Name: isolation of rat portal fibroblasts by in situ liver perfusion
Uploaded: 2012-06-29T12:00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af NIH R01 DK05823 (til RGW), F32 DK083213 (til JWW), F30 DK081265 (til ALO), og ved et tilskud fra Fred og Suzanne Biesecker Pediatric Liver Center (til RGW).

Hele proceduren udføres ved stuetemperatur, medmindre andet er angivet. 1. Fremstillinq af enzymopløsninger <ol><li> Fremstille enzymopløsninger ifølge tabel 1 og sterilt filter med et 0,22 um filter. Holde opløsningen 1 og opløsning 2 ved stuetemperatur og opløsningen 3 ved 4 ° C indtil brug. Alle opløsninger og udstyr, der kommer i kontakt med isolerede celler, skal være steril. </li></ol> 2. Fremstillinq af Perfusion udstyr <ol><li> Prime perfusionssystem med HBSS minus Ca2 + / Mg2 +, som er blevet opvarmet til 37 ° C. Bemærk: For at sikre, at perfusatet er 37 ° C, når det ankommer til leveren, er HBSS opvarmes i et vandbad indstillet til 37 ° C. Efter at det passerer gennem perfusion, går gennem en med kappe glas kondensator, som er forbundet til en vandcirkulator sæt til 40 ° C (Fig. 1). </li><li> Sterilisering af kirurgisk atoler i et bægerglas med 70% ethanol. </li></ol> 3. Perfusion af leveren <ol><li> Bedøve en voksne Sprague-Dawley rotte af intraperitoneal injektion af Nembutal (50-100 mg / kg legemsvægt som nødvendigt for at opnå tilstrækkelig bedøvelse). </li><li> Placer dyret i liggende stilling på en plastbakke og fastsætte lemmer til bakken med tape. </li><li> Rengøre maven med 70% EtOH. </li><li> Lave et lille snit i huden på abdomen i midterlinjen. Dissekere huden væk fra fascia ved at foretage en U-formet snit på maven. Skar bugmuskel med en saks efter samme form for at blotlægge det peritoneale hulrum. </li><li> Udsæt portal vene ved hjælp af 2 vatpinde til forsigtigt at flytte indvolde fra bughulen til højre side. </li><li> Pass to sterile 2,0 silkesuturer under portalen vene og binde løst. </li><li> Kanyle portvenen med en 16-18 gauge IV kateteret og fastgøre kateteret på plads ved at stramme løst tied suturer fra det foregående trin (fig. 2). </li><li> Injicere fortyndede Heparin gennem IV kateteret (1 ml heparin 5000 USP enheder / ml fortyndet med 4 ml HBSS minus Ca2 + / Mg2 +). Leveren skal blancher. </li><li> Forbinde IV katetret til perfusionssystem. Perfundere med HBSS minus Ca2 + / Mg2 + med en hastighed på 20 ml / min i 10 minutter. Tværsnit IVC mindre end leveren for at tillade dræning af blod og perfusat. Aspireres poolet blod fra den abdominale kavitet. </li><li> Ændre perfusionsvæske til en 0,3% collagenaseopløsning (150 mg af type 2 collagenase i 500 ml HBSS plus Ca2 + / Mg2 +) og perfundere i 25 minutter. Hold leveren fugtige ved at dække den med den tidligere dissekerede abdominale flap. Sætte en petriskål dæksel over abdominale klappen og placere en varmelampe over området for at opretholde det intra-abdominale temperatur på omkring 37 ° C. </li></ol> 4. Fremstillinq af the galdetræet <ol><li> Fjerne leveren ved at løfte den ud af bughulen med en pincet og anbringes i en steril vævskulturskål fyldt med koldt Leibovitzs L-15 medie. </li><li> Arbejde i vævskultur hætte, skrælle leverkapslen og forsigtigt drille leverparenkym hinanden med en pincet. Flyt leveren gennem flere retter fyldt med Liebovitz L-15 medier, samtidig med at drille væk parenkym, indtil endelig tilbage med det isolerede galdetræet. Den leverparenkym er gyldenbrunt, mens den resterende galdetræet er hvid. </li><li> Anbring det isolerede galdetræet i et 50 ml Falcon-rør fyldt med 10 ml penicillin / streptomycin (10.000 IU / ml penicillin og 10.000 ug / ml streptomycin); efterlade på is i 15 minutter. </li></ol> 5. Isolering af Portal Fibroblast Fraktion <ol><li> Anbring det biliære træ i et sterilt 50 ml Falcon-rør og hakket med sterile sakse. </li><li> Tilsættes en lille mængde enzym solution # 1 i røret (ca. 5 ml) og fortsæt med at hakke det biliære træ, indtil den når sammenhængen af ​​en opslæmning. </li><li> Hæld opslæmningen i en steril glasflaske. Skyl falk rør med den resterende opløsning # 1, og derefter hælde det ned i glasflaske. Inkuber ved 37 ° C med rystning ved 100 opm i 30 minutter. </li><li> Filtreres opslæmningen gennem et bægerglas dækket med et enkelt lag af nylon mesh (30 mikron porestørrelse). </li><li> Overføre væv forbliver på toppen af ​​mesh til en steril glasflaske ved vask af indgreb med enzymopløsningen # 2. Begynder ved at hælde halv (25 ml) af opløsningen i et sterilt 