Name: mame models for 4d live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression
Uploaded: 2012-02-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression at JoVE.com

Bu çalışma Sağlık R01 CA131990 (BFS ve RRM) National Institutes tarafından kısmen desteklenmiştir. Canlı hücre görüntüleme Karmanos Kanser Enstitüsü, Wayne State Üniversitesi Çocuk Sağlığı ve Gelişimi Ulusal Enstitüsü Perinatoloji Araştırma Şubesi tarafından NIH Merkezi hibe P30 CA22453 tarafından kısmen desteklenen Mikroskopi, Görüntüleme ve Sitometri Kaynakları Çekirdek yapıldı Wayne State Üniversitesi.

1. DQ-yüzeyler hazırlayın <ol><li> Izin DQ-substratlar 4 ° C&#39;de 50 ul hacimde ve deposuna, deiyonize su içinde DQ-substrat 1 mg / ml stok çözeltisi hazırlamak, açma şişeleri önce oda sıcaklığına kadar ısınması için bölünmeyi liyofilize </li></ol> Bu, ~ 50-5 dakika ve ısı ° C dispersiyon kolaylaştırmak için bir ultrasonik su banyosunda DQ-substrat çalkalamak için gerekli olabilir. <ol start="2"><li> 4, bir gece boyunca buz üzerinde çözünme RBM ?...

<ol>
	<li>Sameni, M., Dosescu, J., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+of+proteolysis:+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis.">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol. Imaging. 2, 159-175 (2003).</li><li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+protease+activity+in+living+cells:+from+two+dimensions+to+four+dimensions.">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. 39, (2008).</li><li>Jedeszko, C., Victor, B. C., Podgorski, I., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+hepatocyte+growth+factor+promotes+invasion+of+human+mammary+ductal+carcinoma+in+situ.">Fibroblast hepatocyte growth factor promotes invasion of human mammary ductal carcinoma in situ.</a> Cancer Res. 69, 9148-9155 (2009).</li><li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+live-cell+imaging+demonstrates+that+beta1-integrin+promotes+type+IV+collagen+degradation+by+breast+and+prostate+cancer+cells.">Functional live-cell imaging demonstrates that beta1-integrin promotes type IV collagen degradation by breast and prostate cancer cells.</a> Mol. Imaging. 7, 199-213 (2008).</li><li>Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p21-activated+kinase+1+coordinates+aberrant+cell+survival+and+pericellular+proteolysis+in+a+three-dimensional+culture+model+for+premalignant+progression+of+human+breast+cancer.">p21-activated kinase 1 coordinates aberrant cell survival and pericellular proteolysis in a three-dimensional culture model for premalignant progression of human breast cancer.</a> Neoplasia. 10, 314-328 (2008).</li><li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+quantifying+the+dynamics+of+tumor+associated+proteolysis.">Imaging and quantifying the dynamics of tumor associated proteolysis.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 299-309 (2009).</li><li>Cavallo-Medved, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+demonstrates+that+proteases+in+caveolae+of+endothelial+cells+degrade+extracellular+matrix.">Live-cell imaging demonstrates that proteases in caveolae of endothelial cells degrade extracellular matrix.</a> Exp. Cell. Res. 315, 1234-1246 (2009).</li><li>Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microvasculature+and+microenvironment:+novel+insights+through+intravital+imaging+in+pre-clinical+models.">Tumor microvasculature and microenvironment: novel insights through intravital imaging in pre-clinical models.</a> Microcirculation. 17, 206-225 (2010).</li></ol>

Gösterildiği gibi, MAME cocultures bir göğüs tümörü ve mikro oluşturan çeşitli hücresel bileşenlerin arasındaki etkileşimlerin gerçek zamanlı canlı-hücre görüntüleme için kullanılabilir. Laboratuvarımızda devam eden çalışmalarda, biz proteolitik DCIS gelen invaziv duktal karsinom geçiş ile ilişkili yollar, yanı sıra kemokin / sitokin / büyüme faktörü yol olarak bu geçiş dahil proteolitik yolları ve diğer yollar arasındaki etkileşimleri belirlemek için MAME cocultures kullanm?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Sulandırılmış bazal membran (Cultrex) </td><td> Trevigen </td><td> 3445-005-01 </td><td> Matrigel (BD Biosciences) ile karşılaştırılabilir </td></tr><tr><td> Kolajen I </td><td> Uyum Laboratuvarları </td><td> 5005-B </td><td></td></tr><tr><td> DQ-substratlar (Kollajen I, IV) </td><td> Invitrogen </td><td> DQ-col I-D12060 DQ-col IV D12052 </td><td></td></tr><tr><td> 22-mm plastik lamelleri </td><td> Fisher Scientific Co </td><td> 12-547 </td><td> 10 dakika ve kullanılmadan önce hava-kuru% 70 etanol içinde bırakın, yarım kesilmiş. </td></tr><tr><td> Hücre kültürü ortamı </td><td> Lonza </td><td> MEBM-PRF CC-3153 MEGM CC-4136 </td><td> Red-free Fenol </td></tr><tr><td> μ-Bulaşık ibiTreat </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td> Volocity yazılım </td><td> Perkin-Elmer </td><td> Sürüm 5.5 </td><td> Görüntüleme yazılımının diğer markalar 3D rekonstrüksiyon ve film oluşturmak için kullanılabilir. </td></tr></tbody></table>

mame models for 4d live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression

