Name: the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

Detta arbete stöddes av American Heart Association (EIA 0740129N) och NIH T32 HL90610.

1. Före experimentet <ol><li> Innan experimentet dag, glas kapillärrör av lämpliga dimensioner för stationen dras in mikropipetter (antingen en horisontell eller vertikal avdragare kan användas). Spetsen diameter kan lätt justeras beroende på fartyget isoleras, även om vi i allmänhet använder en diameter på mellan 50-150 nm. Dessa böjs sedan till lämplig konfiguration för mikrokärlsbildning stationen följande uppvärmning över en butan låga. Mikropipettspetsar är fysiskt bryts den ungefärliga diam...

<ol>
	<li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome.">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li><li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension.">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone.">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth.">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li><li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth.">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li><li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+rat+intracerebral+arterioles:+methods,+morphology,+and+reactivity.">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li><li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2.">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li><li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-(1-7)+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries.">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li><li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles.">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li><li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries.">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li><li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia.">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li><li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia.">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li><li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li><li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs.">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. s. o. l. a. t. e. d., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. 32, 435-456 (1995).</li><li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin.">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li></ol>

Protokollet presenteras beskriver isolering, avlägsnande och dubbel kanylering av en skelettmuskel mikrokärl, även om detta allmänna tekniken kan lätt appliceras på de flesta vävnader. För den aktuella manuskriptet, har termen &quot;arteriole&quot; använts av författarna för att beskriva ett motstånd fartyg på mellan 70-120 nm i diameter under vila aktivt ton, vilket också är en viktig bidragsgivare till regleringen av perfusion motstånd mot ett organ eller vävnad. Med vissa...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens och utrustning </td><td> Företaget </td><td> Kommentarer / katalog # </td></tr><tr><td> Fartyg avdelningen </td><td> Anpassad </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Uppvärmd cirkulerande vattenbad </td><td> Polyscience och Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetter </td><td> Frederick Haer &amp; Co </td><td> Kapillärrör 2,0 mm ytterdiameter x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Tryckövervakare </td><td> World Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Vattenmantlad Reservoir </td><td> Anpassad </td><td></td></tr><tr><td> Extern ljuskälla </td><td> World Precision Instruments </td><td> NovaFlex </td></tr><tr><td> Pipettera Puller </td><td> Microdata Instrument </td><td> PMP102 mikropipett Puller </td></tr><tr><td> Fullständig komplening av kirurgiska verktyg </td><td> Fina Science Tools </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultrafina Tång </td><td> Fina Science Tools </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silke suturtråd </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 eller 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo mikroskop </td><td> Olympus </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analoga Video Klavar </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Hög upplösning analog kamera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Syretanken </td><td> Regional </td><td> 21% resten kväve och 5% CO2 resten kväve </td></tr><tr><td> Slangen </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Töm Pump </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td></td></tr><tr><td> Modifierade Rat PSS </td><td> Se recept nedan </td><td></TD&gt; </tr><tr><td> Van Breemen s Relaxeringssvar PSS </td><td> Se recept nedan </td><td></td></tr></tbody></table> Tabell 1. En förteckning över de viktigaste komponenterna i isolerade mikrokärlsbildning stationsetablering presenteras i figurerna. <table border="1"><tbody><tr><td> Modifierat Råtta PSS Recept </td><td> För att göra två liter PSS </td><td> 20X Salt Stock (2L) </td><td> 20X buffertlagret (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl2-H2O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;TD&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glukos </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salt lager </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffertlagret </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destillerat vatten </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabell 2. Receptet för standard fysiologisk saltlösning (PSS) som används i de isolerade mikrokärl protokoll. Kommentarer Recept: Gör 2 liter Salt lager och 2 liter Buffertlagrets. Dessa cen kylas när den inte används, men skaka dem väl och ofta innan man förbereder PSS. De ytterligare ingredienserna tillsätts vid tiden för framställning av de slutliga PSS. <table border="1"><tbody><tr><td> Van Breemen s Relaxeringssvar PSS </td><td> För att göra 2 liter PSS </td><td> 20X Salt Stock (1L) </td><td> 20X buffertlagret (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl2-6 H2O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCOs 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTEn </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glukos </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salt lager </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffertlagret </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destillerat vatten </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabell 3. Recept för Van Breemen s relaxerande fysiologisk saltlösning (PSS) som används i de isolerade mikrokärl protokollen under förhållanden med noll aktiv ton. Kommentarer Recept: Gör 1 liter Salt Stock ennd 1 liter Buffertlagrets. Dessa kan kylas när den inte används, men skaka dem väl och ofta innan man förbereder PSS. De ytterligare ingredienserna tillsätts vid tiden för utarbetandet av de slutliga relaxerande PSS.

the ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity

Den isolerade mikrokärlsbildning Preparatet är ett ex vivo preparat som gör det möjligt för granskning av de olika bidragen från faktorer som styr fartyget diameter, och därmed perfusion motståndet 1-5. Detta är ett klassiskt experimentell beredning som var i stor utsträckning, inledningsvis beskrivs av Uchida et al. 15 flera decennier sedan. Detta inledande beskrivningen till grund för de tekniker som omfattande ändrades och förbättras, främst i laboratoriet av Dr Brian Duling vid University of Virginia 6-8, och vi presenterar en aktuell strategi på följande sidor. Detta preparat kommer särskilt hänvisa till gracilis arteriole i en råtta som mikrokärlsbildning val, men den grundläggande preparatet kan lätt tillämpas på fartyg isolerade från nästan alla andra vävnader eller organ mellan arter 9-13. Mekaniska (dvs. dimensionell) förändringar i den isolerade mikrokärl kan lätt utvärderassom svar på ett brett utbud av fysiologiska (t.ex. hypoxi, intravaskulär tryck eller skjuvning) eller farmakologiska utmaningar, och kan ge insikt i mekanistiska faktorer omfattar integrerade svar i en intakt, även om ex vivo, vävnad. Betydelsen av denna metod är att den möjliggör enkel manipulering av de faktorer på den integrerade regleringen av mikrokärlsbildning diameter, samtidigt som den tillåter kontroll av många av de bidrag från andra källor, inklusive intravaskulär tryck (myogena), autonom innervation, hemodynamisk ( t.ex. skjuvspänning) endoteliala beroende eller oberoende stimuli, hormonella och parenkyma influenser, för att ge en ofullständig lista. Under lämpliga experimentella förhållanden och med lämpliga mål kan detta tjäna som en fördel jämfört med in vivo eller in situ vävnad / organ preparat, som inte lätt låter för enkel kontroll av bredare systemiska variabler. MaJor begränsning av denna beredning är i huvudsak en följd av dess styrkor. Per definition är beteendet hos dessa fartyg som studeras under förhållanden där många av de viktigaste bidragsgivarna till regleringen av kärlmotståndet har tagits bort, bland annat neurala, humorala, metabolisk, etc. Som sådan är utredaren uppmanas att undvika över- tolkning och extrapolering av de uppgifter som samlas in använder detta preparat. Den andra signifikanta område av betydelse med hänsyn till denna beredning är att den kan vara mycket lätt att skada cellulära komponenter såsom endotelbeklädnaden eller den vaskulära glatta muskulaturen, kan sådan att inställbar källa för fel introduceras. Det rekommenderas starkt att den enskilde forskaren använder lämpliga mätningar för att säkerställa kvaliteten på beredningen, både i början av experimentet och med jämna mellanrum under hela ett protokoll.

Watch this Scientific Journal Video about The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity at JoVE.com

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Framställning beskrivs för isolering av de största motståndet gracilismuskeln arterioler för förhör av både vaskulära svar vasoaktiva stimuli och bedömningen av grundläggande strukturella egenskaper via passiv vägg mekanik.

Den Ex vivo Isolerad Skeletal mikrokärlsbildning Förberedelse för undersökning av vaskulär reaktivitet

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Research

JoVE Journal

Biology

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo Micro-cirkulation Mätning i skelettmuskel genom Intra-vitala Mikroskopi

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-medierad Knockdown Under Ex vivo Erytropoes av mänskliga hematopoetiska stamceller

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Ett system för<em&gt; Ex vivo</em&gt; Odling av embryonala Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex vivo Bedömning av kontraktilitet, fatigability och Alternans i isolerade skelettmuskler

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metod för embryonala Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

Kvantifiera Single microvessel permeabilitet i Isolerad Blod-perfusion Rat Lung Förberedelse

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Kontraktilitet Mätningar på isolerade papillarmusklerna för utredning av Cardiac inotropi hos möss

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

C-FOS Protein Immunohistological Detection: ett användbart verktyg som en markör centralbanks involverade i specifika fysiologiska reaktioner<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; Ex vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Isolering av murin Coronary vaskulära glatta muskelceller

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...