Name: preparing individual drosophila egg chambers for live imaging
Uploaded: 2012-02-27T13:00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل الزمالة ويلكوم ترست باحث أول لديفيس أولا.

<ol>
	<li>Arias, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+and+the+development+of+biology+in+the+20th+century.">Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century.</a> Methods Mol. Biol. 420, 1-25 (2008).</li><li>Parton, R. M., Valles, A. -. M., Dobbie, I. D., Davis, I., Goldman, R. D., Swedlow, J. R., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Limits+of+Live+Cell+Imaging+in+Drosophila.">Pushing the Limits of Live Cell Imaging in Drosophila.</a> Live Cell Imaging: A Laboratory. , 387-418 (2010).</li><li>Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+messages:+the+intracellular+localization+of+mRNAs.">Moving messages: the intracellular localization of mRNAs.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6 (5), 363-375 (2005).</li><li>Jansen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA+Localization:+Message+on+the+Move.">mRNA Localization: Message on the Move.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 247-256 (2001).</li><li>Van De Bor, V., Hartswood, E., Jones, C., Finnegan, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gurken+and+the+I+factor+retrotransposon+RNAs+share+common+localization+signals+and+machinery.">gurken and the I factor retrotransposon RNAs share common localization signals and machinery.</a> Dev. Cell. 9 (1), 51-62 (2005).</li><li>Delanoue, R., Herpers, B., Soetaert, J., Davis, I., Rabouille, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Squid&#47;hnRNP+helps+Dynein+switch+from+a+gurken+mRNA+transport+motor+to+an+ultrastructural+static+anchor+in+sponge+bodies.">Drosophila Squid&#47;hnRNP helps Dynein switch from a gurken mRNA transport motor to an ultrastructural static anchor in sponge bodies.</a> Dev. Cell. 13 (4), 523-538 (2007).</li><li>Jaramillo, A. M., Weil, T. T., Goodhouse, J., Gavis, E. R., Schupbach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+fluorescently+labeled+endogenous+gurken+mRNA+in+Drosophila.">The dynamics of fluorescently labeled endogenous gurken mRNA in Drosophila.</a> J. Cell. Sci. 121 (Pt. 6), 887-894 (2008).</li><li>Forrest, K. M., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+endogenous+mRNA+reveals+a+diffusion+and+entrapment+mechanism+for+nanos+mRNA+localization+in+Drosophila.">Live imaging of endogenous mRNA reveals a diffusion and entrapment mechanism for nanos mRNA localization in Drosophila.</a> Curr. Biol. 13, 1159-1168 (2003).</li><li>Bertrand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+ASH1+mRNA+particles+in+living+yeast.">Localization of ASH1 mRNA particles in living yeast.</a> Mol. Cell. 2 (4), 437-445 (1998).</li><li>Spradling, A. C., Bate, M., Martinez-Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+genetics+of+oogenesis.">Developmental genetics of oogenesis.</a> The Development of Drosophila melanogaster. 1, 1-70 (1993).</li><li>MacDougall, N., Clark, A., MacDougall, E., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+gurken+(TGFalpha)+mRNA+localizes+as+particles+that+move+within+the+oocyte+in+two+dynein-dependent+steps.">Drosophila gurken (TGFalpha) mRNA localizes as particles that move within the oocyte in two dynein-dependent steps.</a> Dev. Cell. 4 (3), 307-319 (2003).</li><li>Tekotte, H., Tollervey, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+migrating+border+cell+cluster+in+living+Drosophila+egg+chambers.">Imaging the migrating border cell cluster in living Drosophila egg chambers.</a> Dev. Dyn. 236 (10), 2818-2824 (2007).</li><li>Weil, T. T., Parton, R., Davis, I., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+bicoid+mRNA+anchoring+highlight+conserved+mechanisms+during+the+oocyte-to-embryo+transition.">Changes in bicoid mRNA anchoring highlight conserved mechanisms during the oocyte-to-embryo transition.</a> Curr. Biol. 18, 1055-1061 (2008).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Morris, L. X., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+live+imaging+provides+new+insight+into+stem+cell+regulation+and+germline-soma+coordination+in+the+Drosophila+ovary.">Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary.</a> Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).</li></ol>

ليس لدينا ما يكشف.

