Name: the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

이 작품은 미국 심장 협회 (EIA 0740129N)와 NIH T32 HL90610에 의해 지원되었다.

1. 실험에 앞서 <ol><li> 실험 하루 전에 기차역에 적합한 크기의 유리 모세관 튜브는 micropipettes (중 수평 또는 수직으로 끌어당기는 사용할 수있다)에 연루된다. 우리가 일반적으로 50-150 μm의 사이에 직경 범위를 사용하더라도 팁 직경은 쉽게, 고립되는 혈관에 따라 조정할 수 있습니다. 이러한 그러면 부탄 화염 이상 microvessel 역 아래의 가열을위한 적절한 구성에 부러 졌지 만요. Micropipette 팁은 ?...

<ol>
	<li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome.">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li><li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension.">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone.">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth.">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth.">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li><li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+rat+intracerebral+arterioles:+methods,+morphology,+and+reactivity.">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li><li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2.">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li><li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-(1-7)+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries.">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li><li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles.">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li><li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries.">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li><li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia.">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li><li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia.">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li><li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li><li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs.">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. s. o. l. a. t. e. d., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. 32, 435-456 (1995).</li><li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin.">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li></ol>

이러한 일반적인 기술은 쉽게 대부분의 조직에 적용할 수 있지만 제시 프로토콜, 골격 근육 microvessel의 분리, 제거 및 이중 cannulation을 설명합니다. 현재 원고 내용은 용어 &quot;arteriole&quot;도 주요 장기에 재관류 저항의 규정에 기여 아니면 휴식 활성 톤 미만의 직경 70-120 μm의 사이에 이르기까지 저항 혈관을 설명하기 위해 저자가 사용되었습니다 조직. 일부 수정이 시스템은...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 및 장비 </td><td> 회사 </td><td> 덧글 / 카탈로그 # </td></tr><tr><td> 선박 상공 회의소 </td><td> 사용자 정의 </td><td> 데이브 Eick (MCW) </td></tr><tr><td> 온수 순환 물 목욕 </td><td> PolyScience 및 Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipets </td><td> 프레데릭 Haer &amp; (주) </td><td> 모세관 튜브 2.0 mm OD X 1.0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> 압력 모니터 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td></td></tr><tr><td> 물의 외피 저수지 </td><td> 사용자 정의 </td><td></td></tr><tr><td> 외부 광원 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipet의 풀러 </td><td> MicroData 인 스트 루먼트 </td><td> PMP102 Micropipet 풀러 </td></tr><tr><td> 전체 결점수술 도구, 표준 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 뒤몽 </td></tr><tr><td> 울트라 파인 집게 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> 실크 봉합사 스레드 </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 또는 9-0 </td></tr><tr><td> 스테레오 현미경 </td><td> 올림포스 산 </td><td> 올림푸스 SZ-11 </td></tr><tr><td> 아날로그 비디오 캘리퍼스 </td><td> Boeckeler </td><td> 비아 컨트롤러 (비아-100) </td></tr><tr><td> 고해상도 아날로그 카메라 </td><td> 파나소닉 </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> 산소 탱크 </td><td> 지역 </td><td> 21 % 밸런스 질소와 5 %는이 밸런스 질소를 공동 </td></tr><tr><td> 관류 </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> 펌프 배수 </td><td> 콜 Parmer 악기 (주) </td><td></td></tr><tr><td> 수정된 생쥐 PSS </td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td><td></TD&gt; </tr><tr><td> 반 Breemen의 이완 PSS </td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. 수치로 표시 절연 microvessel 스테이션 설정의 주요 구성 요소의 목록입니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 수정된 생쥐 PSS 제조법 </td><td> PSS 2 리터를 만들려면 </td><td> 20X 소금 증권 (2L) </td><td> 20X 버퍼 증권 (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278.0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14.0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 7H 2 O </td><td></td><td> 11.5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9.4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;TD&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80.8 g </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td></td><td></td><td> 0.4 g </td></tr><tr><td> 아뇨 2 PO 4 </td><td> 0.28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 1.98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x 소금 증권 </td><td> 100 ML </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x 버퍼 증권 </td><td> 100 ML </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 증류수 </td><td> 1800 ML </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 2. 격리된 microvessel 프로토콜에서 사용되는 표준 생리 식염수 (PSS)를위한 레시피. 레시피에 대한 의견 : 소금 주식 2 패와 버퍼 증권 2 패하십시오. 이 C사용하지 않는 경우 냉장 있겠지만 잘 종종 PSS를 준비하기 전에 그들을 흔들어. 추가 재료는 최종 PSS의 준비 시점에 추가됩니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 반 Breemen의 이완 PSS </td><td> PSS 2 리터를 만들려면 </td><td> 20X 소금 증권 (1L) </td><td> 20X 버퍼 증권 (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107.4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7.0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 7H 2 O </td><td></td><td> 5.76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 6H 2 O </td><td></td><td> 81.32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40.4 g </td></tr><tr><td> 동부 서머 타임</td><td></td><td></td><td> 0.2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td> 아뇨 2 PO 4 </td><td> 0.28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 1.98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x 소금 증권 </td><td> 100 ML </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x 버퍼 증권 </td><td> 100 ML </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 증류수 </td><td> 1800 ML </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 3. 제로 활성 톤의 조건 하에서 절연 microvessel 프로토콜에 사용되는 반 Breemen의 이완 생리 식염수 (PSS)를위한 레시피. 레시피에 대한 의견 : 소금 증권 1 패 만들기버퍼 증권의 ND 1 패. 이들은 사용하지 않는 경우 냉장 있겠지만 잘 종종 PSS를 준비하기 전에 그들을 흔들 수있다. 추가 재료는 최종 이완 PSS의 준비 시점에 추가됩니다.

