Name: the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de American Heart Association (EIA 0740129N) en NIH T32 HL90610.

1. Voorafgaand aan de Experiment <ol><li> Voorafgaand aan het experiment dag worden capillaire glazen buisjes van geschikte afmetingen van het station in getrokken micropipetten (een horizontale of verticale puller worden gebruikt). De tip diameter kan gemakkelijk worden aangepast afhankelijk van het schip wordt geïsoleerd, hoewel we over het algemeen een diameter gebruiken tussen 50-150 urn. Deze worden vervolgens gebogen om de configuratie van het microvaatje station volgende verwarming op een butaanvlamproef. Micr...

<ol>
	<li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome.">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li><li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension.">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone.">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth.">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth.">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li><li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+rat+intracerebral+arterioles:+methods,+morphology,+and+reactivity.">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li><li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2.">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li><li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-(1-7)+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries.">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li><li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles.">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li><li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries.">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li><li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia.">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li><li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia.">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li><li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li><li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs.">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. s. o. l. a. t. e. d., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. 32, 435-456 (1995).</li><li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin.">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li></ol>

De gepresenteerde protocol beschrijft de isolatie, de verwijdering en dubbele cannulatie van een skeletspier microvaatje, hoewel dit algemene techniek gemakkelijk kan worden toegepast op de meeste weefsels. Voor de huidige manuscript, is de term &quot;arteriole&quot; is gebruikt door de auteurs op een weerstand schip variërend van 70 tot 120 micrometer in diameter onder rust actief toon, die ook een belangrijke bijdrage aan de regulering van perfusie weerstand tegen een orgaan of te beschrijven weefsel. <p class="j...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentia en apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Opmerkingen / Catalogus # </td></tr><tr><td> Schip Kamer </td><td> Gewoonte </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Verwarmde circulerende water bad </td><td> PolyScience en Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetten </td><td> Frederick Haer &amp; Co </td><td> Capillaire buis 2,0 mm OD x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Pressure Monitor </td><td> Wereld Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Watermantel Reservoir </td><td> Gewoonte </td><td></td></tr><tr><td> Externe lichtbron </td><td> Wereld Precision Instruments </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipet Puller </td><td> Microdata Instrumenten </td><td> PMP102 micropipet Puller </td></tr><tr><td> Volledige voltooiingling van chirurgische instrumenten </td><td> Fine Science Tools </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra Fine tang </td><td> Fine Science Tools </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silk hechtdraad </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 of 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo Microscoop </td><td> Olympus </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analoge video Schuifmaten </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Hoge resolutie analoge camera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Zuurstoftank </td><td> Regionaal </td><td> 21% rest stikstof en 5% CO2 rest stikstof </td></tr><tr><td> Buis </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Laat de pomp </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td></td></tr><tr><td> Gewijzigd Rat PSS </td><td> Zie recept </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Relaxant PSS van Breemen&#39;s </td><td> Zie recept </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 1. Een lijst van de belangrijkste componenten van geïsoleerde microvaatjes station setup gepresenteerd in de figuren. <table border="1"><tbody><tr><td> Gewijzigd Rat PSS Recept </td><td> Om twee liter PSS te maken </td><td> 20X Salt Stock (2L) </td><td> 20X buffervoorraad (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSÜ4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCÛ3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Zout Stock </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffervoorraad </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gedestilleerd water </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 2. Recept voor standaard fysiologische zoutoplossing (PSS) van de geïsoleerde microvaatje protocollen. Reacties op Recept: Maak 2 L van Salt Stock en 2 L van de buffervoorraad. Deze ceen koelkast worden bewaard als deze niet wordt gebruikt, maar schud ze goed en vaak voor de voorbereiding van PSS. De extra bestanddelen worden toegevoegd bij de bereiding van definitieve PSS. <table border="1"><tbody><tr><td> Relaxant PSS van Breemen&#39;s </td><td> Om 2 liter PSS te maken </td><td> 20X Salt Stock (1L) </td><td> 20X buffervoorraad (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSÜ4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCÛ3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTEen </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Zout Stock </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffervoorraad </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gedestilleerd water </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 3. Recept voor relaxerend fysiologisch zout Van Breemen De oplossing van (PSS) gebruikt in de geïsoleerde microvaatje protocollen, onder de voorwaarden van nul actieve toon. Reacties op Recept: Maak 1 L van Salt voorraad Eennd 1 L van de buffervoorraad. Deze kunnen in de koelkast wanneer deze niet wordt gebruikt, maar schud ze goed en vaak voor de voorbereiding van PSS. De extra bestanddelen worden toegevoegd bij de bereiding van definitieve relaxerende PSS.

