Name: the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00
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1。実験に先立って<ol><li>実験の日に先立って、ステーションの適切な寸法のガラスキャピラリーチューブは、マイクロピペット（水平または垂直プラーを使用することができる）にプルアップされています。我々は一般に50から150ミクロンの直径範囲を使用するものの、先端径を容易に、分離されている容器に応じて調整することができます。そして、これらはブタン火炎上の加熱後に微?...

<ol>
	<li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome.">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li><li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension.">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone.">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth.">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth.">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li><li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+rat+intracerebral+arterioles:+methods,+morphology,+and+reactivity.">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li><li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2.">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li><li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-(1-7)+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries.">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li><li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles.">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li><li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries.">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li><li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia.">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li><li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia.">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li><li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li><li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs.">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. s. o. l. a. t. e. d., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. 32, 435-456 (1995).</li><li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin.">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li></ol>

この一般的な手法は容易にほとんどの組織に適用することができますが、提示さプロトコルは、骨格筋の微小血管の分離、除去し、ダブルカニュレーションについて説明します。現在の原稿のために、用語 &quot;細動​​脈&quot;はアクティブなトーンを休んで、直径70から120ミクロンの範囲の抵抗血管を記述するために著者によって使用されており、臓器にも血流抵抗の調節に主要な貢献者で?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬および器具 </td><td> 会社 </td><td> コメント/カタログ＃ </td></tr><tr><td>血管商工会議所</td><td>カスタム</td><td>デイブEick（MCW） </td></tr><tr><td>温水循環水浴</td><td> PolyScienceとハーケ</td><td>ハーケDC 10 </td></tr><tr><td>ピペット</td><td>フレデリックHaer·アンド·カンパニー</td><td>キャピラリーチューブ2.0ミリメートル外径×内径1.0 mm（27-33-1） </td></tr><tr><td>圧力監視装置</td><td>世界の精密機器</td><td></td></tr><tr><td>水ジャケットリザーバー</td><td>カスタム</td><td></td></tr><tr><td>外部光源</td><td>世界の精密機器</td><td> Novaflex </td></tr><tr><td>ピペットプラー</td><td>ミクロ·インスツルメンツ</td><td> PMP102マイクロピペットプラー</td></tr><tr><td>完全相補手術器具のメンター</td><td>ファイン科学ツール</td><td>デュモン</td></tr><tr><td>ウルトラファイン鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td>イノックス＃5 </td></tr><tr><td>シルク縫合糸</td><td> Ethilon </td><td> ＃10から0または9から0 </td></tr><tr><td>ステレオ顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td>オリンパスSZ-11 </td></tr><tr><td>アナログビデオキャリパー</td><td> Boeckeler </td><td>を介してコントローラ（VIA-100） </td></tr><tr><td>高解像度アナログカメラ</td><td>パナソニック</td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td>酸素タンク</td><td>地域の</td><td> 21％のバランスの窒素および5％CO 2のバランス窒素</td></tr><tr><td>チューブ</td><td>タイゴン</td><td></td></tr><tr><td>排出ポンプ</td><td>コー​​ルパーマーインストゥルメント（株） </td><td></td></tr><tr><td>変更されたラットのPSS </td><td>以下のレシピを参照してください。 </td><td></TD&gt; </tr><tr><td>バン·ブレーメンの弛緩PSS </td><td>以下のレシピを参照してください。 </td><td></td></tr></tbody></table> 表1。図に示され孤立した微小血管ステーションのセットアップの主要なコンポーネントのリストが表示されます。 <table border="1"><tbody><tr><td> 変更されたラットPSSレシピ </td><td> PSSの2リットルを作成するには </td><td> 20X塩ストック（2L） </td><td> 20Xバッファーストック（2L） </td></tr><tr><td> NaClを</td><td></td><td> 278.0グラム</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td></td><td> 14.0グラム</td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4を -7H 2 O </td><td></td><td> 11.5グラム</td><td></td></tr><tr><td>のCaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9.4グラム</td><td></td></tr><tr> &lt;TD&gt; NaHCO 3を </td><td></td><td></td><td> 80.8グラム</td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.4グラム</td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4 </td><td> 0.28グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 1.98グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20倍の塩ストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20Xバッファーストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 1800 mLの</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 表2。孤立した微小血管のプロトコルで使用される標準の生理食塩水（PSS）のレシピ。 レシピへのコメント：塩ストックとバッファストックの2 L 2 Lを作成します。これらのC使用されていないときに冷蔵なりますが、PSSを準備する前によく、多くの場合、それらを横に振る。追加成分は、最終的なPSSの準備の時に追加されます。 <table border="1"><tbody><tr><td> バン·ブレーメンの弛緩PSS </td><td> PSSの2リットルを作成するには </td><td> 20X塩ストック（1L） </td><td> 20X緩衝在庫（1L） </td></tr><tr><td> NaClを</td><td></td><td> 107.4グラム</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td></td><td> 7.0グラム</td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4を -7H 2 O </td><td></td><td> 5.76グラム</td><td></td></tr><tr><td>のMgCl 2·6H 2 O </td><td></td><td> 81.32グラム</td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td></td><td></td><td> 40.4グラム</td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.2グラム</td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4 </td><td> 0.28グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 1.98グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20倍の塩ストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20Xバッファーストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 1800 mLの</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 表3。ゼロアクティブなトーンの条件下で分離された微小血管のプロトコルで使用されるバン·ブレーメンの弛緩生理食塩水（PSS）のレシピ。 レシピへのコメント：塩株式の1 Lを作成する緩衝在庫のND 1 L。これらは使用されていないときに冷蔵なりますが、よく、多くの場合、PSSを準備する前にそれらを振ることができます。追加成分は、最終的な弛緩PSSの準備の時に追加されます。

