Name: generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes
Uploaded: 2012-02-22T13:00:00
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著者らは、E1E4抗体の種類のギフト用サリー·ロバーツ（バーミンガム大学、バーミンガム、英国）に感謝したいと思います。この作品は、国立がん研究所（4R00CA137160-03）からの助成金によってサポートされていました。

1。カドヘリンの文化のための準備<ol><li>金属製のいかだグリッドは、多くの第一分化過程を妨げる可能性のある残留物を除去するためにクロム硫酸で処理することができます。一時間のために硫酸を含有するガラスビーカーに浸した金属グリッドは、その後継続的に水道水で一晩洗浄した。すすぎ一晩後、いかだグリッドは、蒸留水で3-5時間のためにリンスする必要があります。 </li><li>ラ...

<ol>
	<li>Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+raft+cultures+for+investigations+of+virus+growth,+pathogenesis+and+efficacy+of+antiviral+agents.">Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents.</a> Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).</li><li>Asselineau, D., Prunieras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+'simplified'+skin:+control+of+fabrication.">Reconstruction of 'simplified' skin: control of fabrication.</a> The British Journal of Dermatology. 111, 219-222 (1984).</li><li>Bodily, J., Alam, S., Chen, H., Meyers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Organotypic epithelial raft cultures and the study of the natural history of human papillomavirus. , (2006).</li><li>Cheng, S., Schmidt-Grimminger, D. C., Murant, T., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation-dependent+up-regulation+of+the+human+papillomavirus+E7+gene+reactivates+cellular+DNA+replication+in+suprabasal+differentiated+keratinocytes.">Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7 gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiated keratinocytes.</a> Genes &#38; Development. 9, 2335-2349 (1995).</li><li>Dollard, S. C., Wilson, J. L., Demeter, L. M., Bonnez, W. R., Reichman, C., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+human+papillomavirus+and+modulation+of+the+infectious+program+in+epithelial+raft+cultures.+OFF.">Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. OFF.</a> Genes &#38; Development. 6, 1131-1142 (1992).</li><li>Frattini, M. G., Lim, H. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+synthesis+of+oncogenic+human+papillomaviruses+requires+episomal+genomes+for+differentiation-dependent+late+expression.">In vitro synthesis of oncogenic human papillomaviruses requires episomal genomes for differentiation-dependent late expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 3062-3067 (1996).</li><li>Kopan, R., Traska, G., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoids+as+important+regulators+of+terminal+differentiation:+examining+keratin+expression+in+individual+epidermal+cells+at+various+stages+of+keratinization.">Retinoids as important regulators of terminal differentiation: examining keratin expression in individual epidermal cells at various stages of keratinization.</a> The Journal of Cell Biology. 105, 427-440 (1997).</li><li>Longworth, M. S., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+human+papillomaviruses+in+differentiating+epithelia.">Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia.</a> Microbiology and Molecular Biology Review. 68, 362-372 (2004).</li><li>Meyers, C., Frattini, M. G., Hudson, J. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+of+human+papillomavirus+from+a+continuous+cell+line+upon+epithelial+differentiation.">Biosynthesis of human papillomavirus from a continuous cell line upon epithelial differentiation.</a> Science. 257, 971-973 (1992).</li><li>Wilson, R., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Differentiation of HPV-Containing Cells Using Organotypic Raft Culture or Methylcellulose. , 119-119 (2006).</li><li>zur Hausen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillomavirus+infections--a+major+cause+of+human+cancers.">Papillomavirus infections--a major cause of human cancers.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1288, F55-F78 (1996).</li></ol>

