Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Мы благодарим д-р Майкл Вутен за помощь в подготовке рукописи. Эта работа была поддержана NIH 2RO1NS033661 (MWW).

1. Настройки до сбора урожая <ol><li> Для создания пренатальной щенков для сбора нейрона, график разведения между взрослых мышей 19 дней до дня изоляции нейронов. (C57BL / 6 мышей возрасте 2-8 месяцев были использованы в вязки в целях развития этого протокола). Успешное спаривание может быть...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

Гиппокампа культур используются в молекулярной биологии уже более 20 лет. Хотя в принципе нейронных культур могут быть сделаны из любой части мозга, гиппокампа культуры оказались самыми популярными в связи с относительно простой архитектуры населения нервных клеток в гиппокампе 7.</...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Продавец </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> Хвост крысы коллагена 1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> Поли-D-лизин решения </td><td> Chemicon </td><td> А-003-E </td></tr><tr><td> Хэнкс сбалансированный солевой раствор </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> Раствора трипсина (1X) 0,25%, жидких </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> NeuroBasal среднего (1X) жидкости </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> Дополнение B27 (50х) жидкости </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> L-глютамин 200 мм (100X) жидкость </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> Пенициллин (10000 ЕД / мл) / стрептомицина (10000 мкг / мл) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> HI-доноров лошадиной сыворотки </td><td> Атланты биологические </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

Первичные культуры крысы и мыши нейронов гиппокампа широко использованы для выявления клеточных механизмов в области нейробиологии. Выделяя и рост отдельных нейронов, ученые могут анализировать свойства, связанные с оборотом сотовых, сотовые структуры и отдельные локализации белка с помощью различных биохимических методов. Результаты этих экспериментов очень важны для проверки теории решения нейронные основы памяти и обучения. Тем не менее, однозначного результата от этих форм эксперимента основана на способности к росту нейронов культур с минимальным загрязнением другие типы клеток мозга. В этом протоколе, мы используем конкретные средства массовой информации предназначена для роста нейронов и тщательного вскрытия эмбриональной ткани гиппокампа для оптимизации роста здоровых нейронов при минимизации загрязнения типах клеток (например, астроциты). Эмбриональные ткани гиппокампа мыши может быть более трудно выделить, чем аналогичные ткани грызунов, в связи с размером выборки для ди-ssection. Мы покажем, подробные методы вскрытия гиппокампе мышей из эмбриональных день 19 (E19) щенков. После ткани гиппокампа изолирован, нежный диссоциации нервных клеток достигается с помощью разбавленной концентрации трипсина и механическое разрушение, направленных на отдельные клетки соединительной ткани, обеспечивая при этом минимальный ущерб отдельные клетки. Подробное описание того, как подготовить пипетки, которые будут использоваться в нарушение включен. Оптимальная плотность покрытия предназначены для иммуно-флуоресценции протоколов максимально успешной культуре клеток. Протокол обеспечивает быструю (около 2 ч) и эффективный способ для культуры нервных клеток гиппокампа мышей из ткани.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Мы предоставляем протокол к культуре высокой степени очистки нейронов гиппокампа из мозга мышей пренатальной без использования подачи глиальных слоя клеток.

Выделение и культуре нейронов гиппокампа мышей от пренатального

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Разбор и культуры спаечный Нейроны из эмбриональных спинного мозга

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection и первичной культуры эмбриональных Мышь гиппокампа и корковых нейронов

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Фосфат кальция Трансфекцию первичной нейронов гиппокампа

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Выделение и культуры диссоциированных сенсорные нейроны От куриные эмбрионы

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Изоляция, культуры и долгосрочного поддержания первичного теменной дофаминергических нейронов из эмбриональных грызунов Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Низкая плотность первичного гиппокамп Нейрон культура

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Изоляция и культура нейронов спинного мозга от неонатальных мышей

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

Поколение нейросфер из смешанных первичных гиппокампа и кортикальных нейронов изолированы от E14-E16 Sprague Даули Крыса эмбриона

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

Первичная культура нейронов, изолированных от эмбриональной мыши Cerebellum

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Изоляция и культура Oculomotor, Trochlear, и спинного моторного нейронов от пренатальной Islmn:GFP Трансгенных мышей

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...