the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity

De geïsoleerde microvaatjes voorbereiding is een ex vivo voorbereiding die het mogelijk maakt voor het onderzoek van de verschillende bijdragen van de factoren die de controle bloedvaten, en dus perfusie weerstand 1-5. Dit is een klassiek experimenteel preparaat dat, was in hoge mate, in eerste instantie beschreven door Uchida et al. 15. Enkele decennia geleden. Deze eerste beschrijving vormt de basis voor de technieken die op grote schaal werd gewijzigd en aangevuld, met name in het laboratorium van Dr Brian Duling aan de Universiteit van Virginia 6-8, en we presenteren een huidige aanpak op de volgende pagina&#39;s. Deze voorbereiding zal specifiek verwijzen naar de gracilis arteriole in een rat als het microvaatje van keuze, maar de basis bereiding gemakkelijk kan worden toegepast op schepen geïsoleerd van bijna elk ander weefsel of orgaan bij verschillende diersoorten 9-13. Mechanische (dat wil zeggen, dimensionaal) veranderingen in de geïsoleerde micro-vaatjes kan gemakkelijk worden geëvalueerdin antwoord op een breed scala van fysiologische (bijvoorbeeld hypoxie, intravasculaire druk of afschuiving) of farmacologische problemen en kan inzicht in mechanische elementen die geïntegreerd reacties in een intacte, maar ex vivo, weefsel. De betekenis van deze methode is dat het mogelijk maakt gemakkelijke manipulatie van de invloeden van de geïntegreerde regulering van diameter microvaatje, en daarbij tevens de controle van vele van de bijdragen van andere bronnen, zoals intravasculaire druk (myogene) autonome innervatie hemodynamische ( bijvoorbeeld, shear stress), endotheel afhankelijke of onafhankelijke stimuli, hormonale en parenchymale invloeden, om een ​​deel van de lijst te verstrekken. Onder geschikte proefomstandigheden en met geschikte doelen kan dit als een voordeel ten opzichte in vivo of in situ weefsel / orgaan preparaten, die niet gemakkelijk mogelijk om de eenvoudige besturing van bredere systemische variabelen. Het major beperking van dit preparaat in hoofdzaak het gevolg van de sterke. Per definitie is het gedrag van deze schepen wordt bestudeerd onder omstandigheden waar veel van de meest belangrijke mate bijdragen aan de regulering van vasculaire weerstand hebben afgeschaft, ook neurale, humorale, metabole, enz. Als zodanig wordt de onderzoeker gewaarschuwd om over-te voorkomen de interpretatie en de extrapolatie van de gegevens die worden verzameld gebruik te maken van deze voorbereiding. Het andere belangrijke punt van zorg met betrekking tot deze voorbereiding is dat het kan heel gemakkelijk om cellulaire componenten zoals de endotheliale bekleding of de vasculaire gladde spieren beschadigen, kunnen dergelijke die variabele bron van fouten worden ingevoerd. Het wordt ten zeerste aanbevolen dat de individuele onderzoeker juiste metingen om de kwaliteit van de voorbereiding te garanderen gebruiken, zowel bij de start van het experiment en periodiek in de loop van een protocol.

Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Voorbereiding wordt beschreven voor het isoleren van de grootste gracilis spier weerstand arteriolen is voor raadpleging van zowel vasculaire reacties op vasoactieve stimuli en de beoordeling van de fundamentele structurele eigenschappen via passieve muur mechanica.

De Ex vivo Geïsoleerd Skeletal microvaatjes Voorbereiding Voor het onderzoek van vasculaire reactiviteit

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Research

JoVE Journal

Biology

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Methode voor Cultuur van Early kippenembryo&#39;s ex vivo (Nieuwe Cultuur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentivirale-gemedieerde Knockdown Tijdens het Ex Vivo Erytropoëse van humane hematopoietische stamcellen

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Een systeem voor<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kweken van embryonale Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Beoordeling van contractiliteit, vermoeidheid en alternantie in geïsoleerde skeletspieren

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cultuur Methode voor de embryonale Mouse Hart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

Kwantificeren Single microvessel permeabiliteit in Geïsoleerde-Blood geperfuseerde Rat Lung Voorbereiding

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Samentrekbaarheid Metingen op Geïsoleerde papillairspieren voor onderzoek naar Cardiac inotropie in Muizen

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

De c-FOS Protein Immunohistologische Detection: Een handig hulpmiddel als een marker van Central Pathways betrokken bij specifieke fysiologische reacties<em&gt; In Vivo</em&gt; en<em&gt; Ex Vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Isolatie van muizen coronaire vasculaire gladde spiercellen

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...