Name: investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd
Uploaded: 2012-02-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Questo lavoro è supportato anche da finanziamenti Canadian Institutes of Health Research (CIHR) e da morbo di Crohn e Colite Foundation of Canada (CCFC).

1. Modello murino di DSS-indotta colite acuta <ol><li> Aggiungi destrano sodio solfato (DSS) per l&#39;acqua potabile sterilizzati in autoclave per la concentrazione finale desiderata (1-5%) (peso / volume) (cioè per ottenere una soluzione DSS 5%, aggiungere 25 mg di polvere di DSS a 500 ml di acqua autoclavato) . Soluzione madre può essere lasciato a temperatura ambiente per un massimo di una settimana a 4 ° C fino all&#39;utilizzo. </li><li> In una cappa di biosicurezza, versare DSS soluzione madre in 50 ml prove...

<ol>
	<li>Sands, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+symptom+to+diagnosis:+clinical+distinctions+among+various+forms+of+intestinal+inflammation.">From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.</a> Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).</li><li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+inflammatory+bowel+diseases.">Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases.</a> World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium+(DSS)+induced+experimental+colitis+in+immunodeficient+mice:+effects+in+CD4(+)-cell+depleted,+athymic+and+NK-cell+depleted+SCID+mice.">Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice.</a> Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).</li><li>Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+acute+murine+dextran+sodium+sulphate+colitis:+cytokine+profile+and+dose+dependency.">Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency.</a> Digestion. 62, 240-248 (2000).</li><li>Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+acute+intestinal+inflammation+based+on+myeloperoxidase+activity.+Assessment+of+inflammation+in+rat+and+hamster+models.">Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models.</a> Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).</li><li>Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Smith, J. W., Castro, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+peroxidase+activity+in+gut+mucosa+to+inflammation.">Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation.</a> Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vagus+nerve:+a+tonic+inhibitory+influence+associated+with+inflammatory+bowel+disease+in+a+murine+model.">The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model.</a> Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).</li><li>Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice.">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).</li><li>Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dextran+sulphate+sodium+(DSS)+model+of+colitis:+an+overview.">The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview.</a> Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).</li><li>Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).</li><li>Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+resident+intestinal+flora+in+acute+and+chronic+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+in+mice.">The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice.</a> Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).</li><li>Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+subsets+of+enteric+bacteria+induce+and+perpetuate+experimental+colitis+in+rats+and+mice.">Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice.</a> Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).</li><li>Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+has+a+key+role+in+pathogenesis+of+experimental+colitis.">Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis.</a> Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).</li><li>Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hapten-induced+model+of+murine+inflammatory+bowel+disease:+mucosa+immune+responses+and+protection+by+tolerance.">Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance.</a> J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).</li><li>Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+occurs+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice.</a> Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).</li></ol>

DSS colite è un modello ampiamente utilizzato indotto chimicamente di infiammazione intestinale. In questo modello, i topi sono fornite di acqua potabile integrato con DSS, che è pensato per essere tossico per le cellule epiteliali intestinali e danneggiare l&#39;integrità della barriera mucosale. 10 La somministrazione di DSS induce una colite acuta, che è caratterizzata da feci molli, sanguinamento fecale, e infiltrazione con granulociti. DSS 10 Durante l&#39;amministrazione, la colite è di ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente / apparecchiatura: </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Eppendorf Safe-Lock provetta (2 ml) </td><td> eppendorf </td><td> 0030 120.094 </td><td></td></tr><tr><td> Biotek EL808 Assorbanza lettore di piastre </td><td> Biotek </td><td> EL808 </td><td></td></tr><tr><td> Destrano solfato di sodio per reagenti sale (peso molecolare 36,000-50,000 Da) </td><td> MP Biomedicals </td><td> 160110 </td><td></td></tr><tr><td> Gen 5 (software) </td><td> Biotek </td><td> Versione 1.10.8 </td><td></td></tr><tr><td> Esadeciltrimetilammonio bromuro (HTAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H5882-100G </td><td></td></tr><tr><td> Perossido di idrogeno, il 30 wt.% Soluzione in acqua </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 216763 </td><td> Conservare a 2-8 ° C </td></tr><tr><td> Microtest plmangiava da 96 pozzetti fondo piatto </td><td> Sarstedt </td><td> 82,1581 </td><td> Da utilizzare una sola </td></tr><tr><td> o-dianisidina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D-3252 </td><td> Sensibile alla luce. Conservare a 2-8 ° C </td></tr><tr><td> Fosfato di potassio dibasico </td><td> Caledon </td><td> 6620-1 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfato di potassio, monobasico </td><td> EMD chimici </td><td> PX1565-1 </td><td></td></tr><tr><td> Inibitori della proteasi cocktail </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8340 </td><td> Conservare a -20 ° C </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> Tungsteno perline in metallo duro per Tissue Lyser II </td><td> QUIAGEN </td><td> 69997 </td><td></td></tr></tbody></table>

investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd

La malattia infiammatoria intestinale (IBD) comprende una vasta gamma di patologie intestinali, le più comuni delle quali sono la colite ulcerosa (UC) e la malattia di Crohn (CD). Entrambe le UC e CD, quando presenti nel colon, generare un profilo simile sintomo che può comprendere diarrea, sanguinamento rettale, dolore addominale e perdita di peso. 1 Sebbene la patogenesi della malattia infiammatoria intestinale rimane sconosciuta, è descritto come una malattia multifattoriale che coinvolge sia componenti genetiche e ambientali 2. Ci sono modelli animali numerosi e variabili di infiammazione del colon che assomigliano a diverse caratteristiche di IBD. Modelli animali di colite gamma da quelli che nascono spontaneamente in ceppi sensibili di alcune specie a quelli che richiedono la somministrazione di concentrazioni specifiche di colite che inducono prodotti chimici, come il sodio destrano solfato (DSS). Chimica indotta modelli di infiammazione dell&#39;intestino sono i modelli più comunemente utilizzati e meglio descritta di IBD. ADMINIdimostrazione di DSS in acqua potabile produce colite acuta o cronica a seconda del protocollo di amministrazione 3. Animali dato DSS perdita di peso e mostrano segni di feci molli o diarrea, a volte con evidenza di sanguinamento rettale. 4,5 Qui si descrivono le modalità con cui sviluppo colite e la risposta infiammatoria risultante può essere definita dopo la somministrazione di DSS. Questi metodi includono l&#39;analisi istologica di ematossilina / eosina sezioni del colon macchiato, la misurazione di citochine pro-infiammatorie, e la determinazione della mieloperossidasi (MPO) attività, che può essere utilizzato come marker surrogato di infiammazione 6. L&#39;entità della risposta infiammatoria in stato di malattia può essere valutata la presenza di sintomi clinici o alterazioni istologiche nel tessuto della mucosa. Colon danno istologico viene valutata utilizzando un sistema di punteggio che considera la perdita di architettura cripta, infiltrazione di cellule infiammatorie, muscolari tascesso hickening, deplezione delle cellule caliciformi, e la cripta. 7 Quantitativamente, i livelli di citochine pro-infiammatorie acute con proprietà antinfiammatorie, come l&#39;interleuchina (IL)-1β, IL-6 e fattore di necrosi tumorale (TNF)-α, si può determinare con ELISA metodi convenzionali. Inoltre, l&#39;attività MPO può essere misurata mediante un saggio colorimetrico e utilizzato come un indice di infiammazione 8. Nella colite sperimentale, la gravità della malattia è spesso correlato con un aumento dell&#39;attività MPO e più elevati livelli di citochine pro-infiammatorie. Gravità colite e l&#39;infiammazione associati danno può essere valutata esaminando la consistenza delle feci e sanguinamento, oltre a valutare lo stato istopatologici dell&#39;intestino con ematossilina / eosina sezioni colorate di tessuto del colon. Frammenti di tessuto del colon può essere utilizzato per determinare l&#39;attività MPO e produzione di citochine. Nel loro insieme, queste misure possono essere utilizzate per valutare la risposta infiammatoria intestinalemodelli animali di colite sperimentale.

Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Modelli sperimentali di malattia infiammatoria intestinale, ci hanno permesso di esaminare il complesso di risposte innate e adattative immunitario associate con patogenesi. Utilizzando il punteggio istologico, la quantificazione di citochine pro-infiammatorie e di attività mieloperossidasi, si può cominciare a valutare queste risposte visto nella malattia infiammatoria intestinale.

Indagare infiammazione intestinale in DSS-indotta Modello di IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Research

JoVE Journal

Biology

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Cateterismo delle anse intestinali nei ruminanti

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Ricerca

Biologia

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Rat Esteriorizzazione mesentere: un modello per indagare le dinamiche cellulari coinvolti nell&#39;angiogenesi

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Indagare le proteine ​​prioniche-come diffusione e tossicità di utilizzare i metazoi Organismo modello<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Un protocollo per lentivirali trasduzione e analisi valle di intestinale organoidi

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Un modello murino di ostruzione intestinale parziale

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Analisi della spettrometria di massa per identificare l'ubiquilazione del CENP-A con tag EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Organoid-Derived Epithelial Monolayer: A Clinically Relevant In Vitro Model for Intestinal Barrier Function

Monostrato epiteliale derivato da organoidi: un modello in vitro clinicamente rilevante per la funzione di barriera intestinale

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations ...

Intestinal Epithelial Regeneration in Response to Ionizing Irradiation

Rigenerazione epiteliale intestinale in risposta all'irradiazione ionizzante

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the ...

Epithelial Effects of Intestinal Inflammation on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids (Video) | JoVE 

Studiare gli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini accertati

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...

Construction of a 3D Intestinal Mucosa Model with Paraffin Embedding

Basic Three-Dimensional (3D) Intestinal Model System with an Immune Component

Investigating the Effects of Compounds on Intestinal Tissue Using 3D Human Cell Line Models (Video) | JoVE

Sistema modello intestinale tridimensionale (3D) di base con una componente immunitaria

There has been an increase in the use of in vivo and in vitro intestinal models to study the pathophysiology of inflammatory intestinal diseases, for the ...