Name: generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes
Uploaded: 2012-02-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes at JoVE.com

저자 E1E4 항체의 종류 선물 샐리 로버츠 (버밍엄 대학, 버밍햄 영국) 감사드립니다. 이 작품은 국립 암 연구소 (4R00CA137160-03)에서 교부금에 의해 지원되었다.

1. Organotypic 뗏목 문화를위한 준비 <ol><li> 금속 뗏목 격자가 훨씬 먼저 분화 과정을 방해할 수있는 찌꺼기를 제거하는 삼가의 크롬을 함유하는 제품 황산으로 처리됩니다. 한 시간 만이라도 황산이 들어있는 유리 비커에 잠그다 금속 격자는 다음 지속적으로 수돗물로 씻어서 하룻밤. 린스 하룻밤 후, 뗏목 격자가 이중으로 증류수에 3-5시간 위해 씻어서되어야합니다. </li><li> 보트에 대한 지원을 ?...

<ol>
	<li>Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+raft+cultures+for+investigations+of+virus+growth,+pathogenesis+and+efficacy+of+antiviral+agents.">Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents.</a> Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).</li><li>Asselineau, D., Prunieras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+'simplified'+skin:+control+of+fabrication.">Reconstruction of 'simplified' skin: control of fabrication.</a> The British Journal of Dermatology. 111, 219-222 (1984).</li><li>Bodily, J., Alam, S., Chen, H., Meyers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Organotypic epithelial raft cultures and the study of the natural history of human papillomavirus. , (2006).</li><li>Cheng, S., Schmidt-Grimminger, D. C., Murant, T., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation-dependent+up-regulation+of+the+human+papillomavirus+E7+gene+reactivates+cellular+DNA+replication+in+suprabasal+differentiated+keratinocytes.">Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7 gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiated keratinocytes.</a> Genes &#38; Development. 9, 2335-2349 (1995).</li><li>Dollard, S. C., Wilson, J. L., Demeter, L. M., Bonnez, W. R., Reichman, C., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+human+papillomavirus+and+modulation+of+the+infectious+program+in+epithelial+raft+cultures.+OFF.">Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. OFF.</a> Genes &#38; Development. 6, 1131-1142 (1992).</li><li>Frattini, M. G., Lim, H. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+synthesis+of+oncogenic+human+papillomaviruses+requires+episomal+genomes+for+differentiation-dependent+late+expression.">In vitro synthesis of oncogenic human papillomaviruses requires episomal genomes for differentiation-dependent late expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 3062-3067 (1996).</li><li>Kopan, R., Traska, G., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoids+as+important+regulators+of+terminal+differentiation:+examining+keratin+expression+in+individual+epidermal+cells+at+various+stages+of+keratinization.">Retinoids as important regulators of terminal differentiation: examining keratin expression in individual epidermal cells at various stages of keratinization.</a> The Journal of Cell Biology. 105, 427-440 (1997).</li><li>Longworth, M. S., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+human+papillomaviruses+in+differentiating+epithelia.">Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia.</a> Microbiology and Molecular Biology Review. 68, 362-372 (2004).</li><li>Meyers, C., Frattini, M. G., Hudson, J. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+of+human+papillomavirus+from+a+continuous+cell+line+upon+epithelial+differentiation.">Biosynthesis of human papillomavirus from a continuous cell line upon epithelial differentiation.</a> Science. 257, 971-973 (1992).</li><li>Wilson, R., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Differentiation of HPV-Containing Cells Using Organotypic Raft Culture or Methylcellulose. , 119-119 (2006).</li><li>zur Hausen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillomavirus+infections--a+major+cause+of+human+cancers.">Papillomavirus infections--a major cause of human cancers.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1288, F55-F78 (1996).</li></ol>

여기서 일반적으로 상피 분화를 연구하는 데 사용할 수있는 방법을 설명하지만, 또한 쉽게 바이러스성 pathogenesis뿐만 아니라 잠재적인 치료제의 효능을 연구하기 위해 적용할 수 있습니다. 많은 바이러스 herpesviruses와 마찬가지로 HPV의 경우처럼, 또는 바이러스 생활주기의 어느 시점에서 감염의 주 사이트로서 중 상피 세포를 타겟팅합니다. 숙주 세포의 상호 작용 : organotypic 뗏목 문화를 성장하는...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 쥐의 꼬리 콜라겐 타입 1 (4-5mg/ml) </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,236 </td></tr><tr><td> NaHC0 세없이 DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100-061 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 </td><td> 시그마 </td><td> S5761 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> Calbiochem </td><td> 391,338 </td></tr><tr><td> 스테인레스 금속 격자 </td><td> 윌리엄스와 기질 (주) </td><td> CR-03063-040-100-S </td></tr><tr><td> 전자 매체 11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 표피 성장 인자 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,010 </td></tr></tbody></table>

generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes

organotypic 상피 뗏목 문화의 발달은 체외 시스템을 충실히 recapitulates 상피 분화에 효율적으로 연구자를 제공합니다. 이 시스템에 대한 많은 용도가 있습니다. 예를 들어, keratinocytes의 입체 organotypic 뗏목 문화를 성장하는 능력은 인간 papillomavirus (HPV) 1의 연구에 중요한 이정표가되었습니다. HPV의 라이프 사이클은 긴밀하게 편평 상피 2의 분화에 링크되어 있습니다. 같은 Organotypic 상피 뗏목 문화가 여기에 바이러스 생산 3,4,5 포함한 전체 papillomavirus 수명주기를 재현 보여주었다. 또한, 이러한 뗏목 문화가 HPV와 생체내 감염에 따라 관찰 비슷한 dysplastic 병변을 나타냅니다. 따라서이 시스템은 또한 상피 세포 암뿐만 아니라, 일반적으로 상피 세포 분화에 대한 약물의 효과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 원래 Asselineau 및 Prunieras 개발한 <s6&gt; 백업 및 Kopan 외 7.에 의해 수정, organotypic 상피 뗏목 문화 시스템이 콜라겐으로 세포의 성장과 관련된 일반적인, 비교적 쉬운 문화 모델로 성숙 공기 - 액체 인터페이스 (그림 1A)에서 관리하고 플러그. 10-14일의 과정 동안, 전지 계충화하다과 차별화, 차별화 특정 cytokeratins을 생산하고 전체 두께 상피 형성. 수확 보트는뿐만 아니라 표준 분자 및 생화 학적 기법으로, histologically 검사를 할 수 있습니다. 이 문서에서는 기본 인간 keratinocytes에서 뗏목 문화의 생성을위한 방법을 설명합니다. 동일한 기술은 설립 상피 세포 라인과 함께 사용할 수 있으며, 쉽게 정상 또는 질병 biopsies 8 시부터 상피 조직을 사용하기 위해 적용할 수 있습니다. 많은 바이러스가 대상 중 피부 또는 점막 상피 자신의 replicative 수명주기의 일부로. 지난 몇 년 동안의 가능성은 organotypic 뗏목 예찬에게 사용바이러스 숙주 세포 상호 작용을 연구하는 방법으로서 ures는 여러 herpesviruses뿐만 아니라 adenoviruses, parvoviruses 및 poxviruses 9 보여줘왔다. Organotypic 뗏목 문화는 따라서 바이러스 pathogenesis를 조사하기 위해 적응하고, 영구 세포 라인에 cultivable없는 이들 바이러스 소설 항바이러스 대리인을 테스트하는 유일한 수단입니다 수 있습니다.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes at JoVE.com

Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

<em&gt; 체외에서</em모방하는&gt; 방법<em&gt; 생체내에서</em&gt; 상피 분화가 설명되어 있습니다. 대부분의 바이러스는 바이러스 라이프 사이클의 일부로서 상피 세포를 타겟으로,이 방법은 바이러스를 검사하는 수단을 제공합니다 : 호스트 상호 작용을보다 밀접하게 발생하는 것이 비슷한 것을<em&gt; 생체내에서</em&gt;. 이 기술은 기본 keratinocytes 설립 세포 라인뿐만 아니라, 정상 또는 질병 생검 조직에서 사용할 수 있습니다.

기본 인적 Keratinocytes에서 Organotypic 뗏목 문화의 생성

The development of organotypic epithelial raft cultures has provided researchers with an efficient in vitro system that faithfully recapitulates ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

플라스미드 DNA의 재조합 독감 바이러스의 생성

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

연구

면역학 및 감염병학

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

성인 간세포의 혼합 차 문화에서 Macrophages을 분리하는 간단하고 효율적인 방법

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

기본 인적 나이브 및 메모리 T의 세포로부터 유도된 규제 T 세포의 생성

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

신생아 쥐 뇌 조직의 혼합 Glial 세포 배양의 기본 Microglia 격리

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

말초 혈액에서 인간 Alloantigen 특정 T 세포의 생성

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

정렬 된 불멸화 된 B 세포로부터 재조합 인간 IgG 단일 클론 항체의 생성

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

준비 및의 Organotypic 흉선 슬라이스 문화의 응용 프로그램

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

전혈로부터 인간 단핵구 유래 수지상 세포의 생성

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

마우스에서 차 간세포 문화에 염증 반응의 유도

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Small RNA Transfection in Primary Human Th17 Cells by Next Generation Electroporation

차세대 일렉트로 차 인간 Th17 세포 작은 RNA 형질

CD4+ T cells can differentiate into several subsets of effector T helper cells depending on the surrounding cytokine milieu. Th17 cells can be generated ...