Name: dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord
Uploaded: 2011-12-13T12:00:00
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著者は、有益なコメントを博士アリステアGarratt（マックスデルブリュックセンター、ベルリンの）感謝します。この作品は、ドイツの研究評議会（DFG）の共同研究センター（SFB665）によってサポートされていました。

1。解剖の手順 注 ：マウスの実験的使用は、実験動物の管理と使用のための公式に承認されたガイドラインに従ってください。 <ol><li>準備する前に、あなたの解剖顕微鏡を設定し、大型と小型のはさみ、大歯鉗子、湾曲鉗子と鉗子（内側研磨のヒントを持っているうちの2つを）解剖デュモン5号の4組を含む解剖に必要な手術器具をレイアウト（詳細については、...

<ol>
	<li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dil+and+diO:+versatile+fluorescent+dyes+for+neuronal+labelling+and+pathway+tracing.">Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends. Neurosci. 12 (9), 333-333 (1989).</li><li>Acebes, A., Ferrus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+features+of+axon+collaterals+and+dendrites.">Cellular and molecular features of axon collaterals and dendrites.</a> Trends. Neurosci. 23 (11), 557-557 (2000).</li><li>Ozaki, S., Snider, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+trajectories+of+sensory+axons+toward+laminar+targets+in+the+developing+mouse+spinal+cord.">Initial trajectories of sensory axons toward laminar targets in the developing mouse spinal cord.</a> J. Comp. Neurol. 380 (2), 215-215 (1997).</li><li>Schmidt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptor+guanylyl+cyclase+Npr2+is+essential+for+sensory+axon+bifurcation+within+the+spinal+cord.">The receptor guanylyl cyclase Npr2 is essential for sensory axon bifurcation within the spinal cord.</a> J. Cell Biol. 179 (2), 331-331 (2007).</li><li>Gibson, D. A., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+axon+branching+in+the+vertebrate+nervous+system.">Developmental regulation of axon branching in the vertebrate nervous system.</a> Development. 138 (2), 183-183 (2011).</li><li>O'Leary, D. D., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+axons+branch+to+multiple+subcortical+targets+by+interstitial+axon+budding:+implications+for+target+recognition+and+&amp;quot;waiting+periods&amp;quot;.">Cortical axons branch to multiple subcortical targets by interstitial axon budding: implications for target recognition and &amp;quot;waiting periods&amp;quot;.</a> Neuron. 1 (10), 901-901 (1988).</li><li>Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS. Biol. 3 (8), e272-e272 (2005).</li><li>Gan, W. 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A. 106 (39), 16847-16847 (2009).</li><li>Zhao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulate+axon+branching+by+the+cyclic+GMP+pathway+via+inhibition+of+glycogen+synthase+kinase+3+in+dorsal+root+ganglion+sensory+neurons.">Regulate axon branching by the cyclic GMP pathway via inhibition of glycogen synthase kinase 3 in dorsal root ganglion sensory neurons.</a> Journal of Neuroscience. 29 (5), 1350-1350 (2009).</li><li>Zhao, Z., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+axonal+development+by+natriuretic+peptide+hormones.">Regulation of axonal development by natriuretic peptide hormones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (42), 18016-18016 (2009).</li><li>Schmidt, H., Rathjen, F. 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DIIラベリングのための固定組織の使用と組み合わせての準備の容易さと一緒に軸索枝の形成の両方のタイプで構成されるステレオタイプ化された投影パターンは分岐軸索の勉強に有利なモデルをDRGの添付を持つ胚脊髄になります。コー​​ティングされたガラスの針を使用してDIIの微量のアプリケーションが可能に - DRGニューロンの小集団の可視化と、それによって個々の軸索とその分岐パ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（省略可能） </td></tr><tr><td>実体顕微鏡STEMI DRC </td><td>ツァイス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝溶液（PBS） </td><td> Biochrom AG </td><td> L182 - 50 </td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>メルク</td><td> 8.18715.1000 </td><td></td></tr><tr><td>標準的な外科はさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14001〜13 </td><td></td></tr><tr><td>歯標準鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11021〜14 </td><td></td></tr><tr><td>極細アイリスのはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14088〜10 </td><td></td></tr><tr><td>湾曲鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11003〜13 </td><td></td></tr><tr><td>デュモン5号ファインチップの鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11254〜20 </td><td></td></tr><tr><td>デュモン5号鏡面仕上げ鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252〜23 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas -テュービンゲンバネはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 15008〜08 </td><td></td></tr><tr><td>ろ紙</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> FB59041 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 </td><td>世界のPrecissionインスツルメンツ</td><td> SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> 100 mmのペトリ皿</td><td> Greinerの</td><td> 663102 </td><td></td></tr><tr><td> 12 mlのポリプロピレンチューブ</td><td>カールロート社</td><td> ECO3.1 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> 12ウェル培養プレート</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 35から3043 </td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>メルク</td><td> 1.00983.2500 </td><td></td></tr><tr><td>ブラウン/燃えるようなマイクロピペットプラーP - 97 </td><td>サターインストゥルメント（株） </td><td></td><td></td></tr><tr><td>ホウケイ酸ガラス毛細管</td><td>ハーバード装置</td><td> 30から0066 </td><td></td></tr><tr><td> DII（1,1&#39; -ジオクタデシル- 3、3,3&#39;、3&#39; -テトラメチル-過塩素酸塩をindocarbocyanine） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 468495 </td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡はSuperFrost Plusをスライド</td><td>カールロート社</td><td> H867.1 </td><td></td></tr><tr><td>ガラスカバースリップ</td><td>カールロート社</td><td> 1870.2 </td><td></td&gt; </tr></tbody></table>

dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord

ここでは、親油性トレーサー1,1&#39; -ジオクタデシル- 3、3,3&#39;、過塩素酸塩（DII）1 3&#39; - tetramethylindocarbocyanineを使用して拡散染色により胚脊髄にDRGニューロンの小グループの軌跡をラベル付けする手法を提案。遺伝子が変異されたマウス系統のものと野生型の軸索経路の比較では、神経系の配線に不可欠な機構である軸索分岐の制御の候補タンパク質の機能的役割をテストできます。軸索分岐は、それによって情報の並列処理のための物理的な基礎を提供する、複数のターゲットに接続する個々のニューロンが可能になります。軸索成長の中間ターゲット領域での影響は、終末分枝と区別されることがあります。また、軸索枝形成の異なるモードが成長円錐の活動（分割または遅延ブラジャーからかどうかの分岐の結果に応じて分類することができるnching）またはプロセスにおける軸索のシャフトから担保の出芽からは、間質分岐2（ 図1）と呼ばれる。 DRGからのニューロンの中央の突起軸索分岐の両方のタイプを研究するために有用な実験系を提供する：それらの求心性軸索は10〜13胚日の間に脊髄の後根のエントリーゾーン（DREZ）に到達（E10 - E13）、それらT -またはY字型の分岐部の紋切り型のパターンが表示されます。得られた2つの娘の軸索は、脊髄の背側縁に、それぞれ、吻側または尾側方向に進むと待機期間の担保は、特定の中継ニューロンに灰白質（間質分岐）とプロジェクトを貫通して、これらの幹の軸索から発芽した後にのみ彼らはさらに樹枝状になる脊髄のラミナ（端子分岐）3。 DIIの追跡機能は、PRにあるように見えた脊髄の後根のエントリーゾーンで成長円錐を明らかにしたその分岐を示唆分割のocessが成長円錐自体4（ 図2）の分割によって引き起こされる、しかし、他のオプションはよく5として議論されている。 このビデオでは、接続されているDRGを残しE12.5マウスの脊髄を分析する方法を第一を示しています。 DIIの試料微量の以下の固定は、キャピラリーチューブから引っ張ってガラスの針を使用して、DRGに適用されます。インキュベーションステップの後、標識された脊髄は、蛍光顕微鏡を使用して、個々の軸索を分析するために反転のオープンブックの準備としてマウントされます。

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DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

齧歯類の脊髄への感覚求心性のステレオタイプの予測は、単一の軸索のトレースを通して軸索分岐を研究するために簡単にアクセス可能な実験系を提供する。

マウス胚の脊髄の全載標本での分岐軸索勉強するDRGニューロンのDII -標識

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

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