the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity

절연 microvessel 준비는, 따라서 관류 저항 1-5 여러 요인 공헌 제어하는 혈관 직경의 전형을 허용 전직 생체내 준비이며. 이것은 처음. 15 몇 년 전 우치다 외 의해 설명, 대형 측정에서였다 고전 실험 준비입니다. 이것은 초기 설명은 광범위 주로 버지니아 6-8의 대학에서 박사 브라이언 Duling의 실험실에서 수정되고 향상되었습니다 기법에 대한 기초를 제공하고, 우리는 다음 페이지에서 현재의 접근 방식을 제시. 이러한 준비는 특히 선택의 microvessel 같은 시궁창에서 gracilis의 arteriole을 참조되지만, 기본적인 준비가 쉽게 종의 9-13 전역의 거의 모든 다른 조직이나 기관으로부터 격리 선박에 적용할 수 있습니다. 고립된 microvessels의 기계식 (즉, 차원) 변경 사항을 쉽게 평가할 수생리학 (예 : hypoxia, intravascular 압력, 또는 전단) 또는 pharmacological 도전, 그리고 손상에 통합 반응 구성된 기계론의 요소로 통찰력을 제공할 수 있지만 예전의 생체내, 조직의 광범위한 배열에 대응 인치 이 방법의 중요성 또한 intravascular 압력 (myogenic), 자율 innervation, hemodynamic 포함한 기타 출처로부터 기부금의 많은 컨트롤을 허용하는 동시에 그것이, microvessel 직경의 통합 규제에 영향 손쉬운 조작을 허용하는 것입니다 ( 예를 들어, 전단 응력), 내피 의존하거나 독립적인 자극, 호르몬, 그리고 parenchymal 영향, 부분적인 목록을 제공합니다. 적절한 실험 조건에서하고 적절한 목표, 이것은 생체내 또는 쉽게 광범위한 체계적인 변수의 손쉬운 제어를 허용하지 않는 현장 조직 / 기관의 준비에서 이상의 장점이 될 수 있습니다. mA이 준비의 조 제한은 본질적으로 그 강점의 결과입니다. 정의함으로써, 이들 선박의 동작이 혈관 저항의 규정에 가장 중요한 참여자의 많은과 같은 신경 체액, 신진 대사 등을 포함하여 제거된 조건에서 연구되고 수사관들은 피하기 위해 오버 경고합니다 통역이 준비를 활용 수집되는 데이터의 추정. 이러한 준비에 관해서는 관심의 또 다른 중요한 영역이 같은 내피 안감이나 혈관 평활근 세포와 같은 구성 요소를 손상하는 것은 매우 쉬울 수있다는 것입니다, 오류 등 그 변수 소스를 소개하실 수 있습니다. 그것은 강력하게 개인 조사는 실험 시작시와 정기적으로 프로토콜의 과정에 걸쳐 모두, 준비의 품질을 보장​​하기위한 적절한 측정을 활용하는 것이 좋습니다.

Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

<em&gt; 예 생체내</em&gt; 준비는 혈관 vasoactive 자극에 반응하며 수동 벽 기계를 통해 기본적인 구조적 특성의 평가 모두의 심문에 대한 가장 큰 gracilis 근육 저항 arterioles의 분리에 대해 설명되어 있습니다.

예 생체내</em혈관 반응성 조사를위한> 절연 골격 Microvessel 준비

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Research

JoVE Journal

Biology

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

연구

생물학

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

마우스의 심장 수축력의 조사에 대 한 격리 유두 근육의 수축력 측정

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

은 C-FOS 단백질 면역 조직 검색 : 특정 생리적 반응에 관여 중앙 진학의 마커로서 유용한 도구<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 전의 VIVO</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

쥐 관상 동맥 혈관 평활근 세포의 분리

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

예 생체내 절연 골격 Microvessel 준비