Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
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हम पांडुलिपि तैयार करने में उसकी मदद के लिए धन्यवाद डॉ. माइकल Wooten. इस काम में एनआईएच 2RO1NS033661 (MWW) द्वारा समर्थित किया गया.

1. सेट अप करने के लिए जल का संग्रहण पहले <ol><li> के न्यूरॉन फसल के लिए जन्म के पूर्व का पिल्ले उत्पन्न वयस्क चूहे के बीच प्रजनन न्यूरॉन अलगाव के दिन के लिए 19 दिन पूर्व अनुसूची. (C57BL / 6 चूहों की उम्र 2-8 महीने इस प्?...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

Hippocampal संस्कृतियों 20 से अधिक वर्षों के लिए किया गया है आण्विक जीव विज्ञान में प्रयोग किया जाता है. सिद्धांत रूप में है, जबकि, neuronal संस्कृतियों के मस्तिष्क के किसी भी हिस्से से किया जा सकता है, hippocampal संस्कृतिय?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> विक्रेता </td><td> कुल संख्या </td></tr><tr><td> एक पूंछ चूहा कोलेजन </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> 354,236 </td></tr><tr><td> पाली-D-lysine समाधान </td><td> Chemicon </td><td> A-003 - ई </td></tr><tr><td> हैंक्स संतुलित नमक समाधान </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> Trypsin समाधान (1X) 0.25%, तरल </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> NeuroBasal मध्यम तरल (1X) </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27-अनुपूरक (50X) तरल </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> एल Glutamine 200 (100X) मिमी तरल </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> पेनिसिलिन (दस हज़ार इकाइयों / मिलीलीटर) / स्ट्रेप्टोमाइसिन (दस हज़ार μg / एमएल) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> हाय - दाता हार्स सीरम </td><td> अटलांटा बायोलॉजिकल </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

चूहा और murine hippocampal न्यूरॉन्स के प्राथमिक संस्कृतियों का व्यापक रूप से तंत्रिका जीव विज्ञान में सेलुलर तंत्र प्रकट करने के लिए उपयोग किया जाता है. अलग और बढ़ व्यक्तिगत न्यूरॉन्स द्वारा, शोधकर्ताओं सेलुलर तस्करी, सेलुलर संरचना और व्यक्ति प्रोटीन की जैव रासायनिक तकनीकों का एक किस्म का उपयोग स्थानीयकरण से संबंधित गुणों का विश्लेषण कर रहे हैं. ऐसे प्रयोगों के परिणाम से याददाश्त और सीखने के तंत्रिका आधार संबोधित सिद्धांतों के परीक्षण के लिए महत्वपूर्ण हैं. हालांकि, प्रयोगों के इन रूपों से स्पष्ट परिणाम के लिए अन्य मस्तिष्क कोशिका प्रकार के द्वारा न्यूनतम संदूषण के साथ neuronal संस्कृतियों को विकसित करने की क्षमता पर predicated हैं. इस प्रोटोकॉल में, हम विशिष्ट न्यूरॉन और hippocampal ऊतक भ्रूण सावधान विच्छेदन के विकास के लिए डिजाइन के लिए स्वस्थ न्यूरॉन्स के विकास का अनुकूलन जबकि contaminating के सेल प्रकार (यानी astrocytes) कम से कम मीडिया का उपयोग करें. भ्रूण माउस hippocampal ऊतक समान कृंतक di के लिए नमूने के आकार के कारण के ऊतकों की तुलना में अलग करने के लिए मुश्किल हो सकता हैssection. हम भ्रूण 19 दिन (E19) माउस पिल्ले से हिप्पोकैम्पस की विस्तृत विच्छेदन तकनीक बताते हैं. एक बार hippocampal ऊतक अलग है, neuronal कोशिकाओं के कोमल हदबंदी trypsin और यांत्रिक विघटन संयोजी ऊतक से अलग कोशिकाओं के लिए डिज़ाइन की एक कमजोर एकाग्रता के साथ हासिल की है जबकि कम से कम व्यक्ति की कोशिकाओं को नुकसान प्रदान. Pipettes कैसे तैयार करने के विघटन में इस्तेमाल किया जा के एक विस्तृत विवरण शामिल है. इष्टतम चढ़ाना घनत्व इम्युनो - प्रतिदीप्ति सफल सेल संस्कृति को अधिकतम करने के प्रोटोकॉल के लिए प्रदान की जाती हैं. प्रोटोकॉल माउस hippocampal ऊतक से neuronal कोशिकाओं की संस्कृति के लिए एक (लगभग 2 घंटा) तेजी से और कुशल तकनीक प्रदान करता है.

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Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

हम अत्यधिक एक फीडर glial सेल परत के उपयोग के बिना शुद्ध जन्म के पूर्व का माउस दिमाग से hippocampal न्यूरॉन्स की संस्कृति के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं.

अलगाव और जन्म के पूर्व चूहे से hippocampal न्यूरॉन्स की संस्कृति

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

विच्छेदन और भ्रूणीय स्पाइनल कॉर्ड से Commissural न्यूरॉन्स की संस्कृति

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection और भ्रूण माउस hippocampal और cortical न्यूरॉन्स के प्राथमिक संस्कृति

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

प्राथमिक hippocampal न्यूरॉन्स की कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

लड़की भ्रूण से अलगाव और Dissociated संवेदी न्यूरॉन्स की संस्कृति

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

भ्रूण कृंतक दिमाग से प्राथमिक Mesencephalic डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अलगाव, संस्कृति और लंबी अवधि के रखरखाव

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

कम घनत्व प्राथमिक हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन संस्कृति

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

नवजात शिशुओं से स्पाइनल कॉर्ड न्यूरॉन्स अलगाव और संस्कृति

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

मिश्रित प्राथमिक हिप्पोकैम्पस और Cortical न्यूरॉन्स E14-E16 Sprague Dawley चूहा भ्रूण से अलग से neurospheres की पीढ़ी

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

भ्रूणीय माउस सेरिबैलम से अलग न्यूरॉन्स की प्राथमिक संस्कृति

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

जन्म के पूर्व Isl मिलियन से ओकुलोमोटर, ट्रोक्लोर और स्पाइनल मोटर न्यूरॉन्स की अलगाव और संस्कृति: जीएफपी ट्रांसजेनिक चूहे

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...