Name: ex vivo mimicry of normal and abnormal human hematopoiesis
Uploaded: 2012-04-10T12:00:00
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इस काम रिचर्ड थॉमस Leukaemia फंड, लेडी टाटा मेमोरियल ट्रस्ट, Northwick पार्क अस्पताल Leukaemia रिसर्च ट्रस्ट फंड और राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (NIHR), ब्रिटेन द्वारा वित्त पोषित किया गया.

1. पाड़ निर्माण और scaffolds जैव functionalization <ol><li> पेट्री डिश डिस्क के रूप में पु scaffolds के (ध्यान में लीन होना आकार 100-250 मिमी, porosity के 90-95%) बनाना, thermally प्रेरित चरण जुदाई एक बहुलक समाधान (Dioxan में 5wt%) की तैयारी के बाद 13 प्रक्रिया ...

<ol>
	<li>Orkin, S., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoiesis:+an+evolving+paradigm+for+stem+cell+biology.">Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology.</a> Cell. 132, 631-644 (2008).</li><li>Spradling, A., Drummond-Barbosa, D., Kai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+find+their+niche.">Stem cells find their niche.</a> Nature. 414, 98-104 (2001).</li><li>Panoskaltsis, N., Mantalaris, A., Wu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+a+mimicry+of+bone+marrow+tissue+ex+vivo.">Engineering a mimicry of bone marrow tissue ex vivo.</a> J Biosci. Bioeng. 100, 28-35 (2005).</li><li>Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem/progenitor+cells+in+their+niche.">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457, 92-96 (2009).</li><li>Mantalaris, A., Bourne, P., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+human+osteoclasts+in+a+three-dimensional+bone+marrow+culture+system.">Production of human osteoclasts in a three-dimensional bone marrow culture system.</a> Biochem. Eng. J. 20, 189-196 (2004).</li><li>Placzek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+bioprocessing:+fundamentals+and+principles.">Stem cell bioprocessing: fundamentals and principles.</a> J. R. Soc. Interface. 6, 209-232 (2009).</li><li>Dexter, T., Testa, N., Prescott, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Cell Biology. 14, 387-405 (1976).</li><li>Piacibello, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+growth+factor+requirement+of+primitive+cord+blood+hematopoietic+stem+cell+for+self-renewal+and+amplification+vs+proliferation+and+differentiation.">Differential growth factor requirement of primitive cord blood hematopoietic stem cell for self-renewal and amplification vs proliferation and differentiation.</a> Leukemia. 12, 718-727 (1998).</li><li>Yoshida, T., Takagi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+processing+engineering+for+ex+vivo+expansion+of+hematopoietic+cells:+a+review.">Cell processing engineering for ex vivo expansion of hematopoietic cells: a review.</a> Biochemical Engineering Journal. 20, 99-106 (2004).</li><li>Lim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intelligent+bioprocessing+for+haemotopoietic+cell+cultures+using+monitoring+and+design+of+experiments.">Intelligent bioprocessing for haemotopoietic cell cultures using monitoring and design of experiments.</a> Biotechnol. Adv. 25, 353-368 (2007).</li><li>Mortera-Blanco, T., Mantalaris, A., Bismarck, A., Panoskaltsis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+three-dimensional+scaffold+for+ex+vivo+biomimicry+of+human+acute+myeloid+leukaemia.">The development of a three-dimensional scaffold for ex vivo biomimicry of human acute myeloid leukaemia.</a> Biomaterials. 31, 2243-2251 (2010).</li><li>Mortera-Blanco, T., Mantalaris, A., Bismarck, A., Aqel, N., Panoskaltsis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+cytokine-free+expansion+of+cord+blood+mononuclear+cells+in+three-dimensional+scaffolds.">Long-term cytokine-free expansion of cord blood mononuclear cells in three-dimensional scaffolds.</a> Biomaterials. 32, 9263-9270 (2011).</li><li>Safinia, L., Datan, N., Hohse, M., Mantalaris, A., Bismarck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+methodology+for+the+effective+surface+modification+of+porous+polymer+scaffolds.">Towards a methodology for the effective surface modification of porous polymer scaffolds.</a> Biomaterials. 26, 7537-7547 (2005).</li></ol>