15 cm petriskål. Forsigtigt fjernes mesh fra bægeret ved at holde kanterne af nettet uden at forurene det centrale område, og derefter vende mesh og dyppe det i opløsningen i petriskålen for at fjerne eventuel resterende væv på mesh. Kassér masken. Overføres opløsningen i petriskålen til en steril glasflaske. Skyl petriskålen med Remalingen 25 ml opløsning # 2 og overføre den til samme glasflaske. Inkuber ved 37 ° C med rystning ved 100 opm i 30 minutter. </li><li> I mellemtiden tages filtratet i bægerglasset og hældes i en 50 ml Falcon-rør. Centrifuger ved 1600 rpm (460 x g) i 5 minutter ved stuetemperatur. </li><li> Aspirer medier og pellet resuspenderes i 25 ml opløsning # 3. </li><li> Tag opløsningen fra trin 5.5 og filtreres i en anden steril bægerglas dækket med 30 mikron mesh. </li><li> Kassér masken. Centrifugeres filtratet ved 1600 rpm i 5 minutter ved stuetemperatur. Aspirer og resuspender pelleten i 25 ml opløsning # 3, som blev gjort i trin 5.7. </li><li> Kombiner 2 fraktioner fra trin 5.7 og 5.9 og centrifugeres igen ved 1600 rpm i 5 minutter ved stuetemperatur. </li><li> Aspirer medier og resuspender pelleten i 10 ml portal fibroblast dyrkningsmedier (DMEM/F12 suppleret med 10% FBS, 1% penicillin / streptomycin, 0,3% gentamycin og 0,2% fungizon). </li><li> Tæl cellerne for levedygtighed og pladen i vævskulturskåle. Afhængigt af den ønskede anvendelse, 0,5 til 5 x 10 6 celler pr 10 cm vævskulturplade er passende. Fra en voksen Sprague-Dawley rotter, typisk vi opnå 2 til 10 millioner levedygtige celler. </li><li> Erstatte dyrkningsmedier næste dag for at fjerne ikke-adhærerende debris. Derefter erstatter dyrkningsmedier hver 2. dag. </li></ol> 6. Repræsentative resultater Primære portal fibroblaster isoleret fra voksne rotter leveren er vist ved 1, 3 og 7 dage efter isolering (fig. 3). Bemærke, at cellerne langstrakte, med morfologi karakteristisk for fibroblaster. Celler kan farves med anti-elastin-antistof (CL55041AP, Cedarlane Labs, Burlington, NC) for at bekræfte renheden. Portal fibroblaster gennemgå myofibroblastic differentiering i kultur. Dette kan påvises ved immunfarvning for α-glat muskel-actin (α-SMA, A2547, Sigma, St. Louis, MO). <tableborder = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="2"> 0,3% collagenaseopløsning </td><td> Type 2 collagenase </td><td> 150 mg </td></tr><tr><td> HBSS med Ca 2 + / Mg2 + </td><td> 500 ml </td></tr><tr><td rowspan="7"> Opløsningen # 1 (pronase) </td><td> Bovint serumalbumin </td><td> 50 mg </td></tr><tr><td> Kollagenase type 2 </td><td> 25 mg </td></tr><tr><td> Pronase </td><td> 18 mg </td></tr><tr><td> DNase </td><td> 3 mg </td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> 47,5 ml </td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Føtalt bovint serum </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td> Løsning # 2 </td><td> Bovint serumalbumin </td><td> 50 mg </td></tr><tr><td rowspan="6"> (Hyaluronidase) </td><td> Kollagenase type 2 </td><td> 25 mg </td></tr><tr><td> Hyaluronidase </td><td> 22 mg </td></tr><tr><td> DNase </td><td> 3 mg </td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> 47,5 ml </td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Føtalt bovint serum </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td rowspan="2"> Løsning # 3 </td><td> DNase </td><td> 3 mg </td></tr><tr><td> RPMI-medium 1640 </td><td> 50 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Enzymopløsninger. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/3669/3669fig1.jpg" /> Figur 1. Perfusion oprettet. A. Vandcirkulator til opvarmning kolonne. B. søjle indeholdende perfusion medier. C. Stophane styring af pumpe udstrømning. D. Pumpe indstrømning. E. Variabel hastighed peristaltisk pumpe. F. Termokande med Bio-Clean rengøringsmiddel. G. varmelampe. H. Vandbad til opvarmning perfusion medier. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/3669/3669fig2.jpg" /> FiguAd 2. In situ perfusion. A. IV kateter indsat i vena, fastgjort med sutur, og forbundet til perfusionsslange via stophane. B. glaspipette forbundet til vakuum kolbe og væggen sugning for at fjerne perfusionsvæske dræning af transficerede IVC. I. tarmene. L. leveren. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/3669/3669fig3.jpg" /> Figur 3. Fasekontrast og immunofluorescens-farvning af rotte portal fibroblaster i kultur. Portalen fibroblaster dyrket i 1, 3 og 7 dage efter isolering blev fikseret og farvet for elastin, α-SMA og DAPI.

