Name: isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice
Uploaded: 2012-07-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Vi tackar Dr Michael Wooten för hans hjälp att förbereda manuskriptet. Detta arbete stöddes av NIH 2RO1NS033661 (MWW).

1. Set-up Innan Harvest <ol><li> För att generera prenatala valpar för neuron skörd, schemalägga avel mellan vuxna möss 19 dagar före dagen för neuron isolering. (C57BL / 6 möss åldrar 2-8 månader användes i parningar för i syfte att utveckla detta protokoll). Lyckad parning kan bekräftas genom detektering av en vaginal plugg i honan, hjärtklappning eller visuell bekräftelse av graviditeten. </li><li> Dagen före neuron isolering: <ol class="ualpha"><li> För immunfluorescens tillämpningar, ja...

<ol>
	<li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-442 (1977).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons.">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 71, 143-155 (1997).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J. Neurosci. Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Burwell, R. D., Saddoris, M. P., Bucci, D. J., Wiig, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticohippocampal+contributions+to+spatial+and+contextual+learning.">Corticohippocampal contributions to spatial and contextual learning.</a> J. Neurosci. 24, 3826-3836 (2004).</li><li>Gluck, M. A., Myers, C., Meeter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-hippocampal+interaction+and+adaptive+stimulus+representation:+a+neurocomputational+theory+of+associative+learning+and+memory.">Cortico-hippocampal interaction and adaptive stimulus representation: a neurocomputational theory of associative learning and memory.</a> Neural Netw. 18, 1265-1279 (2005).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat. Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gliogenesis+in+the+striatum+of+the+adult+rat:+alteration+in+neural+progenitor+population+after+psychostimulant+exposure.">Gliogenesis in the striatum of the adult rat: alteration in neural progenitor population after psychostimulant exposure.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 130, 41-51 (2001).</li><li>Mao, L., Wang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+preprodynorphin+and+preproenkephalin+mRNA+expression+by+selective+activation+of+group+I+metabotropic+glutamate+receptors+in+characterized+primary+cultures+of+rat+striatal+neurons.">Upregulation of preprodynorphin and preproenkephalin mRNA expression by selective activation of group I metabotropic glutamate receptors in characterized primary cultures of rat striatal neurons.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 86, 125-137 (2001).</li><li>Oorschot, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fluorodeoxyuridine+on+neurons+and+non-neuronal+cells+in+cerebral+explants.">Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants.</a> Exp. Brain Res. 78, 132-138 (1989).</li><li>Price, P. J., Brewer, G. J., Federoff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+-free+media+for+neural+cell+cultures.">Serum -free media for neural cell cultures.</a> Protocols for Neural Cell Culture. , (2001).</li><li>Shen, J., Watanabe, S., Kaneko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dissociation+with+papain+reduces+the+density+of+cGMP-activated+channels+of+the+retinal+rod.">Cell dissociation with papain reduces the density of cGMP-activated channels of the retinal rod.</a> Jpn. J. Physiol. 45, 151-164 (1995).</li><li>Stratmann, G., Sall, J. W., May, L. D., Loepke, A. W., Lee, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+anesthetic+properties:+The+effects+of+isoflurane+on+brain+cell+death,+neurogenesis+and+long-term+neurocognitive+function.">Beyond anesthetic properties: The effects of isoflurane on brain cell death, neurogenesis and long-term neurocognitive function.</a> Anesthesia and Analgesia. 110, 431-437 (2009).</li><li>Wallace, T. L., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosine+arabinoside+kills+postmitotic+neurons:+evidence+that+deoxycytidine+may+have+a+role+in+neuronal+survival+that+is+independent+of+DNA+synthesis.">Cytosine arabinoside kills postmitotic neurons: evidence that deoxycytidine may have a role in neuronal survival that is independent of DNA synthesis.</a> J. Neurosci. 9, 115-124 (1989).</li></ol>

