Name: vampiric isolation of extracellular fluid from caenorhabditis elegans
Uploaded: 2012-03-19T13:00:00
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我々はハンターラボの共同性質を承諾したがって、この技術の開発が可能とからかわ役立つ議論と支援のためにそれらに感謝します。我々はナイジェルデラニーやワーム、および細菌株に対する線虫Caenorhabditis遺伝学センターに感謝したいと思います。この作品は、米国国立衛生研究所CPHにGM089795助成金によって支えられている。

1。材料の調整吸血鬼の逆マイクロインジェクションのために必要な材料は、トランスジェニックCを作るために使用される標準的なマイクロインジェクション技術に必要なものと同様であるエレガンス株1。いくつかの試薬 ​​（例えば、アッセイプレート）が実験的移転の日を作っていますが、材料の多くは、協調的（時刻表については表1を<...

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	<li>Berkowitz, L. A., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Stable+Transgenic+C.+elegans+Using+Microinjection.">Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection.</a> J. Vis. Exp. (18), e833-e833 (2008).</li><li>Hirose, T., Nakano, Y., Nagamatsu, Y., Misumi, T., Ohta, H., Ohshima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+GMP-dependent+protein+kinase+EGL-4+controls+body+size+and+lifespan+in+C+elegans.">Cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 controls body size and lifespan in C elegans.</a> Development. 130, 1089-1099 (2003).</li><li>Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+cell+lineage+following+laser+ablation+of+cells+in+the+somatic+gonad+of+Caenorhabditis+elegans.">Alterations in cell lineage following laser ablation of cells in the somatic gonad of Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 87, 286-300 (1981).</li><li>Hegreness, M., Shoresh, N., Hartl, D., Kishony, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+equivalence+principle+for+the+incorporation+of+favorable+mutations+in+asexual+populations.">An equivalence principle for the incorporation of favorable mutations in asexual populations.</a> Science. 311, 1615-1617 (2006).</li><li>Labrousse, A., Chauvet, S., Couillault, C., Kurz, C. L., Ewbank, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+is+a+model+host+for+Salmonella+typhimurium.">Caenorhabditis elegans is a model host for Salmonella typhimurium.</a> Curr. Biol. 10, 1543-1545 (2000).</li><li>Kamath, R. S., Martinez-Campos, M., Zipperlen, P., Fraser, A. G., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+specific+RNA-mediated+interference+through+ingested+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Genome. Biol. 2, (2001).</li><li>Min, K., Kang, J., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+feeding+RNAi+method+for+simultaneous+knock-down+of+more+than+one+gene+in+Caenorhabditis+elegans.">A modified feeding RNAi method for simultaneous knock-down of more than one gene in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechniques. 48, 229-232 (2010).</li><li>Zhuang, J. J., Hunter, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specificity+of+Caenorhabditis+elegans+Enhanced+RNAi+Mutants.">Tissue-specificity of Caenorhabditis elegans Enhanced RNAi Mutants.</a> Genetics. 188 (1), 235-237 (2011).</li><li>Way, J. C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mec-3,+a+homeobox-containing+gene+that+specifies+differentiation+of+the+touch+receptor+neurons+in+C.+elegans.">mec-3, a homeobox-containing gene that specifies differentiation of the touch receptor neurons in C. elegans.</a> Cell. 54, 5-16 (1988).</li><li>Kamath, R. S., Fraser, A. G., Dong, Y., Poulin, G., Durbin, R., Gotta, M., Kanapin, A., Bot, N. L. e., Moreno, S., Sohrmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi.">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li><li>Winston, W. M., Molodowitch, C., Hunter, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+RNAi+in+C.+elegans+requires+the+putative+transmembrane+protein+SID-1.">Systemic RNAi in C. elegans requires the putative transmembrane protein SID-1.</a> Science. 295, 2456-2459 (2002).</li></ol>

