Name: dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord
Uploaded: 2011-12-13T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Yazarlar Dr Alistair Garratt (Max Delbrück Merkezi, Berlin) faydalı yorumları için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Alman Araştırma Kurumu (DFG) ortak araştırma merkezi (SFB665) tarafından desteklenmiştir.

1. Diseksiyon işlemi Not: farelerde deneysel laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için kurallar resmen onaylanmış takip etmelidir. <ol><li> Hazırlanmadan önce, diseksiyon mikroskobu kurmak ve forseps (iç cilalanmış ipuçları var ikisi) diseksiyon büyük ve küçük makas, büyük dişli forseps, kavisli bir forseps ve Dumont No.5 dört setleri de dahil olmak üzere diseksiyon için gerekli cerrahi aletler yatıyordu ( detaylar) özel reaktifler ve ekipman...

<ol>
	<li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dil+and+diO:+versatile+fluorescent+dyes+for+neuronal+labelling+and+pathway+tracing.">Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends. Neurosci. 12 (9), 333-333 (1989).</li><li>Acebes, A., Ferrus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+features+of+axon+collaterals+and+dendrites.">Cellular and molecular features of axon collaterals and dendrites.</a> Trends. Neurosci. 23 (11), 557-557 (2000).</li><li>Ozaki, S., Snider, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+trajectories+of+sensory+axons+toward+laminar+targets+in+the+developing+mouse+spinal+cord.">Initial trajectories of sensory axons toward laminar targets in the developing mouse spinal cord.</a> J. Comp. Neurol. 380 (2), 215-215 (1997).</li><li>Schmidt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptor+guanylyl+cyclase+Npr2+is+essential+for+sensory+axon+bifurcation+within+the+spinal+cord.">The receptor guanylyl cyclase Npr2 is essential for sensory axon bifurcation within the spinal cord.</a> J. Cell Biol. 179 (2), 331-331 (2007).</li><li>Gibson, D. A., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+axon+branching+in+the+vertebrate+nervous+system.">Developmental regulation of axon branching in the vertebrate nervous system.</a> Development. 138 (2), 183-183 (2011).</li><li>O'Leary, D. D., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+axons+branch+to+multiple+subcortical+targets+by+interstitial+axon+budding:+implications+for+target+recognition+and+&amp;quot;waiting+periods&amp;quot;.">Cortical axons branch to multiple subcortical targets by interstitial axon budding: implications for target recognition and &amp;quot;waiting periods&amp;quot;.</a> Neuron. 1 (10), 901-901 (1988).</li><li>Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS. Biol. 3 (8), e272-e272 (2005).</li><li>Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+imaging+and+ultrastructural+analysis+of+individual+axon+terminals+labeled+by+iontophoretic+application+of+lipophilic+dye.">Vital imaging and ultrastructural analysis of individual axon terminals labeled by iontophoretic application of lipophilic dye.</a> J. Neurosci. Methods. 93 (1), 13-13 (1999).</li><li>Schmidt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-type+natriuretic+peptide+(CNP)+is+a+bifurcation+factor+for+sensory+neurons.">C-type natriuretic peptide (CNP) is a bifurcation factor for sensory neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (39), 16847-16847 (2009).</li><li>Zhao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulate+axon+branching+by+the+cyclic+GMP+pathway+via+inhibition+of+glycogen+synthase+kinase+3+in+dorsal+root+ganglion+sensory+neurons.">Regulate axon branching by the cyclic GMP pathway via inhibition of glycogen synthase kinase 3 in dorsal root ganglion sensory neurons.</a> Journal of Neuroscience. 29 (5), 1350-1350 (2009).</li><li>Zhao, Z., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+axonal+development+by+natriuretic+peptide+hormones.">Regulation of axonal development by natriuretic peptide hormones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (42), 18016-18016 (2009).</li><li>Schmidt, H., Rathjen, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signalling+mechanisms+regulating+axonal+branching+in+vivo.">Signalling mechanisms regulating axonal branching in vivo.</a> Bioessays. , (2010).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Livet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system.">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450 (7166), 56-56 (2007).</li></ol>

