Name: generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes
Uploaded: 2012-02-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes at JoVE.com

Yazarlar E1E4 antikor tür hediye için Sally Roberts (University of Birmingham, Birmingham UK) teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü (4R00CA137160-03) bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Organotipik Raft Kültürler Hazırlık <ol><li> Metal sal ızgaraları kadar ilk farklılaşma sürecine müdahale olabilecek artıkları temizlemek için kromik sülfürik asit ile tedavi edilebilir. Bir saat için sülfürik asit içeren bir cam beher içinde bırakın metal ızgaralar, daha sonra sürekli musluk suyu ile bir gece durulanmalıdır. Durulama gece sonra, radye ızgaraları çift distile su içinde 3-5 saat durulanmalıdır. </li><li> Sal destek sağlamak için, birbirinden eşit mesafede 0.5 cm ra...

<ol>
	<li>Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+raft+cultures+for+investigations+of+virus+growth,+pathogenesis+and+efficacy+of+antiviral+agents.">Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents.</a> Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).</li><li>Asselineau, D., Prunieras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+'simplified'+skin:+control+of+fabrication.">Reconstruction of 'simplified' skin: control of fabrication.</a> The British Journal of Dermatology. 111, 219-222 (1984).</li><li>Bodily, J., Alam, S., Chen, H., Meyers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Organotypic epithelial raft cultures and the study of the natural history of human papillomavirus. , (2006).</li><li>Cheng, S., Schmidt-Grimminger, D. C., Murant, T., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation-dependent+up-regulation+of+the+human+papillomavirus+E7+gene+reactivates+cellular+DNA+replication+in+suprabasal+differentiated+keratinocytes.">Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7 gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiated keratinocytes.</a> Genes &#38; Development. 9, 2335-2349 (1995).</li><li>Dollard, S. C., Wilson, J. L., Demeter, L. M., Bonnez, W. R., Reichman, C., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+human+papillomavirus+and+modulation+of+the+infectious+program+in+epithelial+raft+cultures.+OFF.">Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. OFF.</a> Genes &#38; Development. 6, 1131-1142 (1992).</li><li>Frattini, M. G., Lim, H. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+synthesis+of+oncogenic+human+papillomaviruses+requires+episomal+genomes+for+differentiation-dependent+late+expression.">In vitro synthesis of oncogenic human papillomaviruses requires episomal genomes for differentiation-dependent late expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 3062-3067 (1996).</li><li>Kopan, R., Traska, G., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoids+as+important+regulators+of+terminal+differentiation:+examining+keratin+expression+in+individual+epidermal+cells+at+various+stages+of+keratinization.">Retinoids as important regulators of terminal differentiation: examining keratin expression in individual epidermal cells at various stages of keratinization.</a> The Journal of Cell Biology. 105, 427-440 (1997).</li><li>Longworth, M. S., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+human+papillomaviruses+in+differentiating+epithelia.">Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia.</a> Microbiology and Molecular Biology Review. 68, 362-372 (2004).</li><li>Meyers, C., Frattini, M. G., Hudson, J. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+of+human+papillomavirus+from+a+continuous+cell+line+upon+epithelial+differentiation.">Biosynthesis of human papillomavirus from a continuous cell line upon epithelial differentiation.</a> Science. 257, 971-973 (1992).</li><li>Wilson, R., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Differentiation of HPV-Containing Cells Using Organotypic Raft Culture or Methylcellulose. , 119-119 (2006).</li><li>zur Hausen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillomavirus+infections--a+major+cause+of+human+cancers.">Papillomavirus infections--a major cause of human cancers.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1288, F55-F78 (1996).</li></ol>

Burada genel olarak epitelyal farklılaşma incelemek için kullanılabilecek bir yöntem tarif eder, fakat, aynı zamanda kolaylıkla viral patogenezine gibi potansiyel terapötik etkinlik incelemek için adapte edilebilir. Birçok virüs herpesvirüslerinin ile olduğu gibi, HPV durumunda olduğu gibi, ya da virüs ömrü çevrimi içinde bir noktada, enfeksiyon primer olarak ya epitel hücreleri hedef. Konak hücre etkileşimleri: organotipik sal kültürler büyüyen zaman alıcı, virüsü incelemek için son derec...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sıçan Kuyruk Kollajen tip 1 (4-5mg/ml) </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 olmadan DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100-061 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> Calbiochem </td><td> 391338 </td></tr><tr><td> Paslanmaz çelik metal ızgaralar </td><td> Williams ve hırs A.Ş. </td><td> CR-03063-040-100-S </td></tr><tr><td> E orta 11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Epidermal Büyüme Faktörü </td><td> BD Biosciences </td><td> 354010 </td></tr></tbody></table>