我々はここで、モデル生物Cから細胞外液の単離および特徴付けを可能にする新規な方法を提示しているエレガンス 。技術は細胞外液の合計量を高めるためにドナーワームの遺伝的または物理的操作から始まります。細胞外液は、その後、変更されたマイクロインジェクション法を用いて単離される。ワームは、手順の間に依然としてワームを保持するために、乾燥したアガロ?...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt;日</strong</td&gt;<td<strong&gt;ウォームプレップ</strong</td&gt;<td<strong&gt;素材の準備</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -7または前</td&gt;<td&gt;きれいに維持し、うまく供給<em&gt; CLR-1（e1745）</em&gt;とN2ワーム</td&gt;<td&gt;インジェクションパッド、NGMプレート、NGM +炭水化物/ IPTGプレート、OP50のLB在庫を確認</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -6</td&gt;<td</td&gt;<tdLB +炭水化物でRNAiの食品外&gt;ストリーク</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -5</td&gt;<td</td&gt;<td&gt; RNAiの食物と一緒に一晩3 mLを接種</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -4</td&gt;<tdRNAiのプレートに&gt;移動した胚</td&gt;<td&gt;シードRNAiのプレート</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -3</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -2</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; -1</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 0</td&gt;<td&gt; 4時間25にワームをシフト</td&gt;<td&gt;アッセイプレートを作る</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td</td&gt;<td&gt; NGMプレートをきれいにするワームを移動</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td</td&gt;<td&gt;吸血転送</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td</td&gt;<td&gt;受信者を回復</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1</td&gt;<td&gt;転送先の相手を削除</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 2</td&gt;<td&gt;スコア子孫</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;<p class="jove_content"<strong&gt;表1。</strong&gt;素材の準備タイム。</p&gt;<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt;設備</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ピコリットル圧力インジェクタ</td&gt;<td&gt;ワーナー·インスツルメンツ</td&gt;<td&gt; 65から0001（PLI-100）</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;火焔/ブラウンマイクロピペットプラー</td&gt;<td&gt;サターインスツルメンツ</td&gt;<td&gt; P97</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; AXIOVERT 200</td&gt;<td&gt;ツァイス</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td colspan="3"<strong&gt;試薬</strong&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ミネラルオイル</td&gt;<td&gt; [EMサイエンス</td&gt;<td&gt; MX1560-1</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 22x50のない1つの½カバーガラス</td&gt;<td&gt;コーニング</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; SeaKem LEアガロース</td&gt;<td&gt;ロンザ</td&gt;<td&gt; 50004</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ホウケイ酸ガラス管</td&gt;<td&gt;ワールド精度インスツルメンツ</td&gt;<td&gt; 1B100F-4</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;次亜塩素酸ナトリウム溶液（5％有効塩素）</td&gt;<td&gt; JTベーカー</td&gt;<td&gt; 9416から01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td colspan="3"<strong<em&gt; Cエレガンス</em&gt;と菌株</strong&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; CLR-1（e1745）Ⅱ</em&gt;<sup&gt; 9</sup</td&gt;<td&gt;線虫遺伝学センター（CGC）</td&gt;<td&gt; CB3241</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; GLP-1</em&gt; RNAiベクター<sup&gt; 10</sup&gt;</td&gt;<tdバイオサイエンス&gt;ソース（Ahringer給食ライブラリ）</td&gt;<td&gt; F02A9.6</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; PAL-1</em&gt; RNAiベクター<sup&gt; 11</sup&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; pHC187</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; OP50-GFP<sup&gt; 5</sup&gt;</td&gt;<td&gt;線虫遺伝学センター（CGC）</td&gt;<td&gt; OP50-GFP</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; YFP<em&gt; E大腸菌の</em&gt;<sup&gt; 4</sup&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; MC4100-YFP</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;<p class="jove_content"<strong&gt;表2。</strong&gt;特定の試薬および装置。</p

vampiric isolation of extracellular fluid from caenorhabditis elegans

遺伝的に扱いやすいモデル生物で虫はその短い世代時間で有効になって生物学的な質問でも、成長と小型のしやすさの無数の洞察を提供してきました。この小さなサイズは、しかし、他のモデルシステムに見られる技術的なアプローチの数を不許可しています。たとえば、哺乳動物系と植物の接ぎ木技術の輸血は、循環系の組成およびシグナリングの質問を有効にします。ワームの循環系、偽体腔は、最近まで直接アッセイすることは不可能であった。細胞間のシグナリングおよび循環器系の組成物Cの質問にお答えするには虫の研究者は、伝統的に遺伝的解析、細胞/組織特異救助、及びモザイク解析に目を向けました。これらの技術は、細胞間で何が起こっているのかを推測するための手段を提供しますが、細胞外分子の同定および特徴に普遍的に適用されません。ここでは、NEを提示直接アッセイするwly開発された技術でのpseudocoelomic流体エレガンス 。技術は細胞外液の量を増加させるためにいずれかの遺伝的または物理的操作から始まります。その後動物は細かいバランス圧力制御を可能にするマイクロインジェクションのリグを使用して吸血鬼の逆マイクロインジェクション法に供される。細胞外液の分離した後、収集された流体は、他の動物への伝達によってまたは分子によってアッセイすることができる。この手法の有効性を実証するために、我々は全身RNAi応答時のアッセイ細胞外シグナル伝達分子、長いdsRNAの具体例を詳細にアプローチを提示する。全身性RNAiの特性評価は、原則として例の証拠ですが、私たちは、循環系の組成およびシグナリングのさまざまな質問に答えるために適応可能であるとして、このテクニックを参照してください。

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Vampiric Isolation of Extracellular Fluid from Caenorhabditis elegans

モデル生物<em&gt; Cエレガンス</em&gt;受動循環系としてpseudocoelomic流体を使用しています。この流体の直接アッセイは、以前には不可能であった。ここでは、直接アッセイするために、細胞外空間を斬新な手法を提示し、原則として例の証拠としてRNAi応答時に全身のサイレン信号を使用する。

から細胞外液のヴァンパイア·アイソレーション<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

The genetically tractable model organism C. elegans has provided insights into a myriad of biological questions, enabled by its short generation time, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Vampiric Isolation of Extracellular Fluid from Caenorhabditis elegans

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

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計測線虫（Caenorhabditis elegans）</em固体培地上>寿命

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

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アイソレーションと試験管内で</emの>活性化線虫（Caenorhabditis elegans）精子

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

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固体プレートベースの食餌制限線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

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の初期発生のタイムラプス顕微鏡線虫（Caenorhabditis elegans）

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

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基本的な<em&gt;線虫Caenorhabditis elegans</em&gt;方法：同期との観測

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

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におけるプロスタグランジンの抽出と分析<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

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そのまま線虫の酸素消費量の測定

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

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細胞外小胞体のカエノールハブディティス・エレガンスの精製と分析

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

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カエノハブディティス・エレガンスにおける組織特異的プロテオスタティック低下の定量化

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

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カエノハブディティス・エレガンスにおける年齢関連神経変性疾患のモデル化

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...