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Low-Density primaire hippocampus Neuron Cultuur

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Spinal Cord Neurons Isolatie en Cultuur van Neonatale Muizen

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

Generatie van neuro sferen van gemengde primaire Hippocampal en corticale neuronen geïsoleerd van E14-e16 Sprague Dawley rat embryo

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

Primaire cultuur van neuronen geïsoleerd van embryonale muis cerebellum

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolatie en cultuur van Oculomotor, Trochlear en spinale motor neuronen van prenatale ISLMN: GFP transgene muizen

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...