generation of organotypic raft cultures from primary human keratinocytes

Organotipik epitel sal kültürlerin gelişimi vitro sistemde sadakatle özetlediği epitel farklılaşmasında etkili olan araştırmacılar sağlamıştır. Bu sistem için bir çok kullanıma vardır. Örneğin, keratinositlerin üç boyutlu organotipik sal kültürleri yetiştirme yeteneğiyle, insan papilloma virüsü (HPV) 1 çalışmalarında önemli bir kilometre taşı olmuştur. HPV yaşam döngüsü sıkıca skuamöz epitel 2 farklılaşma bağlantılıdır. Olarak Organotipik epitel sal kültürler burada virüs üretimi 3,4,5 dahil olmak üzere, tüm papillomavirus yaşam döngüsü yeniden gösterdi. Ayrıca, bu sal kültürler HPV ile in vivo enfeksiyon üzerine görülenlere benzerdir displastik lezyonlar gösterirler. Böylece bu sistem, aynı zamanda epitel hücre kanserleri, yanı sıra genel olarak epitel hücre farklılaşması üzerinde ilaçların etkisini araştırmak üzere de kullanılabilir. Başlangıçta Asselineau ve Prunieras tarafından geliştirilen <s6&gt; yukarı ve Kopan ve ark. 7 tarafından değiştirilmiş, organotipik epitel sal kültürü sistemi üzerindeki kolajen hücrelerinin büyümesini içeren bir genel olarak, nispeten kolay kültürü modeli, haline geldi bir hava-sıvı arayüzü (Şekil 1A) muhafaza bağlanır. 10-14 gün boyunca, hücrelerin tabakalandırmak ve farklılığı, farklılaşma özgü Sitokeratin üreten bir tam kat epitel oluşturulması. Hasat sal yanı sıra standart moleküler ve biyokimyasal teknikler ile, histolojik olarak kontrol edilebilir. Bu yazıda, birincil insan keratinositlerinden sal kültürlerin üretimi için bir yöntem açıklanmaktadır. Aynı teknik kurulan epitel hücre çizgileri ile birlikte kullanılabilir, ve kolay bir şekilde, normal veya hastalıklı biyopsileri 8 den epiteliyal doku ile kullanım için uyarlanabilir. Birçok virüs hedef ya deri veya mukozal epitelin kendi replikatif yaşam döngüsünün bir parçası olarak. Son birkaç yılda, fizibilite organotipik sal kült kullanarakVirüs-konak hücre etkileşim okuyan bir yöntem olarak ures birkaç herpesvirüslerinin yanı sıra adenovirüsler, parvoviruses ve poxviruses 9 için gösterilmiştir. Organotipik sal kültürler böylece viral patogenez incelemek için uyarlanmış ve kalıcı hücre serilerinde tarıma olmayan bu virüs için antiviral ajanlarla test etmek için tek yöntem olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes at JoVE.com

Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

Bir<em&gt; In vitro</emTaklit etmek&gt; yöntemi<em&gt; In vivo</em&gt; Epitelyal farklılaşma tarif edilmektedir. Birçok virüs bulaşıcı yaşam döngüsünün bir parçası olarak epitel hücreleri hedef ve bu yöntem, virüsün incelenmesi için bir araç sağlar: konak etkileşimleri daha yakından oluştuğu benzediği<em&gt; In vivo</em&gt;. Bu tekniğin temel keratinositler, oluşturulan hücre çizgileri, aynı zamanda, normal veya hastalıklı biyopsi doku ile birlikte kullanılabilir.

İlköğretim İnsan Keratinositler gelen Organotipik Radye Kültürlerin Üretimi

The development of organotypic epithelial raft cultures has provided researchers with an efficient in vitro system that faithfully recapitulates ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

Plazmid DNA Rekombinant Grip Virüsü Üretimi

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

Yetişkin Karaciğer Hücrelerinin Karma İlköğretim Kültürler Makrofajlar yalıtın Basit ve Etkin Yöntem

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

İlköğretim İnsan naif ve Bellek T Hücreleri gelen İsteyerek Düzenleyici T Hücreleri Üretimi

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

Yenidoğan Rat Beyin Dokusu Karışık Glial Hücre Kültürleri Primer mikroglia İzolasyonu

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

Periferik Kan İnsan alloantijen-özgü T hücrelerinin üretilmesi

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Ölümsüzleştirilmiştir Sıralama B hücrelerinden Rekombinant İnsan IgG Monoklonal Antikorlarının Üretimi

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

Hazırlık ve Organotipik Timik Dilim Kültürler Uygulamaları

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

Tüm kan İnsan monosit türevli dendritik hücrelerin oluşumu

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

Fare Primer Hepatosit Kültürler bir inflamatuar yanıtın indüksiyon

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Small RNA Transfection in Primary Human Th17 Cells by Next Generation Electroporation

Yeni Nesil Electroporasyonun tarafından İlköğretim İnsan Th17 Hücreleri Küçük RNA Transfeksiyon

CD4+ T cells can differentiate into several subsets of effector T helper cells depending on the surrounding cytokine milieu. Th17 cells can be generated ...