Kalıplaşmış projeksiyon modelleri DII etiketlenmesine yönelik sabit doku kullanımı ile birlikte hazırlık kolaylığı ile birlikte iki tip aksonal şube oluşumu oluşan aksonal dallanma çalışma için uygun bir model DRG bağlı embriyonik omurilik yapar. Kaplı cam iğneler kullanarak DII dakika miktarda uygulama sağlar DRG nöronlar küçük gruplar görselleştirme ve böylece bireysel akson ve dallanma desen analizi - DRG toplu etiketleme aksine. Etiketli nöronlar 8 sayı daha da azalır lip...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Stereomikroskopta STEMI DRC </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tampon çözeltisi (PBS) </td><td> Biochrom AG </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Merck </td><td> 8.18715.1000 </td><td></td></tr><tr><td> Standart cerrahi makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14001-13 </td><td></td></tr><tr><td> Dişli standart forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11021-14 </td><td></td></tr><tr><td> Ekstra ince iris makası </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14088-10 </td><td></td></tr><tr><td> Eğimli forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11003-13 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont No.5 ince ipuçları forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont No.5 ayna bitirmek forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11252-23 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas-Tübingen yaylı makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15008-08 </td><td></td></tr><tr><td> Filtre kağıdı </td><td> Fisher Scientific </td><td> FB59041 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> 100-mm Petri kapları </td><td> Greiner </td><td> 663102 </td><td></td></tr><tr><td> 12 ml&#39;lik polipropilen tüp </td><td> Carl Roth GmbH </td><td> ECO3.1 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> 12 kuyu kültür plaka </td><td> Becton Dickinson </td><td> 35-3043 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Merck </td><td> 1.00983.2500 </td><td></td></tr><tr><td> / Kahverengi mikropipet çektirmesi P-97 Flaming </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Borosilikat cam kapilerleri </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 30-0066 </td><td></td></tr><tr><td> DII (1,1 &#39;-Dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-tetramethyl - perklorat indocarbocyanine) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 468495 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop SuperFrost Plus, slaytlar </td><td> Carl Roth GmbH </td><td> H867.1 </td><td></td></tr><tr><td> Cam kapak fişleri </td><td> Carl Roth GmbH </td><td> 1870,2 </td><td></td&gt; </tr></tbody></table>

dii-labeling of drg neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord

Burada lipofilik tracer 1,1 &#39;-dioctadecyl-3, 3,3&#39;, perklorat (DII) 1 3&#39;-tetramethylindocarbocyanine kullanarak uzadıya boyama embriyonik omurilik içine DRG nöronlar küçük gruplar yörüngeleri etiketlemek için bir teknik . Vahşi tip genleri mutasyona uğramış olan fare hatları ile aksonal yollarının karşılaştırma sinir sistemi kablolama önemli bir mekanizmadır aksonal dallanma kontrolü aday proteinlerin fonksiyonel bir rol için test sağlar. Aksonal dallanma ve böylece paralel bilgi işleme için fiziksel bir temel sağlayarak, çoklu hedefleri ile bağlanmak için tek bir nöron sağlar. Aksonal büyüme ara hedef bölgelerdeki etkileri terminali arborization ayırt edilebilir. Ayrıca, farklı mod aksonal şube oluşumu büyüme konisi (bölme ya da geç sutyen olmadığını dallanma sonuçları bağlı olarak sınıflandırılır olabilirnching) ya da bir süreç akson mili teminatların tomurcuklanan interstisyel dallanma 2 (Şekil 1) denir . Merkezi projeksiyonları DRG nöronların aksonal dallanma iki türlü incelemek için yararlı bir deneysel sistem sunuyoruz: afferent aksonlar 10 13 (E10 - E13) embriyonik gün arasında omurilik dorsal kök giriş bölgesi (DREZ) ulaştığınızda onlar basmakalıp desen T veya Y-şekilli çatallanma görüntüler. Daha sonra çıkan iki kızı aksonlar kablosunun dorsolateral marjı sırasıyla, rostral veya kaudal yönde ilerler ve bir bekleme süresi teminatlar gri madde (interstisyel dallanma) ve proje özel röle nöronlar nüfuz sonra bu kök aksonlar filiz spinal kord lamina daha da (terminal dallanma) 3 arborize. DII iz pr olduğu ortaya çıktı omurilik dorsal kök giriş bölgesi büyüme konileri ortaya koymuşturbu çatallanma düşündüren bölme ocess büyüme konisi kendisini 4 (Şekil 2) bölünmesi sebep olur, ancak, diğer seçenekler de 5 olarak tartışılmıştır var. Bu video DRG takılı bırakarak E12.5 farelerin omurilik nasıl incelemek için ilk olarak göstermektedir. Kılcal tüpler çıkarılmış cam iğneler kullanılarak DRG DII numune küçük miktarlarda sonra fiksasyon uygulanır. Bir inkübasyon adımdan sonra, etiketli omurilik floresan mikroskobu kullanarak bireysel aksonlar analiz etmek için ters bir açık-kitap hazırlık olarak monte edilir.

Watch this Scientific Journal Video about DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

Kemirgen omuriliğe duyusal aferentlerde kalıplaşmış projeksiyonları tek akson izleme yoluyla aksonal dallanma incelemek için kolay ulaşılabilir bir deneysel sistem sunuyoruz.

Fare Embriyonik Omurilik Tüm Dağı Hazırlık aksonal dallanma Eğitim DRG Nöronlar DII-Etiketleme

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Yetişkin Tüm Dağı Hazırlık Drosophila Dev Fiber Boya Enjeksiyon Ventral Sinir Kablosu

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

Yetişkin Fare Omurilik Doku İlköğretim Karışık glial Kültürler hazırlanması

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

Embriyonik Motor Nöronlarının Aksonal Projeksiyon Paterninin Görselleştirilmesi<em&gt; Drosophila</em

The establishment of functional neuromuscular circuits relies on precise connections between developing motor axons and target muscles. Motor neurons ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

Farede Laminektomi ve Omurilik Penceresi İmplantasyonu

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Akut omurilik dilimleri hazırlanması gözlemliyorum Gelatinosa nöronlar bütün hücreli yama-kelepçe kayıt için

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...