Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר מייקל ווטן על עזרתו בהכנת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי NIH 2RO1NS033661 (MWW).

1. הגדרת לפני קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לייצר גורי טרום לידתי של הקציר נוירון, לתזמן הרבייה בין עכברים בוגרים 19 ימים לפני יום של בידוד תא העצב. (C57BL / 6 עכברים הגילאים 2-8 חודשים שימשו הזדווגויות למטרות פיתוח בפרוטוקול זה). זיווג מוצלח ...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

תרבויות בהיפוקמפוס נעשה שימוש בביולוגיה מולקולרית של יותר מ -20 שנה. אמנם באופן עקרוני, תרבויות עצביים יכול להתבצע מכל חלק של המוח, בהיפוקמפוס תרבויות הוכיחו להיות פופולרי ביותר בשל הארכיטקטורה הפשוטה יחסית של האוכלוסייה תא העצב בהיפוקמפוס 7. תרבויות בהיפוקמפו?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> מוכר </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> זנב עכברוש קולגן 1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> פולי-D-ליזין פתרון </td><td> Chemicon </td><td> A-003-E </td></tr><tr><td> הנקס תמיסת מלח מאוזן </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> טריפסין פתרון (1X) 0.25%, נוזל </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> בינוני NeuroBasal (1X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 מוסף (50X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> L-גלוטמין 200 מ&quot;מ (100x) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> פניצילין (10,000 יחידות למ&quot;ל) / סטרפטומיצין (10,000 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> HI-תורמים סוס סרום </td><td> אטלנטה ביולוגיות </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

תרבויות העיקריות של עכברוש נוירונים בהיפוקמפוס Murine נמצאים בשימוש נרחב כדי לחשוף את המנגנונים התאיים בנוירוביולוגיה. על ידי בידוד הולך וגדל נוירונים בודדים, החוקרים מסוגלים לנתח מאפיינים הקשורים בסחר נייד, מבנה נייד ולוקליזציה חלבון הפרט באמצעות מגוון של שיטות ביוכימיות. תוצאות ניסויים אלה הם קריטיים לבדיקת תיאוריות העוסקות הבסיס העצבי של הזיכרון והלמידה. עם זאת, תוצאות ברורות של צורות אלה של ניסויים מבוססות על היכולת לגדול תרבויות עצביים עם זיהום מינימלי של סוגי תאים אחרים במוח. בפרוטוקול זה, אנו משתמשים בתקשורת ספציפיים המיועדים הצמיחה נוירון ו דיסקציה זהירה של הרקמה העוברית בהיפוקמפוס כדי לייעל צמיחה של נוירונים בריאים תוך מזעור סוגי תאים מזהמים (האסטרוציטים IE). עוברי רקמות העכבר ההיפוקמפוס יכול להיות קשה יותר לבודד מאשר רקמת מכרסם דומה בשל גודל המדגם עבור dissection. אנחנו מראים טכניקות הנתיחה מפורטים של ההיפוקמפוס מ גורים ביום 19 (E19) עובריים של עכברים. לאחר רקמת ההיפוקמפוס הוא מבודד, ניתוק עדין של תאים עצביים מושגת עם ריכוז מדוללת של טריפסין הפרעה מכנית נועד תאים נפרדים של רקמת חיבור, תוך מתן נזק מינימלי תאים בודדים. תיאור מפורט של איך להכין בטפי להחדרת נוזלים לשמש הפרעה כלול. צפיפות ציפוי אופטימליים ניתנים חיסונית הקרינה פרוטוקולים על מנת למקסם את תרבית תאים מוצלח. הפרוטוקול מספק שיטה מהירה (כ 2 שעות) ויעיל התרבות של תאים מרקמות העכבר בהיפוקמפוס.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

אנו מספקים פרוטוקול תרבות מטוהרים מאוד נוירונים בהיפוקמפוס של המוח עכבר טרום לידתי ללא שימוש שכבת תא גלייה מזין.

בידוד והתרבות של נוירונים בהיפוקמפוס מעכברים טרום לידתי

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

סידן פוספט Transfection של ראשוני נוירונים בהיפוקמפוס

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

בידוד והתרבות של ניתק עצב סנסורי מאפרוח עוברים

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

בהיפוקמפוס ראשי בצפיפות נמוכה תרבות Neuron

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

נוירונים חוט השדרה בידוד ותרבות מ עכברים ניאונטליים

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

הדור של נוירוספירות מ מעורב היפוקמאל ראשוני ונוירונים בקליפת המוח מבודדים מ E14-E16 ספראג העובר עכברוש

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

התרבות הראשית של הנוירונים מבודדים מתוך עכבר ממוח עובריים

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

בידוד ותרבות של והעושות, טרוליר, ושדרה מוטוריים נוירונים מ בטרום לידתי : עכברים הטרנסגניים

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...