Name: investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd
Uploaded: 2012-02-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Detta arbete stöds av bidrag från kanadensiska Institutes of Health Research (CIHR) och Crohns och Colitis Foundation of Canada (CCFC).

1. Murina modell av DSS-inducerad akut kolit <ol><li> Lägg dextransulfat natrium (DSS) för att autoklaveras dricksvatten till önskad slutliga koncentrationen (1-5%) (vikt / vol) (dvs att göra en 5% DSS lösning tillsätts 25 mg DSS pulver till 500 ml autoklaveras vatten) . Stamlösning kan lämnas i rumstemperatur i upp till en vecka eller vid 4 ° C fram till användning. </li><li> I en biosäkerhet huva, häll lösningen lager DSS i 50 ml Falcon rör (ett behov per bur). Håll stamlösning för att fylla rören ...

<ol>
	<li>Sands, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+symptom+to+diagnosis:+clinical+distinctions+among+various+forms+of+intestinal+inflammation.">From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.</a> Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).</li><li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+inflammatory+bowel+diseases.">Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases.</a> World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium+(DSS)+induced+experimental+colitis+in+immunodeficient+mice:+effects+in+CD4(+)-cell+depleted,+athymic+and+NK-cell+depleted+SCID+mice.">Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice.</a> Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).</li><li>Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+acute+murine+dextran+sodium+sulphate+colitis:+cytokine+profile+and+dose+dependency.">Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency.</a> Digestion. 62, 240-248 (2000).</li><li>Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+acute+intestinal+inflammation+based+on+myeloperoxidase+activity.+Assessment+of+inflammation+in+rat+and+hamster+models.">Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models.</a> Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).</li><li>Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Smith, J. W., Castro, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+peroxidase+activity+in+gut+mucosa+to+inflammation.">Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation.</a> Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vagus+nerve:+a+tonic+inhibitory+influence+associated+with+inflammatory+bowel+disease+in+a+murine+model.">The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model.</a> Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).</li><li>Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice.">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).</li><li>Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dextran+sulphate+sodium+(DSS)+model+of+colitis:+an+overview.">The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview.</a> Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).</li><li>Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).</li><li>Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+resident+intestinal+flora+in+acute+and+chronic+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+in+mice.">The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice.</a> Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).</li><li>Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+subsets+of+enteric+bacteria+induce+and+perpetuate+experimental+colitis+in+rats+and+mice.">Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice.</a> Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).</li><li>Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+has+a+key+role+in+pathogenesis+of+experimental+colitis.">Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis.</a> Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).</li><li>Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hapten-induced+model+of+murine+inflammatory+bowel+disease:+mucosa+immune+responses+and+protection+by+tolerance.">Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance.</a> J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).</li><li>Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+occurs+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice.</a> Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).</li></ol>

DSS kolit är en allmänt använd kemiskt inducerad modell av tarminflammation. I denna modell är möss som fick dricksvatten kompletteras med DSS, som tros vara giftiga för tarmen epitelceller och störa integritet slemhinnor barriären. 10 Administrering av DSS framkallar en akut kolit som kännetecknas av lös avföring, avföring blödning, och infiltration med granulocyter. 10 Under DSS administrering kolit vanligtvis förknippas med betydande viktminskning och förekomst av blod i avföring...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens / utrustning: </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Eppendorf Safe-Lock mikrocentrifugrör (2 ml) </td><td> Eppendorf </td><td> 0030 120.094 </td><td></td></tr><tr><td> Biotek EL808 Absorbans plattläsarens </td><td> Biotek </td><td> EL808 </td><td></td></tr><tr><td> Dextransulfat natriumsalt reagenskvalitet (molekylvikt 36,000-50,000 Da) </td><td> MP Biomedicals </td><td> 160.110 </td><td></td></tr><tr><td> Gen5 (mjukvara) </td><td> Biotek </td><td> Version 1.10.8 </td><td></td></tr><tr><td> Hexadecyltrimethylammonium bromid (HTAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H5882-100G </td><td></td></tr><tr><td> Väteperoxid, 30 wt.% Lösning i vatten </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 216.763 </td><td> Förvaras vid 2-8 ° C </td></tr><tr><td> Mikrotiterplattan plåt 96-bra plan botten </td><td> Sarstedt </td><td> 82,1581 </td><td> Endast för engångsbruk </td></tr><tr><td> o-Dianisidine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D-3252 </td><td> Ljuskänsliga. Förvaras vid 2-8 ° C </td></tr><tr><td> Kaliumfosfat, dibasiskt </td><td> Caledon </td><td> 6620-1 </td><td></td></tr><tr><td> Kaliumfosfat, enbasiskt </td><td> EMD Kemikalier </td><td> PX1565-1 </td><td></td></tr><tr><td> Proteashämmare cocktail </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8340 </td><td> Förvara vid -20 ° C </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> Tungsten Carbide pärlor för Mjukpapper lyser II </td><td> QUIAGEN </td><td> 69.997 </td><td></td></tr></tbody></table>

