Name: the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00
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Diese Arbeit wurde von der American Heart Association (EIA 0740129N) und NIH T32 HL90610 unterstützt.

1. Vor dem Experiment <ol><li> Vor dem Experiment Tag werden Glaskapillarrohre den passenden Abmessungen für die Station in Mikropipetten (entweder eine horizontale oder vertikale Abzieher kann verwendet werden) gezogen wird. Der Durchmesser der Spitze kann leicht eingestellt werden je nach Gefäß isoliert, obwohl wir verwenden in der Regel einen Durchmesser zwischen 50-150 um. Diese werden dann an die entsprechende Konfiguration für den microvessel Station folgenden Erwärmen über einer Flamme Butan gebogen. Mikr...

<ol>
	<li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome.">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li><li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension.">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone.">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth.">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth.">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li><li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+rat+intracerebral+arterioles:+methods,+morphology,+and+reactivity.">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li><li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2.">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li><li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-(1-7)+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries.">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li><li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles.">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li><li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries.">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li><li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia.">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li><li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia.">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li><li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li><li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs.">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. s. o. l. a. t. e. d., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. 32, 435-456 (1995).</li><li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin.">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li></ol>

Das Protokoll beschreibt die Isolierung dargestellt, Entfernen und Doppel-Kanülierung eines Skelettmuskels Mikrogefäßzellen, obwohl diese allgemeine Technik kann einfach in die meisten Gewebe aufgebracht werden. Für das laufende Manuskript hat der Begriff &quot;Arteriole&quot; von den Autoren verwendet worden, um einen Widerstand im Bereich zwischen 70-120 Schiff um Durchmesser unter Ruhebedingungen aktiven Ton, der auch ein wesentlicher Faktor für die Regulierung der Durchblutung Widerstand gegen ein Organ oder be...

<table border="1"><tbody><tr><td> Chemikalien und Geräte </td><td> Firma </td><td> Kommentare / Katalog # </td></tr><tr><td> Gefäßkammer </td><td> Brauch </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Beheizte zirkulierenden Wasserbad </td><td> PolyScience und Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetten </td><td> Frederick Haer &amp; Co. </td><td> Kapillarrohr 2,0 mm AD x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Pressure Monitor </td><td> World Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Wassermantel Reservoir </td><td> Brauch </td><td></td></tr><tr><td> Externe Lichtquelle </td><td> World Precision Instruments </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipettieren Puller </td><td> Mikrodaten Instruments </td><td> PMP102 Mikropipette Puller </td></tr><tr><td> Vollständige Fertigstellungment chirurgischer Werkzeuge </td><td> Fine Science Tools </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra Fine Zange </td><td> Fine Science Tools </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silk Nahtfaden </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 oder 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo-Mikroskop </td><td> Olymp </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analoge Video-Messschieber </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Hochauflösende Analog-Kamera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Sauerstoffbehälter </td><td> Regional </td><td> 21% Rest Stickstoff und 5% CO 2-Bilanz Stickstoff </td></tr><tr><td> Rohr </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Ablaufpumpe </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Geändert Ratte PSS </td><td> Siehe Rezept unten </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Van den Breemen Relaxant PSS </td><td> Siehe Rezept unten </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Eine Liste der wichtigsten Komponenten der isolierten microvessel Stationierung in den Figuren dargestellt. <table border="1"><tbody><tr><td> Geändert Ratte PSS Rezept </td><td> Um zwei Liter PSS machen </td><td> 20X Salz Lager (2L) </td><td> 20X Ausgleichslagerkonto (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salz vorrätig </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Ausgleichslagerkonto </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destilliertes Wasser </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Rezept für Standard-physiologische Salzlösung (PSS) in den isolierten microvessel Protokolle verwendet. Kommentare zu Rezept: 2 L Achten von Salt Lager und 2 L Ausgleichslagers. Diese cein im Kühlschrank gelagert werden, wenn sie nicht benutzt, aber schütteln Sie sie gut und oft vor der Zubereitung PSS. Die zusätzlichen Bestandteile sind zum Zeitpunkt der Herstellung der endgültigen PSS zugegeben. <table border="1"><tbody><tr><td> Van den Breemen Relaxant PSS </td><td> Zu 2 Litern PSS machen </td><td> 20X Salz Lager (1L) </td><td> 20X Ausgleichslagerkonto (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTEin </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salz vorrätig </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Ausgleichslagerkonto </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destilliertes Wasser </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 3. Rezept für Beruhigungsmittel physiologischen van Breemen der Salzlösung (PSS) in den isolierten microvessel Protokolle unter den Bedingungen von Null aktiv Ton verwendet. Kommentare zu Rezept: 1 L Achten von Salt Lager einND 1 L Ausgleichslagers. Diese können im Kühlschrank gelagert werden, wenn sie nicht benutzt, aber schütteln Sie sie gut und oft vor der Zubereitung PSS. Die zusätzlichen Bestandteile sind zum Zeitpunkt der Herstellung der endgültigen Beruhigungsmittel PSS zugegeben.

