Name: dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord
Uploaded: 2011-12-13T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алистер Garratt (Дельбрюк центр, Берлин) за полезные комментарии. Эта работа была поддержана совместным исследовательским центром (SFB665) из Немецкого научно-исследовательского совета (DFG).

1. Препарирование процедуры Примечание: Экспериментальное использование мыши должны следовать официально утверждены методические рекомендации по уходу и использованию лабораторных животных. <ol><li> Перед подготовкой, настроить рассекает микроскопа и выложить хи?...

<ol>
	<li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dil+and+diO:+versatile+fluorescent+dyes+for+neuronal+labelling+and+pathway+tracing.">Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends. Neurosci. 12 (9), 333-333 (1989).</li><li>Acebes, A., Ferrus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+features+of+axon+collaterals+and+dendrites.">Cellular and molecular features of axon collaterals and dendrites.</a> Trends. Neurosci. 23 (11), 557-557 (2000).</li><li>Ozaki, S., Snider, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+trajectories+of+sensory+axons+toward+laminar+targets+in+the+developing+mouse+spinal+cord.">Initial trajectories of sensory axons toward laminar targets in the developing mouse spinal cord.</a> J. Comp. Neurol. 380 (2), 215-215 (1997).</li><li>Schmidt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptor+guanylyl+cyclase+Npr2+is+essential+for+sensory+axon+bifurcation+within+the+spinal+cord.">The receptor guanylyl cyclase Npr2 is essential for sensory axon bifurcation within the spinal cord.</a> J. Cell Biol. 179 (2), 331-331 (2007).</li><li>Gibson, D. A., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+axon+branching+in+the+vertebrate+nervous+system.">Developmental regulation of axon branching in the vertebrate nervous system.</a> Development. 138 (2), 183-183 (2011).</li><li>O'Leary, D. D., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+axons+branch+to+multiple+subcortical+targets+by+interstitial+axon+budding:+implications+for+target+recognition+and+&amp;quot;waiting+periods&amp;quot;.">Cortical axons branch to multiple subcortical targets by interstitial axon budding: implications for target recognition and &amp;quot;waiting periods&amp;quot;.</a> Neuron. 1 (10), 901-901 (1988).</li><li>Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS. Biol. 3 (8), e272-e272 (2005).</li><li>Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+imaging+and+ultrastructural+analysis+of+individual+axon+terminals+labeled+by+iontophoretic+application+of+lipophilic+dye.">Vital imaging and ultrastructural analysis of individual axon terminals labeled by iontophoretic application of lipophilic dye.</a> J. Neurosci. Methods. 93 (1), 13-13 (1999).</li><li>Schmidt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-type+natriuretic+peptide+(CNP)+is+a+bifurcation+factor+for+sensory+neurons.">C-type natriuretic peptide (CNP) is a bifurcation factor for sensory neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (39), 16847-16847 (2009).</li><li>Zhao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulate+axon+branching+by+the+cyclic+GMP+pathway+via+inhibition+of+glycogen+synthase+kinase+3+in+dorsal+root+ganglion+sensory+neurons.">Regulate axon branching by the cyclic GMP pathway via inhibition of glycogen synthase kinase 3 in dorsal root ganglion sensory neurons.</a> Journal of Neuroscience. 29 (5), 1350-1350 (2009).</li><li>Zhao, Z., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+axonal+development+by+natriuretic+peptide+hormones.">Regulation of axonal development by natriuretic peptide hormones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (42), 18016-18016 (2009).</li><li>Schmidt, H., Rathjen, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signalling+mechanisms+regulating+axonal+branching+in+vivo.">Signalling mechanisms regulating axonal branching in vivo.</a> Bioessays. , (2010).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Livet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system.">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450 (7166), 56-56 (2007).</li></ol>

Стереотипные проекции включающий оба типа аксонального формирование филиала вместе с простотой подготовки в сочетании с использованием основных тканей для DII маркировки делает эмбрионального спинного мозга с прикрепленными DRG благоприятной моделью для изучения аксонального ветвле...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии (необязательно) </td></tr><tr><td> Стереомикроскоп Stemi ДРК </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Фосфат-буферный раствор (PBS) </td><td> Biochrom AG </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> Параформальдегид </td><td> Merck </td><td> 8.18715.1000 </td><td></td></tr><tr><td> Стандартные хирургические ножницы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 14001-13 </td><td></td></tr><tr><td> Зубчатые стандартные щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11021-14 </td><td></td></tr><tr><td> Дополнительный штраф ножницы диафрагмой </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 14088-10 </td><td></td></tr><tr><td> Изогнутый зажим </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11003-13 </td><td></td></tr><tr><td> Дюмон № 5 тонкой советы щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> Дюмон № 5 зеркального блеска щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11252-23 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas-Тюбинген весной ножницы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 15008-08 </td><td></td></tr><tr><td> Фильтровальная бумага </td><td> Fisher Scientific </td><td> FB59041 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 </td><td> Инструменты Всемирной Precission </td><td> SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> 100-мм чашки Петри </td><td> Greiner </td><td> 663102 </td><td></td></tr><tr><td> 12-мл полипропиленовые трубки </td><td> Карл Рот GmbH </td><td> ECO3.1 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> 12-а культуры пластины </td><td> Becton Dickinson </td><td> 35-3043 </td><td></td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Merck </td><td> 1.00983.2500 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming / коричневый микропипетки съемник Р-97 </td><td> Саттер машиностроительный завод </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Боросиликатного стекла капилляров </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> 30-0066 </td><td></td></tr><tr><td> DII (1,1 &#39;-Dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-тетраметил - indocarbocyanine перхлорат) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 468495 </td><td></td></tr><tr><td> Микроскоп слайды SuperFrost Plus </td><td> Карл Рот GmbH </td><td> H867.1 </td><td></td></tr><tr><td> Скользит Стеклянная крышка </td><td> Карл Рот GmbH </td><td> 1870,2 </td><td></td&gt; </tr></tbody></table>

dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord

Здесь мы представляем технику для обозначения траектории небольших групп нейронов DRG в эмбриональном спинного мозга диффузионного окрашивания использованием липофильных трассирующими 1,1 &#39;-dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-tetramethylindocarbocyanine перхлорат (DII) 1 . Сравнение аксонального пути дикого типа с теми, мыши строки, в которых гены мутировали позволяет тестирование на функциональную роль кандидата белков в управление аксонального ветвления которых является существенным механизмом проводки нервной системы. Аксонального ветвлений позволяет отдельного нейрона, чтобы соединиться с несколькими целями, обеспечивая тем самым физическую основу для параллельной обработки информации. Ветви на промежуточных целевых регионах в рост аксонов можно отличить от терминала разветвление. Кроме того, различные режимы аксонального формирование отделения могут быть классифицированы в зависимости от того, ветвление результаты деятельности роста конуса (расщепления или задержки бюстгальтерnching) или от начинающего коллатералей от аксона вала в процессе, называемом интерстициальный ветвления 2 (рис. 1). Центральной проекции нейронов DRG предлагаем полезную экспериментальная система для изучения обоих типов аксонального разветвления: когда их афферентные аксоны достигают спинного зоне корневой записи (DREZ) спинного мозга между эмбриональными дней от 10 до 13 (E10 - E13), они дисплей стереотипные картины Т-или У-образный бифуркации. Два полученных аксонов дочь действовать на ростральной или хвостового направлений, соответственно, на дорсолатеральной краю шнуром, и только после ожидания залогов период прорастают из этих стволовых аксонов проникнуть серого вещества (интерстициальный ветвления) и проект по релейной нейронов в специфических Пластинки спинного мозга, где они дальше ветвиться (терминал ветвления) 3. DII обводка показали рост конусами в спинной зоне корневой записи спинного мозга, который оказался в прocess расщепления предполагая, что бифуркации вызван расщеплением рост сам конус 4 (рис. 2), однако, и другие варианты были обсуждены также 5. Это видео демонстрирует первые, как рассекают спинной мозг мышей E12.5 оставляя DRG прилагается. После фиксации образца небольшое количество DII применяются для DRG с использованием стеклянных игл вытащил из капилляров. После инкубации, помечены спинного мозга устанавливается в виде перевернутой буквы открытой книги подготовка к анализу отдельных аксонов с помощью флуоресцентной микроскопии.

Watch this Scientific Journal Video about DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

Стереотипные проекции сенсорных афферентов в спинном мозге грызунов предлагаем легко доступны экспериментальной системы для изучения аксонального ветвления через отслеживание одного аксонов.

DII-маркировки DRG нейроны по изучению аксонального Ветвление в Всего Подготовка горе мышиных эмбриональных спинного мозга

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Разбор и культуры спаечный Нейроны из эмбриональных спинного мозга

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Визуализация Эмбриональные нервной системы в целом монтажа Drosophila Эмбрионы

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Всего Подготовка горе взрослых Drosophila Брюшной нервной для инъекций Гигантские Dye Волоконно

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Лазерно-индуцированное Травма спинного мозга модель для оценки Механизмы дегенерации аксонов в режиме реального времени

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

Получение первичных смешанных глиальных культур от взрослых спинного мозга мыши ткани

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

рерио<em&gt; В Ситу</em&gt; Спинной мозг Подготовка к Электрофизиологическим записям из спинномозговых сенсорных и двигательных нейронов

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

Визуализация шаблона аксонной проекции эмбриональных моторных нейронов в<em&gt; Drosophila</em

The establishment of functional neuromuscular circuits relies on precise connections between developing motor axons and target muscles. Motor neurons ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

Ламинэктомия и имплантация окна спинного мозга в мыши

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Подготовка острого спинного фрагменты записи поклеточного патч зажим в Substantia Gelatinosa нейронов

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Внутриархивная доставка нейронных стволовых клеток крыс и мышей мозга: Применение к церебральной ишемии

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...