Name: mame models for 4d live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression
Uploaded: 2012-02-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression at JoVE.com

עבודה זו נתמכה, בין השאר, על ידי המכונים הלאומיים לבריאות R01 CA131990 (BFS ו RRM). חי תאים הדמיה בוצעה Core משאבים, מיקרוסקופיה הדמיה Cytometry נתמך, בין השאר, על ידי NIH מרכז מענק p30 CA22453 כדי סרטן Karmanos המכון, וויין סטייט ועל ידי אגף המחקר Perinatology של המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות , וויין סטייט.

1. הכן DQ-מצעים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר lyophilized DQ-מצעים לחמם לטמפרטורת החדר לפני הפתיחה בקבוקונים, להכין פתרון מלאי של 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​של מצע-DQ במים deionized, ומחלקים ל -50 aliquots μl ו חנות ב 4 ° C. </li></ol> זה עשוי ל...

<ol>
	<li>Sameni, M., Dosescu, J., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+of+proteolysis:+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis.">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol. Imaging. 2, 159-175 (2003).</li><li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+protease+activity+in+living+cells:+from+two+dimensions+to+four+dimensions.">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. 39, (2008).</li><li>Jedeszko, C., Victor, B. C., Podgorski, I., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+hepatocyte+growth+factor+promotes+invasion+of+human+mammary+ductal+carcinoma+in+situ.">Fibroblast hepatocyte growth factor promotes invasion of human mammary ductal carcinoma in situ.</a> Cancer Res. 69, 9148-9155 (2009).</li><li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+live-cell+imaging+demonstrates+that+beta1-integrin+promotes+type+IV+collagen+degradation+by+breast+and+prostate+cancer+cells.">Functional live-cell imaging demonstrates that beta1-integrin promotes type IV collagen degradation by breast and prostate cancer cells.</a> Mol. Imaging. 7, 199-213 (2008).</li><li>Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p21-activated+kinase+1+coordinates+aberrant+cell+survival+and+pericellular+proteolysis+in+a+three-dimensional+culture+model+for+premalignant+progression+of+human+breast+cancer.">p21-activated kinase 1 coordinates aberrant cell survival and pericellular proteolysis in a three-dimensional culture model for premalignant progression of human breast cancer.</a> Neoplasia. 10, 314-328 (2008).</li><li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+quantifying+the+dynamics+of+tumor+associated+proteolysis.">Imaging and quantifying the dynamics of tumor associated proteolysis.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 299-309 (2009).</li><li>Cavallo-Medved, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+demonstrates+that+proteases+in+caveolae+of+endothelial+cells+degrade+extracellular+matrix.">Live-cell imaging demonstrates that proteases in caveolae of endothelial cells degrade extracellular matrix.</a> Exp. Cell. Res. 315, 1234-1246 (2009).</li><li>Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microvasculature+and+microenvironment:+novel+insights+through+intravital+imaging+in+pre-clinical+models.">Tumor microvasculature and microenvironment: novel insights through intravital imaging in pre-clinical models.</a> Microcirculation. 17, 206-225 (2010).</li></ol>

כפי שתואר, cocultures מיים יכול לשמש הדמיה חיה תאים בזמן אמת של אינטראקציות בין המרכיבים הסלולר השונות המרכיבות הגידול השד microenvironment שלה. בשנת הלימודים השוטפת במעבדה שלנו, השתמשנו מיים cocultures לזהות מסלולים פרוטאוליטים הקשורים המעבר DCIS כדי קרצינומה ductal פולשנית, כמו גם את הא...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מרתף קרום המחודשת (Cultrex) </td><td> Trevigen </td><td> 3445-005-01 </td><td> דומה Matrigel (BD Biosciences) </td></tr><tr><td> קולגן אני </td><td> לכידות מעבדות </td><td> 5005-B </td><td></td></tr><tr><td> DQ-מצעים (קולגן I, IV) </td><td> Invitrogen </td><td> DQ-col I-D12060 DQ-col IV D12052 </td><td></td></tr><tr><td> 22 מ&quot;מ coverslips פלסטיק </td><td> פישר סיינטיפיק ושות </td><td> 12-547 </td><td> חותכים לשניים, להשאיר באתנול 70% עבור 10 דקות אוויר יבש לפני השימוש. </td></tr><tr><td> תרבית תאים בינוני </td><td> Lonza </td><td> MEBM PRF-CC-3153 MEGM CC-4136 </td><td> פנול אדום חינם </td></tr><tr><td> ibiTreat μ-Dish </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td> Volocity תוכנה </td><td> פרקין אלמר, </td><td> גרסה 5.5 </td><td> מותגים אחרים של תוכנת ההדמיה ניתן להשתמש כדי לייצר שחזורים 3D וסרטים. </td></tr></tbody></table>

mame models for 4d live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression

פיתחנו מודלים coculture 3D, אשר אנו מיים טווח (מ &#39;ammary rchitecture ו-M ngineering icroenvironment ה), והשתמשו בהם הדמיה חיה תאים בזמן אמת של התא: אינטראקציות התא. המטרה הכללית שלנו היתה לפתח דגמים לשחזר את הארכיטקטורה של נגעים השד preinvasive ללמוד ההתקדמות שלהם פנוטיפ פולשני. באופן ספציפי, פיתחנו מודלים לניתוח אינטראקציות בין טרום ממאירים בשד האפיתל גרסאות סלולריים סוגי תאים אחרים של microenvironment הגידול כי היו מעורבים שיפור או לצמצם את ההתקדמות של תאים בשד preinvasive אפיתל ל קרצינומות ductal פולשנית. סוגי תאים אחרים שנחקרו עד כה הם תאים myoepithelial, fibroblasts, מקרופאגים דם כלי הדם הלימפה ותאי האנדותל. בנוסף הדגמים מיים, אשר נועדו לשחזר את אינטראקציות הסלולר בתוך השד במהלךהתקדמות סרטן, פיתחנו מודלים דומים להתפתחות של סרטן הערמונית. כאן אנו מדגימים את ההליכים להקמת cocultures 3D יחד עם שימוש בהדמיה חי תאים ו assay proteolysis תפקודית לבצע את המעבר של cocultures של סרטן השד ductal באתרם (DCIS) תאים פיברובלסטים, פנוטיפ פולשני לאורך זמן, במקרה זה על פני עשרים ושלושה ימים בתרבות. Cocultures מיים כוללים מספר רב של שכבות. Fibroblasts המוטבעים השכבה התחתונה של סוג אני קולגן. על הממוקם שכבה של קרום במרתף המחודשת (RBM) שבו תאים DCIS הם זרע. השכבה העליונה הסופי של RBM 2% כלול מתחדש עם כל שינוי של התקשורת. כדי proteolysis התמונה שמראה את ההתקדמות כדי פנוטיפ פולשני, אנו משתמשים צבען הרווה (DQ) חלבוני ניאון מטריקס (DQ-קולגן ערבבתי עם שכבת קולגן I ו-DQ קולגן IV מעורבב עם השכבה האמצעית של RBז) ולבחון תרבויות חיים באמצעות מיקרוסקופ confocal. חלקים אופטיים נלכדים, עיבוד מחדש ב-3D עם תוכנת ויזואליזציה Volocity. במשך 23 ימים מיים cocultures, התאים מתרבים DCIS ו להתמזג לתוך מבנים גדולים פולשניים. Fibroblasts להעביר ו המוטמעים מבנים אלה פולשניים. שברי פרוטאוליטים הניאון של collagens נמצאות בקשר עם השטח של מבנים DCIS, intracellularly, והתפזרו ברחבי גם מטריקס שמסביב. תרופות פרוטאוליטים היעד, chemokine / ציטוקינים ו קינאז מסלולים או שינויים בהרכב הסלולר של cocultures יכול להפחית את הפולשנות, טוען כי מודלים מיים יכול לשמש מסכי פרה של גישות טיפוליות חדשות.

Watch this Scientific Journal Video about MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression at JoVE.com

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

פיתחנו מודלים coculture 3D הדמיה חיה תאים בזמן אמת של אינטראקציות בין תאים סרטניים בשד ותאים אחרים microenvironment שלהם המשפיעים על התפתחות פנוטיפ פולשני. מודלים אלה יכולים לשמש מסכי פרה עבור תרופות למיקוד paracrine המושרה, פרוטאוליטים chemokine / ציטוקינים ו קינאז מסלולים מעורבים הפולשנות.

מיים מודלים של הדמיה חיה של תאים 4D גידול: אינטראקציות microenvironment המשפיעים ממאירה התקדמות

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Orthotopic Xenografting של האדם בלוציפראז-Tagged ממאירה היקפיים נדן בתאי העצב גידול של In vivo בדיקה של סוכני המועמד טיפולית

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

הערכה של נדידת תאי גזע סרטני באמצעות מכשירי microfluidic מידור והדמית תא חייה

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic תלת ממדי<em&gt; במבחנה</em&gt; מידול של אינטראקציות stromal-אפיתל בייזום והתקדמות סרטן השחלות

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

חי הדמיה של תגובות סמים בmicroenvironment הגידול במודלים עכבריים של סרטן השד

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

בתדירות גבוהה אולטראסאונד הדמיה של בלוטות לימפה עכבר צוואר הרחם

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

גידול במוח / Organotypic Slice משותף תרבות מערכת לימוד microenvironment גידול וממוקד תרופות טיפולים

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

Bioluminescence-Based Tumor Quantification Method for Monitoring Tumor Progression and Treatment Effects in Mouse Lymphoma Models

פליטת אור מבוסס שיטת כימות גידול עבור התקדמות גידול ניטור שפעות טיפול מודלים לימפומה העכבר

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. ...