<ol>
	<li>Parola, M., Marra, F., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblast+-+like+cells+and+liver+fibrogenesis:+Emerging+concepts+in+a+rapidly+moving+scenario.">Myofibroblast - like cells and liver fibrogenesis: Emerging concepts in a rapidly moving scenario.</a> Mol. Aspects Med. 29, 58-66 (2008).</li><li>Dranoff, J. A., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portal+fibroblasts:+Underappreciated+mediators+of+biliary+fibrosis.">Portal fibroblasts: Underappreciated mediators of biliary fibrosis.</a> Hepatology. 51, 1438-1444 (2010).</li><li>Tuchweber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+phenotypic+modulation+of+portal+fibroblasts+in+the+early+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 74, 265-278 (1996).</li><li>Beaussier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prominent+contribution+of+portal+mesenchymal+cells+to+liver+fibrosis+in+ischemic+and+obstructive+cholestatic+injuries.">Prominent contribution of portal mesenchymal cells to liver fibrosis in ischemic and obstructive cholestatic injuries.</a> Lab Invest. 87, 292-303 (2007).</li><li>Kinnman, N., Housset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peribiliary+myofibroblasts+in+biliary+type+liver+fibrosis.">Peribiliary myofibroblasts in biliary type liver fibrosis.</a> Front Biosci. 7, d496-d503 (2002).</li><li>Kinnman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myofibroblastic+conversion+of+peribiliary+fibrogenic+cells+distinct+from+hepatic+stellate+cells+is+stimulated+by+platelet-derived+growth+factor+during+liver+fibrogenesis.">The myofibroblastic conversion of peribiliary fibrogenic cells distinct from hepatic stellate cells is stimulated by platelet-derived growth factor during liver fibrogenesis.</a> Lab Invest. 83, 163-173 (2003).</li><li>Uchio, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+retinol-binding+protein-1+expression+and+modulation+during+in+vivo+and+in+vitro+myofibroblastic+differentiation+of+rat+hepatic+stellate+cells+and+portal+fibroblasts.">Cellular retinol-binding protein-1 expression and modulation during in vivo and in vitro myofibroblastic differentiation of rat hepatic stellate cells and portal fibroblasts.</a> Lab Invest. 82, 619-628 (2002).</li><li>Kruglov, E. A., Jain, D., Dranoff, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+primary+rat+liver+fibroblasts.">Isolation of primary rat liver fibroblasts.</a> J. Investig. Med. 50, 179-184 (2002).</li><li>Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta+and+substrate+stiffness+regulate+portal+fibroblast+activation+in+culture.">Transforming growth factor-beta and substrate stiffness regulate portal fibroblast activation in culture.</a> Hepatology. 46, 1246-1256 (2007).</li><li>Bosselut, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+proteomic+features+of+two+fibrogenic+liver+cell+populations:+hepatic+stellate+cells+and+portal+myofibroblasts.">Distinct proteomic features of two fibrogenic liver cell populations: hepatic stellate cells and portal myofibroblasts.</a> Proteomics. 10, 1017-1028 (2010).</li><li>Dranoff, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ecto-nucleoside+triphosphate+diphosphohydrolase+NTPDase2/CD39L1+is+expressed+in+a+novel+functional+compartment+within+the+liver.">The ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase NTPDase2/CD39L1 is expressed in a novel functional compartment within the liver.</a> Hepatology. 36, 1135-1144 (2002).</li></ol>

Ingen interessekonflikter erklæret.

