Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
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Ringraziamo il Dr. Michael Wooten per il suo aiuto nella preparazione del manoscritto. Questo lavoro è stato supportato dal NIH 2RO1NS033661 (MWW).

1. Set-up prima del raccolto <ol><li> Per generare cuccioli prenatali per la raccolta dei neuroni, pianificare allevamento topi adulti tra 19 giorni prima del giorno di isolamento dei neuroni. (C57BL / 6 topi età 2-8 mesi sono stati utilizzati accoppiamenti ai fini dello sviluppo di questo protocollo). Accoppiamento di successo può essere confermata dalla presenza di un tappo vaginale nella conferma femminile, palpitazioni o visiva di gravidanza. </li><li> Il giorno prima dell&#39;isolamento neurone: <ol cl...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

Colture di ippocampo sono stati utilizzati in biologia molecolare per oltre 20 anni. In linea di principio, colture neuronali può essere fatto da qualsiasi parte del cervello, culture dell&#39;ippocampo hanno dimostrato di essere più popolari a causa dell&#39;architettura relativamente semplice della popolazione di cellule nervose nell&#39;ippocampo 7. Culture ippocampali sono tipicamente realizzati in fase avanzata di tessuto embrionale. Questo tessuto è più facile da dissociare e contiene un minor numer...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Venditore </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Rat Tail collagene 1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> Poly-D-lisina Soluzione </td><td> Chemicon </td><td> A-003-E </td></tr><tr><td> Hanks soluzione salina bilanciata </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> Tripsina Solution (1X) 0,25%, liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> NeuroBasal Medium (1X) di liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 Supplement (50X) di liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> L-Glutammina 200 mm (100X) di liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> Penicillina (10.000 unità / ml) / streptomicina (10.000 pg / ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> HI-Donor siero di cavallo </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

Culture primarie di ratto e murina neuroni ippocampali sono ampiamente utilizzati per rivelare meccanismi cellulari in neurobiologia. Isolando e crescente singoli neuroni, i ricercatori sono in grado di analizzare le proprietà relative al traffico cellulare, la struttura cellulare e localizzazione singola proteina utilizzando una varietà di tecniche biochimiche. I risultati di tali esperimenti sono fondamentali per testare le teorie riguardanti la base neurale della memoria e dell&#39;apprendimento. Tuttavia, risultati inequivocabili di queste forme di esperimenti si basano sulla capacità di crescere colture neuronali con minima contaminazione da altri tipi di cellule cerebrali. In questo protocollo, si usa mezzi specifici per la crescita dei neuroni e dissezione attenta di tessuto embrionale ippocampale per ottimizzare la crescita dei neuroni sani minimizzando tipi cellulari contaminanti astrociti (cioè). Tessuti embrionali del mouse ippocampale può essere più difficile da isolare rispetto al tessuto roditori simili a causa delle dimensioni del campione per dissection. Mostriamo tecniche di dissezione dettagliata dei dell&#39;ippocampo dal embrionali cuccioli di topo al giorno 19 (E19). Una volta che il tessuto dell&#39;ippocampo è isolato, dissociazione dolce delle cellule neuronali si ottiene con una concentrazione diluita di tripsina e distruzione meccanica progettati per separare le cellule dal tessuto connettivo, fornendo minimo danneggiamento singole celle. Una descrizione dettagliata di come preparare pipette da utilizzare nella interruzione è inclusa. Placcatura densità ottimali sono previste per immuno-fluorescenza protocolli per massimizzare la cultura di successo cellulare. Il protocollo prevede una tecnica veloce (circa 2 ore) ed efficiente per la coltura di cellule neuronali di topo tessuto dell&#39;ippocampo.

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Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Forniamo un protocollo per la coltura di neuroni dell&#39;ippocampo altamente purificato da cervelli dei topi prenatale senza l&#39;uso di uno strato di cellule gliali alimentatore.

Isolamento e la coltura di neuroni ippocampali da topi prenatali

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissezione e la cultura di neuroni embrionali commissurali da midollo spinale

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Ricerca

Neuroscienze

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection e cultura primaria di neuroni embrionali di topo ippocampale e corticale

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Fosfato di calcio trasfezione di primaria neuroni dell&#39;ippocampo

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolamento e Cultura della dissociato neuroni sensoriali da embrioni di gallina

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Isolamento, cultura e lungo termine Manutenzione di primaria mesencefalico neuroni dopaminergici Da Brains embrionali dei roditori

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

A bassa densità primaria ippocampale Cultura Neuron

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Isolamento e cultura dei neuroni del midollo spinale da topi neonatali

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

Generazione di neurosfere da neuroni ippocampali primari misti e corticali isolati da E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

Cultura primaria dei neuroni isolata dal cerbellello del topo embrionale

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolamento e coltura di Oculomotor, Trochlear, e MotoNeuroni Spinali da Prenatal Islmn:GFP Topi Transgenici

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...