the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity

Die isolierte microvessel Vorbereitung ist eine Ex-vivo-Präparat, das zur Untersuchung der unterschiedlichen Beiträge der Faktoren, die Kontrolle Gefäßdurchmesser ermöglicht, und somit Perfusionswiderstandes 1-5. Dies ist ein klassisches experimentelles Präparat, das in hohem Maße war, zunächst von Uchida et al. 15 vor einigen Jahrzehnten. Diese erste Beschreibung, die die Grundlage für die Techniken, die umfassend modifiziert und verbessert wurde, in erster Linie im Labor von Dr. Brian Duling an der University of Virginia 6-8, und präsentieren wir Ihnen eine aktuelle Ansatz auf den folgenden Seiten. Diese Vorbereitung wird speziell auf die gracilis Arteriole in einer Ratte als microvessel der Wahl beziehen, aber die grundlegende Vorbereitung lässt sich problemlos auf Schiffe von nahezu jedem anderen Gewebe oder Organ über Artgrenzen 13.09 isoliert angewendet werden. Mechanische (dh dreidimensionale) Veränderungen in der isolierten Mikrogefäße kann leicht ausgewertet werdenin Reaktion auf eine breite Palette von physiologischen (zB Hypoxie, intravaskuläre Druck oder Scherung) oder pharmakologische Herausforderungen und einen Einblick in mechanistische Elemente mit integrierten Reaktionen in einer intakten bereitzustellen, obwohl ex vivo Gewebe. Die Bedeutung dieser Methode ist, dass es für einfache Manipulation der Einflüsse können auf der integrierten Regelung der microvessel Durchmesser, aber dabei auch für die Steuerung von vielen der Beiträge aus anderen Quellen, einschließlich der intravaskulären Druck (myogenen), autonomen Innervation, hämodynamische ( zB Scherspannung), Endothel-abhängigen oder unabhängigen Stimuli, hormonelle und Parenchymzellen Einflüsse, um eine teilweise Liste zu liefern. Unter geeigneten experimentellen Bedingungen und mit entsprechenden Zielen, kann dies als Vorteil gegenüber in vivo oder in situ Gewebe / Organ Präparate, die nicht leicht für die einfache Steuerung von größeren systemischen Variablen ermöglichen dienen. Die major Einschränkung dieser Vorbereitung ist im Wesentlichen die Folge seiner Stärken. Per Definition ist das Verhalten dieser Schiffe wird unter Bedingungen, wo viele der bedeutendsten Beiträge zur Regulierung des vaskulären Widerstands entfernt worden sind, einschließlich der neuronalen, humoralen, metabolischen, etc. Als solche untersucht, so ist der Prüfer darauf achten, sich über-vermeiden Interpretation und Extrapolation der Daten, die gesammelt unter Verwendung dieser Zubereitung werden. Ein weiterer wichtiger Bereich der Bedenken hinsichtlich dieser Zubereitung ist, dass sie sehr einfach zu zellulären Bestandteilen wie das Endothel oder vaskulären glatten Muskelzellen beschädigen kann, so dass variable Quelle der Fehler eingeführt werden. Es wird dringend empfohlen, dass die einzelnen Ermittler entsprechende Messungen, um die Qualität der Zubereitung gewährleisten zu nutzen, sowohl auf der Start des Experiments und in regelmäßigen Abständen im Laufe eines Protokolls.

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The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Ein<em&gt; Ex vivo</em&gt; Präparat wird zur Isolierung der größten M. gracilis Widerstand Arteriolen zur Vernehmung der beiden vaskulären Reaktionen auf vasoaktive Reize und die Bewertung der grundlegenden Eigenschaften über passive Wand Mechanik beschrieben.

Die Ex vivo Isoliert Skeletal Mikrogefäßdichte Vorbereitung für Untersuchung der vaskulären Reaktivität

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Research

JoVE Journal

Biology

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

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BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Forschung

Biologie

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Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

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