Portal fibroblaster spiller en vigtig rolle i galde fibrose. Her beskriver vi en modifikation af den oprindelige protokol offentliggjort af Kruglov og Dranoff 8 til isolering portal fibroblaster fra rottelever, hvilket giver en enkel måde at undersøge denne cellepopulation in vitro. Denne fremgangsmåde anvender protease-fordøjelse og størrelse baseret filtrering. Den primære fordel ved fremgangsmåden er, at en relativt ren population af celler kan opnås uden passage i kultur, således at undersøgelsen af ​​genekspression eller funktionelle celle adfærd flere dage efter isolering. Denne teknik giver også mulighed for at isolere celler fra både raske og syge lever. Et af de mest kritiske trin i denne protokol, er den enzymatiske nedbrydning af den hepatiske parenchym. For at sikre vellykket fordøjelse, er det vigtigt at bekræfte, at blod er fuldstændig drænet ud af leveren under den indledende perfuonen ved at sørge for, at der overhovedet er blegning af leveren. For at lette dette, er det muligt at bruge en vatpind til forsigtigt at massere leveren, mens perfusion. Over-fordøjelse af leverparenkym resulterer i et lavt udbytte af levedygtige celler, mens under-fordøjelse vil gøre det vanskeligt at adskille leverparenkym fra det biliære træ. Idet præparater med pronase har variationer i enzymatisk aktivitet mellem forskellige partier, optimering af den anvendte mængde kan være nødvendig, når der er lavt udbytte af levedygtige celler. Denne protokol kan modificeres til isolering af portal fibroblaster fra muselever eller unge rottelever ved anvendelse af en mindre sporvidde IV kateter til kanyle portvenen, nedsætte mængden af ​​perfusionsopløsninger i forhold til dyrets vægt og faldende leveren perfusionshastigheden til omkring 10 ml / min. Portal fibroblaster i kultur undergår myofibroblastic differentiering i 10-14 dage, som det fremgår af α-SMA exdepression 9. Forskellige markører er blevet anvendt til at skelne portal fibroblaster fra hepatiske stjerneformige celler, herunder fibulin-2, IL-6, elastin, nucleosidtriphosphat diphosphohydrolase-2 (NTPDase2), cofilin-1 og neuronale proteiner såsom synaptophysin 2, 6, 10, 11 . Vi har fundet, at elastin er en god markør for portal fibroblaster, selv efter myofibroblastic differentiering, mens NTPDase2 tabt efter portal fibroblaster har undergået kultur efter flere dage 9. Derfor har vi typisk bekræfter isolering af portal fibroblaster ved hjælp af immunfluorescens-farvning for elastin. Begrænsning ved denne teknik er, at umiddelbart efter portal fibroblast isolation, der er en lille brøkdel af kontaminerende celler, herunder Kupffer-celler og biliære celler. Portal fibroblaster vil vokse disse kontaminerende celler inden for 2-3 dage, men giver en relativt ren population (&gt; 98%) 9. SiIOU portal fibroblaster i kultur gennemgå myofibroblastic differentiering på vævsdyrkningsplast, vi typisk studere disse celler senest 7 dage efter isolation. Cellerne holdes i portal fibroblast dyrkningsmedier indeholdende 10% føtalt bovint serum, som beskrevet i metodeafsnittet. Imidlertid vil disse celler overlever i vækstmedier indeholdende 2% føtalt bovint serum i flere dage. Vi typisk bruger ikke lave serum-medier, før mindst 24 timer efter isolation. Når portal fibroblaster undergår myofibroblastic differentiering, kan de passager flere gange og opbevares som frosne lagre af myofibroblaster.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td></tr><tr><td> Type 2 Collagenase </td><td> Worthington Biochemical (Lakewood, NJ) </td><td> LS004177 </td></tr><tr><td> Pronase </td><td> Roche (Indianapolis, IN) </td><td> 70290120 </td></tr><tr><td> Hyaluronidase </td><td> Sigma (St. Louis, MO) </td><td> H3506 </td></tr><tr><td> Deoxyribonuklease </td><td> Sigma </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen (Carlsbad, CA) </td><td> 11320 </td></tr><tr><td> HBSS uden Ca2 + / Mg2 + </td><td> Mediatech (Manassas, VA) </td><td> 21-021-CM </td></tr><tr><td> HBSS med Ca 2 + / Mg2 + </td><td> Mediatech </td><td> 21-020-CM </td></tr><tr><td> Leibovitzs L-15 </td><td> Invitrogen </td><td> 11415 </td></tr><tr><td> RPMI medium 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11875 </td></tr><tr><td> Bovint Serum Albumin </td><td> Sigma </td><td> A2153 </td></tr><tr><td> Føtalt bovint serum </td><td> Gemini Bio (West Sacramento, CA) </td><td> 900-108 </td></tr><tr><td> Nitex nylonnet 30 um </td><td> Genesee Scientific (San Diego, CA) </td><td> 57-105 </td></tr></tbody></table>

