Name: investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd
Uploaded: 2012-02-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Dette arbeidet er støttet med tilskudd fra Canadian Institutes of Health Research (CIHR) og ved Crohns og kolitt Foundation of Canada (CCFC).

1. Murine modell av DSS-indusert akutt kolitt <ol><li> Legg dekstransulfat sodium (DSS) til autoklaveres drikkevann til ønsket endelig konsentrasjon (1-5%) (wt / vol) (dvs. å gjøre en 5% DSS løsning, legge til 25 mg DSS pulver til 500 ml autoklaveres vann) . Stock løsningen kan stå i romtemperatur i opptil én uke eller ved 4 ° C inntil bruk. </li><li> I en biosikkerhet hette, hell lager DSS løsning i 50 ml Falcon rør (en nødvendig per bur). Hold stamløsning å fylle rørene når det trengs. </li><li> Ersta...

<ol>
	<li>Sands, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+symptom+to+diagnosis:+clinical+distinctions+among+various+forms+of+intestinal+inflammation.">From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.</a> Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).</li><li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+inflammatory+bowel+diseases.">Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases.</a> World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium+(DSS)+induced+experimental+colitis+in+immunodeficient+mice:+effects+in+CD4(+)-cell+depleted,+athymic+and+NK-cell+depleted+SCID+mice.">Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice.</a> Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).</li><li>Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+acute+murine+dextran+sodium+sulphate+colitis:+cytokine+profile+and+dose+dependency.">Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency.</a> Digestion. 62, 240-248 (2000).</li><li>Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+acute+intestinal+inflammation+based+on+myeloperoxidase+activity.+Assessment+of+inflammation+in+rat+and+hamster+models.">Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models.</a> Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).</li><li>Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Smith, J. W., Castro, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+peroxidase+activity+in+gut+mucosa+to+inflammation.">Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation.</a> Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vagus+nerve:+a+tonic+inhibitory+influence+associated+with+inflammatory+bowel+disease+in+a+murine+model.">The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model.</a> Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).</li><li>Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice.">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).</li><li>Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dextran+sulphate+sodium+(DSS)+model+of+colitis:+an+overview.">The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview.</a> Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).</li><li>Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).</li><li>Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+resident+intestinal+flora+in+acute+and+chronic+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+in+mice.">The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice.</a> Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).</li><li>Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+subsets+of+enteric+bacteria+induce+and+perpetuate+experimental+colitis+in+rats+and+mice.">Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice.</a> Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).</li><li>Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+has+a+key+role+in+pathogenesis+of+experimental+colitis.">Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis.</a> Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).</li><li>Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hapten-induced+model+of+murine+inflammatory+bowel+disease:+mucosa+immune+responses+and+protection+by+tolerance.">Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance.</a> J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).</li><li>Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+occurs+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice.</a> Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).</li></ol>

DSS kolitt er en mye brukt kjemisk indusert modell av intestinal inflammasjon. I denne modellen er mus som fikk drikkevann supplert med DSS, som antas å være giftig for gut epitelceller og forstyrre integriteten til mucosal barriere. 10 Administrasjon av DSS induserer en akutt kolitt som er preget av løs avføring, fecal blødning, og infiltrasjon med granulocytter. 10 Under DSS administrasjon er kolitt vanligvis forbundet med betydelig vekttap og tilstedeværelse av blod i avføringen, noe som ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens / utstyr: </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Eppendorf Safe-Lock mikrosentrifuge Tube (2ml) </td><td> Eppendorf </td><td> 0030 120.094 </td><td></td></tr><tr><td> BioTek EL808 Absorbans plateavleseren </td><td> BioTek </td><td> EL808 </td><td></td></tr><tr><td> Dekstransulfat natrium salt reagent grade (molekylvekt 36,000-50,000 Da) </td><td> MP Biomedicals </td><td> 160110 </td><td></td></tr><tr><td> Gen5 (programvare) </td><td> BioTek </td><td> Versjon 1.10.8 </td><td></td></tr><tr><td> Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H5882-100G </td><td></td></tr><tr><td> Hydrogen peroxide, 30 wt.% Løsning i vann </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 216763 </td><td> Oppbevar ved 2-8 ° C </td></tr><tr><td> MICROTEST plspiste 96-godt flat bunn </td><td> Sarstedt </td><td> 82.1581 </td><td> For engangsbruk </td></tr><tr><td> o-Dianisidine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D-3252 </td><td> Lys sensitive. Oppbevar ved 2-8 ° C </td></tr><tr><td> Kalium fosfat, dibasic </td><td> Caledon </td><td> 6620-1 </td><td></td></tr><tr><td> Kalium fosfat, monobasic </td><td> EMD Kjemikalier </td><td> PX1565-1 </td><td></td></tr><tr><td> Proteasehemmer cocktail </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8340 </td><td> Oppbevar ved -20 ° C </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> Tungsten Carbide perler for Tissue elektrolysør II </td><td> QUIAGEN </td><td> 69997 </td><td></td></tr></tbody></table>

investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd

Inflammatorisk tarmsykdom (IBD) omfatter et utvalg av intestinal patologi, den vanligste av disse er ulcerøs kolitt (UC) og Crohns sykdom (CD). Både UC og CD, når den er tilstede i tykktarmen, generere et lignende symptom profil som kan inkludere diaré, endetarms blødning, magesmerter og vekttap. 1 Selv om patogenesen av IBD er fortsatt ukjent, er det beskrevet som en multifaktoriell sykdom som innebærer både genetiske og miljømessige komponenter. 2 Det finnes mange og variable dyremodeller av colonic betennelse som ligner flere funksjoner av IBD. Dyremodeller av kolitt spenner fra dem som oppstår spontant hos følsomme stammer av enkelte arter til de som krever tilførsel av bestemte konsentrasjoner av kolitt-induserende kjemikalier, for eksempel dekstransulfat sodium (DSS). Kjemisk-indusert modeller av gut betennelse er de mest brukte og best beskrives modeller av IBD. AdminiStatens vegvesen av DSS i drikkevann produserer akutt eller kronisk kolitt, avhengig av administrasjonen protokollen. 3 Dyr gitt DSS utstilling vekttap og tegn på løs avføring eller diaré, noen ganger med bevis på endetarms blødning. 4,5 Her beskriver vi de metoder som kolitt utvikling og den resulterende inflammatoriske responsen kan karakteriseres etter administrasjon av DSS. Disse metodene inkluderer Histologisk analyse av hematoxylin / eosin fargede colon seksjoner, måling av proinflammatoriske cytokiner, og bestemmelse av myeloperoxidase (MPO) aktivitet, som kan brukes som et surrogat markør for betennelse. 6 Omfanget av den inflammatoriske responsen i sykdom tilstand kan vurderes ved tilstedeværelse av kliniske symptomer eller ved endring i histologi i mucosal vev. Colonic histologiske skaden blir vurdert ved hjelp av en scoring system som vurderer tap av krypten arkitektur, inflammatorisk celle infiltrasjon, muskel thickening, beger celle uttømming, og krypten abscess. syv kvantitativt, kan nivået av proinflammatoriske cytokiner med akutte inflammatoriske egenskaper, for eksempel interleukin (IL)-1β, IL-6 og tumor nekrose faktor (TNF)-α, kan bestemmes ved hjelp konvensjonelle ELISA metoder. I tillegg kan MPO aktiviteten måles ved hjelp av en kolorimetrisk analyse og brukes som en indeks på betennelse. 8 I eksperimentell kolitt, er sykdommens alvorlighetsgrad ofte korrelert med en økning i MPO aktivitet og høyere nivåer av proinflammatoriske cytokiner. Kolitt alvorlighetsgrad og betennelse-assosiert skade kan vurderes ved å undersøke avføring konsistens og blødning, i tillegg til å vurdere histopatologiske tilstand av tarmen med hematoxylin / eosin fargede colonic vev seksjoner. Colonic vev fragmenter kan brukes til å bestemme MPO aktivitet og cytokin produksjon. Til sammen kan disse tiltakene brukes til å evaluere intestinal betennelsesreaksjon idyremodeller av eksperimentell kolitt.

Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Eksperimentelle modeller av inflammatorisk tarmsykdom har tillatt oss å undersøke det komplekse medfødte og adaptive immunresponser assosiert med patogenesen. Ved hjelp av histologiske scoring, kvantifisering av proinflammatoriske cytokiner og myeloperoxidase aktivitet, kan man begynne å vurdere disse svarene sett i inflammatorisk tarmsykdom.

Gransker Intestinal Betennelse i DSS-indusert Modell av IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Research

JoVE Journal

Biology

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Rat mesenteriet Exteriorization: En modell for å undersøke de cellulære dynamikken i Angiogenese

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Gransker spredning og Toxicity of prion-lignende Proteiner Bruke metazoan modellorganisme<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

En protokoll for Lentiviral Transduksjon og Nedstrøms Analyse av Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musemodell av Intestinal delvis hindringer

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Massespektrometrianalyse for å identifisere Ubiquitylation av EYFP-merket CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Organoid-Derived Epithelial Monolayer: A Clinically Relevant In Vitro Model for Intestinal Barrier Function

Organoid-avledet epitelmonolayer: En klinisk relevant in vitro-modell for tarmbarrierefunksjon

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations ...

Intestinal Epithelial Regeneration in Response to Ionizing Irradiation

Intestinal epitelial regenerering som respons på ioniserende bestråling

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the ...

Epithelial Effects of Intestinal Inflammation on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids (Video) | JoVE 

Studere epiteleffekter av tarmbetennelse in vitro på etablerte murinkolonoider

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...

Construction of a 3D Intestinal Mucosa Model with Paraffin Embedding

Basic Three-Dimensional (3D) Intestinal Model System with an Immune Component

Investigating the Effects of Compounds on Intestinal Tissue Using 3D Human Cell Line Models (Video) | JoVE

Grunnleggende tredimensjonalt (3D) tarmmodellsystem med en immunkomponent

There has been an increase in the use of in vivo and in vitro intestinal models to study the pathophysiology of inflammatory intestinal diseases, for the ...