Hippocampus kulturer har använts i molekylär biologi för mer än 20 år. I princip kan neuronala kulturer göras från någon del av hjärnan har hippocampus kulturer visat sig vara den mest populära på grund av den relativt enkla arkitektur nervcell befolkningen i hippocampus 7. Hippocampus kulturer vanligtvis tillverkade av sent skede embryonal vävnad. Denna vävnad är lättare att skilja och innehåller färre gliaceller än vad moget hjärnvävnad 1. Isolering av hippocampus neuroner fr?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn Reagens </td><td> Leverantör </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Råttsvanskollagen 1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354.236 </td></tr><tr><td> Poly-D-lysin-lösning </td><td> Chemicon </td><td> En-003-E </td></tr><tr><td> Hanks balanserade saltlösning </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td></tr><tr><td> Trypsinlösning (1X) 0,25%, flytande </td><td> Invitrogen </td><td> 15050-065 </td></tr><tr><td> Neurobasal Medium (1X) vätska </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 (50x) vätska </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> L-Glutamin 200 mM (100X) vätska </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-149 </td></tr><tr><td> Penicillin (10.000 enheter per ml) / streptomycin (10.000 xg / ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> HI-donatorhästserum </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S12150H </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice

Primära kulturer av rått-och mus-hippokampala neuroner används allmänt för att avslöja cellulära mekanismer i neurobiologi. Genom att isolera och växande enskilda nervceller, forskare kan analysera egenskaper som relaterade till cellulär människohandel, cellstruktur och individuell protein lokalisering med hjälp av olika biokemiska tekniker. Resultat från sådana experiment är avgörande för att testa teorier som behandlar den neurala grunden för minne och inlärning. Emellertid är entydiga resultat från dessa former av experiment baserad på förmågan att växa neuronala kulturer med minimal förorening av andra typer av hjärnceller. I detta protokoll använder vi specifika medier avsedda för neuron tillväxt och noggranna dissektion av embryonal hippocampusvävnad att optimera tillväxten av friska nervceller och samtidigt minimera kontaminerande celltyper (t.ex. astrocyter). Embryonal musen hippocampusvävnad kan vara svårare att isolera än liknande gnagare vävnaden på grund av storleken på provet för dissection. Vi visar detaljerade dissekering tekniker för hippocampus från embryonala dag 19 (E19) mus valpar. När väl hippocampusvävnad isoleras, är milda dissociation av neuronala celler som uppnås med en utspädd koncentration av trypsin och mekanisk sönderdelning utformad för att separera celler från bindväv och samtidigt tillhandahålla minimal skada på individuella celler. En detaljerad beskrivning av hur man framställer pipetter som skall användas i att upplösa ingår. Optimala plätering densiteter finns för immuno-fluorescens protokoll för att maximera framgång cellodling. Protokollet tillhandahåller en snabb (ungefär 2 h) och effektiv teknik för odling av neuronala celler från mus hippocampusvävnad.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice at JoVE.com

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Vi erbjuder ett protokoll för odling av högrenade hippocampus nervceller från prenatal mus hjärnor utan användning av en matare gliacell lager.

Isolering och kultur hippocampusneuroner från Prenatal möss

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissektion och kultur commissural neuroner från embryonala ryggmärg

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection och Primary kultur av embryonala Mouse hippocampus och kortikala Neuroner

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Kalciumfosfattransfektion av primär hippocampus nervceller

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolering och odling av dissocierade sensoriska neuroner från kycklingembryon

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Isolering, kultur och långsiktigt underhåll av primär mesencefala dopaminerga neuron från embryonala Gnagare Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Low-density Primary hippocampus Neuron kultur

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Ryggmärgsneurons isolering och kultur från neonatala möss

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

Generering av Neurosfärer från blandade primära hippocampal och kortikala neuroner isolerade från E14-E16 Sprague Dawley Rat embryo

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

Primär kultur av neuroner isolerade från embryonala mus cerebellum

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolering och kultur av Oculomotor, trochlear, och spinal motoriska nervceller från prenatal ISLmn: GFP transgena möss

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...