the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity

孤立した微小血管の準備は、このように血流抵抗が1から5まで様々な要因の寄与を制御する血管径の検査を可能にするex vivoでの製剤である、と。これは、大規模な測定では、最初に内田らによって記述されていた15数十年前に古典的な実験の準備です。この最初の記述は主にバージニア6-8の大学で博士ブライアンDulingの研究室で、広範囲に変更され、強化された技術の基礎を提供し、我々は以下のページで現在のアプローチを提示します。この準備は、特に任意の微小血管としてラットの薄筋の動脈を参照してくださいますが、基本的な準備が容易に種を9月13日を越え、ほぼすべての他の組織または器官から分離された船舶に適用することができます。孤立した微小血管の機械的（すなわち、次元）の変更が容易に評価することができます生理の広範な配列（例えば、低酸素症、血管内の圧力、せん断）または薬理学的な課題への応答、および無傷たが、ex vivoで 、組織に統合された応答を構成する機構要素への洞察を提供することができます。また、血管内の圧力（筋）など、他のソースからの貢献の多くの制御を許可しながら、この方法の重要性は、血行動態、自律神経支配、それは微小血管径の統合された規制上の影響の容易な操作のためにできることです（例えば、せん断応力）、内皮依存性または独立した刺激、ホルモン、および実質の影響は、部分的なリストを提供します。適切な実験条件下で、適切な目標と、これは、 インビボまたは容易に広範な全身の変数の容易な制御のために許可されていない現場組織/臓器の準備、 の上の利点として機能することができます。 マこの準備のJOR制限は本質的に強みの結果である。定義により、これらの血管の動作は血管抵抗の調節に最も重要な貢献者の多くはこのように、神経体液性、代謝などを含む、削除されている、研究者が避けるために注意を促している条件の下で検討されている過この調製物を利用して収集されるデータの解釈と外挿。この準備に関して懸念の他の重要なエリアは、そのような内皮細胞ライニングや血管平滑筋などの細胞成分を損傷し、エラーの変数ソースを導入することができるような非常に簡単であるということです。それが強く、個々の治験責任医師はプロトコルのコースを通じて準備の品質を確保するための適切な測定、実験開始時と定期的に両方を利用することをお勧めします。

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The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

不定冠詞<em&gt; ex vivoで</em&gt;準備は血管の血管作動性刺激に対する反応と受動的な壁の力学を介して基本的な構造特性の評価の両方を尋問のために最大の薄筋の抵抗動脈の分離に記載されています。

ザ ex vivoで</em血管反応性の調査のために>隔離された骨格微小血管の準備

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Research

JoVE Journal

Biology

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

イントラ不可欠な顕微鏡による骨格筋のin vivo微小循環測定における

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

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レンチウイルスを介したノックダウン中生体外で</emヒト造血幹細胞の>赤血球

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A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

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隔離された骨格筋の収縮、倦怠感や交互の ex vivo での評価

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

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小説<em&gt;エクスビボ</emマウス胎児ハート&gt;文化法

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

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Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

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Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

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C-FOSタンパク質免疫組織学的検出：特定の生理反応に関与する中央経路のマーカーとして有用ツール<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt; ex vivoで</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

マウス冠動脈血管平滑筋細胞の単離

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

ザ ex vivoで隔離された骨格微小血管の準備