investigating intestinal inflammation in dss-induced model of ibd

Inflammatorisk tarmsjukdom (IBD) omfattar en rad tarm sjukdomar, den vanligaste av dessa är ulcerös kolit (UC) och Crohns sjukdom (CD). Både UC och CD, när de förekommer i tjocktarmen, generera en liknande symptom profil som kan innefatta diarré, rektal blödning, buksmärtor och viktnedgång. 1 Även om patogenesen för IBD är okänd, är det beskrivs som en multifaktoriell sjukdom som innebär både genetiska och miljömässiga komponenter. 2 Det finns många och varierande djurmodeller av kolon inflammation som liknar flera funktioner i IBD. Djurmodeller av kolit varierar från dem som uppstår spontant hos känsliga stammar av vissa arter som kräver tillförsel av vissa koncentrationer av kolit-inducerande ämnen, som t.ex. dextransulfat natrium (DSS). Kemisk-inducerad modeller av tarmen inflammation är de vanligaste och bäst beskrivna modeller av IBD. Administrastration av DSS i dricksvatten med akut eller kronisk kolit, beroende på förvaltningen protokollet. 3 djur som fått DSS uppvisar viktnedgång och tecken på lös avföring eller diarré, ibland med tecken på blödning. 4,5 Här beskriver vi de metoder som kolit utveckling och den resulterande inflammatorisk reaktion kan karakteriseras efter administrering av DSS. Dessa metoder omfattar histologiska analysen av hematoxylin / eosin färgade kolon delar, mätning av proinflammatoriska cytokiner och bestämning av myeloperoxidas (MPO) aktivitet, som kan användas som ett surrogat markör för inflammation. 6 Omfattningen av det inflammatoriska svaret i sjukdomstillstånd kan bedömas genom förekomsten av kliniska symtom eller genom förändring i histologi i slemhinne. Kolon histologiska skador bedöms med hjälp av ett poängsystem som anser förlusten av kryptan arkitektur, inflammatorisk cell infiltration, muskel thickening, bägare cellbristen och krypta abscess. 7 Kvantitativt sett kan nivåerna av proinflammatoriska cytokiner med akuta inflammatoriska egenskaper, såsom interleukin (IL)-1β, IL-6 och tumor necrosis factor (TNF)-α, bestämmas med hjälp konventionell ELISA-metoder. Dessutom kan MPO aktivitet mätas med hjälp av en kolorimetrisk analys och användas som ett index på inflammation. 8 I experimentella kolit är sjukdomens svårighetsgrad ofta korrelerade med en ökning av MPO-aktivitet och högre nivåer av proinflammatoriska cytokiner. Kolit svårighetsgrad och inflammation-associerade skador kan bedömas genom att undersöka avföringen konsistens och blödning, förutom att bedöma histopatologiska tillståndet i tarmen med hjälp av hematoxylin / eosin färgade kolon vävnadssnitt. Kolon vävnad fragment kan användas för att bestämma MPO aktivitet och cytokin produktion. Sammantaget kan dessa åtgärder användas för att utvärdera den intestinala inflammatorisk reaktion idjurmodeller av experimentell kolit.

Watch this Scientific Journal Video about Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD at JoVE.com

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Experimentella modeller för inflammatoriska tarmsjukdomar har tillåtit oss att undersöka de komplexa medfödda och adaptiva immunsvaret i samband med patogenes. Använda histologisk scoring, kvantifiering av proinflammatoriska cytokiner och myeloperoxidas aktivitet, kan man börja utvärdera dessa svar ses vid inflammatorisk tarmsjukdom.

Undersöka tarminflammation i DSS-inducerad modell av IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Research

JoVE Journal

Biology

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Kateterisering av intestinal loopar hos idisslare

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Rat krös exteriorisering: En modell för utredning av de cellulära Dynamics inblandade i angiogenes

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Undersöka spridning och toxicitet Prion-liknande proteiner Använda metazoan Model Organism<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Ett protokoll för Lentiviral Transduction och Nedströms Analys av Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musmodell av partiell tarmobstruktion

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Masspektrometri analys för att identifiera Ubiquitylation av EYFP-märkt CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Organoid-Derived Epithelial Monolayer: A Clinically Relevant In Vitro Model for Intestinal Barrier Function

Organoid-härledd epitelial monolager: En kliniskt relevant in vitro-modell för tarmbarriärfunktion

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations ...

Intestinal Epithelial Regeneration in Response to Ionizing Irradiation

Intestinal epitelregenerering som svar på joniserande bestrålning

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the ...

Epithelial Effects of Intestinal Inflammation on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids (Video) | JoVE 

Studera epiteleffekterna av tarminflammation in vitro på etablerade murina kolonioider

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...

Construction of a 3D Intestinal Mucosa Model with Paraffin Embedding

Basic Three-Dimensional (3D) Intestinal Model System with an Immune Component

Investigating the Effects of Compounds on Intestinal Tissue Using 3D Human Cell Line Models (Video) | JoVE

Grundläggande tredimensionellt (3D) tarmmodellsystem med en immunkomponent

There has been an increase in the use of in vivo and in vitro intestinal models to study the pathophysiology of inflammatory intestinal diseases, for the ...