Hücre etkileşimleri: Biz vadeli MAME (m ammary bir rchitecture ve m icroenvironment e ngineering) ve hücre gerçek zamanlı olarak canlı hücre görüntüleme için onları kullandığı, 3D kokültürü modeli geliştirdik. Genel hedefimiz invaziv fenotip onların ilerlemesini incelemek için preinvaziv meme lezyonlarının mimarisi recapitulate modelleri geliştirmektir. Özellikle, invaziv duktal karsinom için preinvaziv meme epitel hücrelerinin gelişimini arttırmak veya azaltmak suçlanmıştır tümör mikroçevresinin pre-malign meme epitel hücre çeşitleri ve diğer hücre türleri arasındaki etkileşimleri analiz modelleri geliştirilmiştir. Diğer hücre tipleri tarihe okudu myoepitelyal hücreler, fibroblastlar, makrofajlar ve kan ve lenfatik mikrovasküler endotel hücreleri vardır. Boyunca meme içinde hücresel etkileşimler recapitulate üzere tasarlanmıştır MAME modelleri, ek olarakkanser gelişimi, biz prostat kanserlerinin ilerlemesini için karşılaştırılabilir modeli geliştirdik. İşte biz, canlı hücre görüntüleme ve in situ meme duktal karsinom (DCIS) zamanla invaziv bir fenotipi hücreleri ve fibroblastların cocultures geçişini takip fonksiyonel bir proteolizin testinin kullanımı ile birlikte 3D cocultures kurma prosedürleri göstermek kültür yirmi üç gün boyunca bu durumda. MAME cocultures birden fazla katmandan oluşmaktadır. Fibroblastlar tip I kollajen alt katman gömülür. Bu on DCIS hücreleri tohumlanmış edildiği rekonstitüe bazal membran (RBM) bir tabaka yerleştirilir. % 2 RBM son bir üst tabakası dahil ve medya her değişikliği ile doldurulmaktadır. Invaziv bir fenotipi progresyonu ile ilişkili resmi proteoliz için, (DQ) boya-su verilmiş floresan matriks proteinleri (DQ-kollajen I rB orta tabaka ile karışık kollajen I ve DQ-kollajen IV tabakası ile karıştırılarak kullanılmasınıM) ve konfokal mikroskopi kullanılarak canlı kültürleri gözlemlemek. Optik bölümleri, yakalanan işlenmiş ve Volocity görselleştirme yazılımları ile 3D olarak yeniden inşa edilir. MAME cocultures 23 gün boyunca, DCIS hücreler çoğalır ve büyük istilacı yapıları birleşme. Fibroblastlar göç ve bu istilacı yapıları içine dahil olur. Kollajen of Fluorescent proteolitik fragmanları DCIS yapıların yüzeyi ile ilişki bulunur, intraselüler, ve aynı zamanda çevredeki matrisi içinde dağılmıştır. Hedef proteolitik, kemokin / sitokin ve kinaz yollar ya cocultures hücresel bileşiminde modifikasyonlar MAME modelleri yeni terapötik yaklaşımlar için klinik öncesi ekranlarını olarak kullanılabilir düşündüren, invaziv azaltabilir ilaçlar.

Watch this Scientific Journal Video about MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression at JoVE.com

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

Biz onların mikroçevresindeki meme tümör hücreleri ve diğer hücreler arasındaki etkileşimleri gerçek zamanlı olarak canlı hücre görüntüleme için 3D kokültürü modeli geliştirdik bir invaziv fenotip darbe ilerlemesi. Bu modeller invaziv karıştığı parakrin kaynaklı proteolitik, kemokin / sitokin ve kinaz yolları hedefleyen ilaçlar için klinik öncesi ekranlar olarak hizmet verebilir.

Tümör 4D Canlı hücre Görüntüleme için MAME Modeller: Mikroçevre etkileşimler olduğunu Etki Malign İlerlemesi

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

İnsan Takip edilen-Lusiferaz Malign Periferik Sinir Kılıf Tümör Hücreleri Ortotopik Xenografting In vivo</emAday Terapötik Ajanlar> Test

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

Bölümlere Mikroakışkan Cihazlar ve Canlı Hücre Görüntüleme kullanma Kanser Kök Hücre Göç Değerlendirilmesi

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mezotelyal Gümrükleme Assay o Yumurtalık Kanseri Metastaz Erken Adımlar modeller

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

Fare Servikal lenf nodu Yüksek frekanslı Ultrasonik Görüntüleme

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

Bioluminescence-Based Tumor Quantification Method for Monitoring Tumor Progression and Treatment Effects in Mouse Lymphoma Models

Fare Lenfoma Modellerinde İzleme Tümör ilerleme ve Tedavi Etkileri Biyoparlaklık Tabanlı Tümör Niceleme Yöntemi

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. ...