isolation of rat portal fibroblasts by in situ liver perfusion

Leverfibrose er defineret ved overdreven aflejring af ekstracellulær matrix af aktiverede myofibroblaster. Der er flere forløbere for hepatiske myofibroblaster, herunder hepatiske stjerneformige celler, portal fibroblaster og knoglemarv afledt fibroblaster 1. Hepatiske stjerneformige celler har været det bedste undersøgt, men portalen fibroblaster anerkendes i stigende grad som vigtige bidragsydere til myofibroblast pool, især i biliær fibrose 2. Portal fibroblaster gennemgå spredning i respons på galde epitel skade, potentielt spille en central rolle i de tidlige stadier af galde ardannelse 3-5. En metode til at isolere portal fibroblaster ville tillade in vitro-undersøgelse af dette cellepopulation og føre til større forståelse af den rolle portalen fibroblaster spille i biliær fibrose. Portal fibroblaster er blevet isoleret under anvendelse af forskellige teknikker, herunder udvækst 6, 7 og Liver perfusion med enzymatisk fordøjelse efterfulgt af størrelsesbestemmelse selektion 8. Fordelen ved fordøjelse og størrelsesselektion teknik i forhold til udvæksten teknik er, at celler kan studeres uden nødvendigheden af ​​passage i kultur. Her beskriver vi en modificeret version af det oprindelige teknikken beskrevet af Kruglov og Dranoff 8 til isolering af portal fibroblaster fra rottelever som resulterer i en relativt ren population af primære celler.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion at JoVE.com

Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion

En teknik til isolering af portal fibroblaster fra rottelever er beskrevet. Lever er perfunderet og fordøjes<em&gt; In situ</em&gt; Med collagenase, efterfulgt af<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fordøjelse af leveren opslæmningen og størrelsen selektion af celler. Denne fremgangsmåde tilvejebringer en ren population af portal fibroblaster uden behov for passage i kultur.

Isolering af rotte portal fibroblaster ved<em&gt; In situ</em&gt; Lever Perfusion

Liver fibrosis is defined  by the excessive deposition of extracellular matrix by activated  myofibroblasts. There are multiple precursors of hepatic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion

In vivo Liver Endocytosis Followed by Purification of Liver Cells by Liver Perfusion

In vivo Liver Endocytosis Followed by Purification of Liver Cells by Liver Perfusion

In vivo Lever Endocytose Efterfulgt af rensning af leverceller af lever perfusion

The liver is the metabolic center of the mammalian body and serves as a filter for the blood.  The basic architecture of the liver is illustrated in ...

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

There are many circumstances where it is desirable to obtain the contractile response of skeletal muscle under physiological circumstances: normal ...

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

Liver stem cell, or oval cells, proliferate during chronic liver injury, and are proposed to differentiate into both hepatocytes and cholangiocytes. In ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Chromatin Isolering af RNA Oprensning (chirp)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolering og Primær kultur Rotte levercellerne

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

Isolering af normale og cancer-associeret fibroblaster fra friske væv ved fluorescens-aktiveret cellesortering (FACS)

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are the most prominent cell type within the tumor stroma of many cancers, in particular breast carcinoma, and their ...

Isolation of Human Hepatocytes by a Two-step Collagenase Perfusion Procedure

Isolering af humane hepatocytter ved en to-trins collagenaseperfusion Procedure

The liver, an organ with an exceptional regeneration capacity, carries out a wide range of functions, such as detoxification, metabolism and homeostasis. ...

Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart

Samtidig isolering af cardiomyocytter af høj kvalitet, endotelceller og fibroblaster fra en voksen rottehjerte

The rat is an important animal model used in cardiovascular research, and rat cardiac cells are used routinely for in vitro analysis of the molecular ...

Isolation and Characterization of Adult Cardiac Fibroblasts and Myofibroblasts

Isolation og karakterisering af voksne hjertefibroblaster og Myofibroblaster

Cardiac fibrosis in response to injury is a physiological response to wound healing. Efforts have been made to study and target fibroblast subtypes that ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

Isolering og karakterisering af exosomer fra skeletmuskelfibroblaster

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...