पूर्व vivo 3D संस्कृति यहाँ प्रस्तुत प्रणाली हमें hematopoiesis के एक 3 डी biomimicry स्थापित करने के लिए सक्षम बनाता है कि का स्मरण दिलाता है मूल बी.एम. वास्तुकला और सेलुलर बहिर्जात साइटोकिन्स की स्वतंत्र फेनोटाइप. 3D म...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue No</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dioxan</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D20,186-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12440-053</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3580</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Fluka Biochemika</td>
			<td>49624</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WG32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10108-165</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD71</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-32272</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45-FITC</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>74895</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD71-PE</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>555537</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD235a-PE-Cy5</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>555570</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-8032</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo mimicry of normal and abnormal human hematopoiesis

Hematopoietic स्टेम कोशिकाओं को एक अद्वितीय microenvironment की आवश्यकता है क्रम में रक्त कोशिका 1 गठन को बनाए रखने, अस्थि मज्जा (बी एम) एक जटिल तीन आयामी (3 डी) ऊतक जिसमें hematopoiesis है niches के है स्थानिक सेलुलर microenvironments संगठित द्वारा विनियमित 2-4 करार दिया. बी.एम. niches के संगठन समारोह या सामान्य या घातक 5 बी.एम. की शिथिलता के लिए महत्वपूर्ण है. इसलिए vivo में एक पूर्व vivo अनुकरण का उपयोग microenvironment में की एक बेहतर समझ में मदद मिलेगी हमें 6 leukemogenesis की आणविक, सेलुलर और microenvironmental निर्धारकों स्पष्ट है. वर्तमान में, hematopoietic कोशिकाओं इन विट्रो में दो आयामी (2 डी) टिशू कल्चर बोतल / 7 अच्छी तरह प्लेटें या तो allogenic या xenogenic stromal कोशिकाओं के साथ सह - संस्कृति या बहिर्जात 8 साइटोकिन्स के अलावा की आवश्यकता में संवर्धित कर रहे हैं. इन शर्तों कृत्रिम और vivo में से अलग </e&gt; microenvironment में है कि वे 3 डी सेलुलर niches की कमी है और असामान्य रूप से उच्च साइटोकाइन सांद्रता जो और 9,10 pluripotency के भेदभाव नुकसान में परिणाम कर सकते हैं करने के लिए कोशिकाओं को उजागर कर रहा हूँ. इस के साथ साथ, हम एक उपन्यास 3D अस्थि मज्जा संस्कृति प्रणाली है कि vivo में 3 डी विकास पर्यावरण में simulates और बहिर्जात वृद्धि कारकों का अभाव में multilineage hematopoiesis का समर्थन करता है प्रस्तुत करते हैं. अत्यंत झरझरा पाड़ इस polyurethane (पु) से बना प्रणाली में इस्तेमाल किया, उच्च घनत्व एक उच्च विशिष्ट सतह क्षेत्र भर में 11 2d में पारंपरिक monolayer की संस्कृति की तुलना में सेल के विकास की सुविधा. हमारा काम संकेत दिया है कि यह मॉडल मानव कॉर्ड (सीबी) रक्त mononuclear कोशिकाओं (एमएनसी) 12 और बहिर्जात साइटोकिन्स के अभाव में प्राथमिक leukemic कोशिकाओं के विकास का समर्थन किया है. इस उपन्यास 3 डी अनुकरण hematopoiesis अध्ययन और लेकिमिया के लिए उपन्यास उपचार का पता लगाने के लिए एक मानव प्रयोगात्मक मॉडल के विकास के लिए एक व्यवहार्य मंच प्रदान करता है.

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Ex vivo Mimicry of Normal and Abnormal Human Hematopoiesis

Hematopoiesis के लिए एक 3 डी संस्कृति प्रणाली मानव गर्भनाल रक्त और leukemic अस्थि मज्जा की कोशिकाओं का उपयोग वर्णित है. विधि बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन के साथ लेपित एक झरझरा सिंथेटिक polyurethane पाड़ का उपयोग पर आधारित है. इस पाड़ कोशिकाओं की एक विस्तृत श्रृंखला को समायोजित करने के लिए अनुकूलनीय है.

सामान्य और असामान्य मानव Hematopoiesis के पूर्व vivo अनुकरण

Hematopoietic stem cells require a unique microenvironment in order to sustain blood cell formation1; the bone marrow (BM) is a complex three-dimensional ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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