ここでは一般的には上皮分化を研究するために使用できるメソッドを記述するだけでなく、容易にウイルスの病原性と同様に、潜在的な治療薬の有効性を研究するために適応させることができます。多くのウイルスは、ヘルペスウイルスと同様に、HPVの場合のように、またはウイルスのライフサイクルのある時点で、感染症のプライマリサイトのいずれかとして上皮細胞を標的とする。宿主?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>ラット尾コラーゲン1型（4-5mg/ml） </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 354236 </td></tr><tr><td> NaHC0 3なしのDMEM </td><td>インビトロジェン</td><td> 12100-061 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 </td><td>シグマ</td><td> S5761 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td>カルビオケム</td><td> 391338 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼の金属グリッド</td><td>ウィリアムズと気概（株） </td><td> CR-03063-040-100-S </td></tr><tr><td> E媒体11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td>上皮成長因子</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 354010 </td></tr></tbody></table>

generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes

器官上皮いかだの文化の発展は、in vitroの系を忠実に繰り返すという上皮分化に効率的に研究を提供しています。このシステムには多くの用途があります。例えば、ケラチノサイトの三次元カドヘリンの文化を成長させる能力は、ヒトパピローマウイルス（HPV）1の研究において重要なマイルストーンであった。 HPVのライフサイクルは、しっかりと扁平上皮の2分化にリンクされています。器官上皮いかだ培養は、ウイルス産生3,4,5を含む全体のパピローマウイルスのライフサイクルを再現ここで示された。さらに、これらのラフト文化はHPVを用いた in vivo感染の際に観察されたものと同様の異形成病変を示す。したがって、このシステムは、上皮細胞がんと同様に、一般に上皮細胞の分化に及ぼす薬物の効果を研究するために使用することができます。もともとAsselineauとPrunierasによって開発された<sアップ&gt; 6とKopan らによって変更されます。7、器官上皮いかだ培養システムは、コラーゲンに細胞の増殖を伴う一般的な、比較的容易に培養モデル、へと成長した気液界面（図1A）を維持し接続します。 10-14日の間に、細胞が層別化と差別化、分化特異的なケラチンを生成する完全な厚さの上皮を形成する。収穫ラフトと同様に標準的な分子生物学的および生化学的手法により、組織学的に調べることができます。本稿では、初代ヒトケラチノサイトからいかだ文化の生成方法を説明します。同じ手法が確立され上皮細胞株で使用でき、かつ容易に正常または病気の生検8から上皮組織での使用に適合させることができます。その複製のライフサイクルの一環として、多くのウイルスのターゲットのいずれかの皮膚または粘膜上皮。過去数年間、カドヘリンカルトを使用しての可能性ウイルス-宿主細胞の相互作用を研究する方法としてURESは、いくつかのヘルペスウイルスと同様に、アデノウイルス、パルボウイルス、およびポックスウイルス9に示されている。カドヘリンの文化は、このようにウイルスの病原性を調べるために適応し、永続的な細胞株での耕作ではありませんこれらのウイルスのための新規な抗ウイルス剤をテストする唯一の手段であることができます。

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Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

不定冠詞<em&gt; in vitroで</em模倣する&gt;メソッド<emin vivoでの&gt;</em&gt;上皮分化が記載されている。多くのウイルスは、ウイルスのライフサイクルの一環として、上皮細胞を標的とし、この方法は、ウイルスを調べる手段を提供します。ホストの相互作用より密接に発生することに似ている<emin vivoでの&gt;</em&gt;。この技術は、主ケラチノサイト、確立された細胞株と同様に、正常なまたは病気の生検組織で使用することができます。

初代ヒトケラチノサイトからカドヘリン文化の生成

The development of organotypic epithelial raft cultures has provided researchers with an efficient in vitro system that faithfully recapitulates ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

プラスミドDNAの組換えインフルエンザウイルスの生成

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

成人肝細胞の混合初代培養からマクロファージを分離するためにシンプルかつ効率的な方法

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

初代ヒトナイーブおよびメモリーT細胞から誘導した調節性T細胞の生成

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

新生仔ラットの脳組織の混合グリア細胞培養物から主要なミクログリアの分離

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

末梢血からのヒトアロ抗原特異的T細胞の生成

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

不死化ソートB細胞からの組換えヒトIgGモノクローナル抗体の作製

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

調製及び器官胸腺スライス培養の応用

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

全血からのヒト単球由来樹状細胞の生成

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

マウスからの初代肝細胞培養における炎症反応の誘導

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Small RNA Transfection in Primary Human Th17 Cells by Next Generation Electroporation

次世代エレクトロポレーションによって初代ヒトTh17細胞の小さなRNAのトランスフェクション

CD4+ T cells can differentiate into several subsets of effector T helper cells depending on the surrounding cytokine milieu. Th17 cells can be generated ...