<html> حي التصوير الخلية هو فحص قوي لفحص العمليات الخلوية في الوقت الحقيقي. بالإضافة إلى المراقبة الميدانية بسيط مشرق، وبالإضافة إلى ذلك من تسميات فلوري إلى RNAs والبروتينات والاهتمام قد يؤدي إلى اختراقات كثيرة. هنا وقد أوجزنا بروتوكول للالبويضات التصوير المعيشة الفردية التي يمكن استخدامها في تركيبة مع فحوصات الجينية والبيوكيميائية. في هذا البروتوكول، ونحن أيضا شرح كيفية التعامل مع التجربة الحية البويضات عن طريق الحقن. هناك احتمالات كثيرة للمادة لحقن، بما في ذلك في المختبر توليفها فلوري الحمض النووي الريبي وصفت لفحص قدرة هيكل الثانوي لتوطين RNA مباشرة (الكرة وديفيس، غير منشورة)، والأجسام المضادة التي تمنع وظيفة من البروتينات 6. والعمل في المستقبل على الارجح ادخال مكونات غيرها من العلامات والآلات الخلوية إلى البويضات المعيشة مما يمكن اختبار الآليات الجزيئية. تي &quot;&gt; الحفاظ على سلامة وصحة الأنسجة أمر ضروري عند العمل مع الخلايا الحية. في هذا البروتوكول، ونحن نشير إلى عدد من الخطوات التي يمكن أن تؤدي إلى الإجهاد للغرفة البيض. على سبيل المثال، على الرغم من كونها متفوقة النفط للتصوير، يمكن للثقافة موسعة في مجال النفط أن تؤدي إلى التأكيد على غرفة بيضة. هذا يمكن رصدها بسهولة في ظل التعرض لمجال مشرق من خلال دراسة مورفولوجية النووية والموقف، وغشاء الخلية البيضية التي من شأنها أن تشوه وفقاعة تحت الضغط (قارن 7E الشكل (بهيج) لFigure7F ( وأكد)). المرحلة غرف بيضة 9 مشاهدة RNA الترجمة والحدود هجرة الخلية أكثر من 12 ساعات عدة. ومع ذلك، فإن مرحلة 7/8 غرفة بيضة ستبدأ في معرض الآثار السيئة في مجال النفط الكربون هالة بعد نحو 40 دقيقة من المبيض يتم إزالتها من ويمكن للإناث. بيضة في المرحلة المتأخرة الغرف، المرحلة 11 إلى 14 تتطور بشكل طبيعي سواء في النفط أو وسائل الإعلام مائي بسبب إفراز قشرة البيضة من الخلايا المسام في هذه المراحل 13. لقد كان الريبوrted أن إضافة الأنسولين والمتوسطة الحشرات المائية قادرة على المحافظة على مرحلة 9 البويضات لمدة تصل الى 6 ساعات 14 و germaria تصل إلى 14 ساعات و 15. في جميع الحالات، ينبغي تجنب المناورات العدوانية للغرفة البيض، كما أنه يؤكد على البويضات ويقلل من قدرتها على البقاء. التصوير أقل من البيض وغرف العناية لعلاج كل واحد بلطف أفضل وسيلة لضمان بقاء الأمثل.

وينبغي أن الأدوات المستخدمة في تشريح تكون نظيفة ولكن لا يجب أن تعقم. مسح الأدوات مع ETOH والسماح لهم لتجف قبل البداية. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> غرامة فرشاة الدهان الرؤوس (فنانون السمور، جولة، حجم 00 أو 0) </td><td> متاح من معظم وسائل الفن الامدادات </td><td></td><td> فرشاة ذات نوعية جيدة من المهم </td></tr><tr><td> الهالوكربون منتجات الشركة، السلسلة 95 </td><td> الهالوكربون منتجات شركة، 887 Kinderkamack الطريق، نهر حافة NJ 07661 </td><td></td><td> الأوروبي الموزع: شركة فرنسة سولاوادي (شركة محدودة) تأكد من الأوكسجين من قبل فقاعات الهواء عن طريق النفط. </td></tr><tr><td> تغطية زلة لا. 1.5، 22 خ 50mm </td><td> دولي NO1-VWR القطة = 631-0137-22-50mm </td><td> منزل، جلاسر-22-40mm-400-070T MNJ </td><td></td></tr><tr><td> دومون No.5 - Dumostar </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 11253-20 </td><td> &quot;البيولوجيا&quot; معلومات سرية هي أيضا جيدة لكنها هشة أكثر </td></tr><tr><td> تشريح مسبار </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 10140-01 </td><td></td></tr><tr><td> تشريح المجهر </td><td> أوليمبوس </td><td> SZ61 </td><td></td></tr><tr><td> CO2 وسادة </td><td> متاح من خلال <a href="http://www.flystuff.com">http://www.flystuff.com</a> / (A تقسيم العلمية جينيسي) </td><td> 59-114 (789060 Dutscher) </td><td> الأوروبي الموزع: على شبكة الاتصالات العالمية. dutscherscientific. com</a> / كما أنه من السهل نسبيا على مخصصة لبناء منصات الخاص ذبابة الخاصة </td></tr><tr><td> KimCare </td><td> Kimbery كلارك، KimCare-الطبية مناديل </td><td> KLEW3020 </td><td></td></tr><tr><td> مجهر DeltaVision </td><td> التطبيقية الدقة </td><td> DC-CORE </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> Micromanipulators بيرلي من التجويف شركة مجموعة حيوية. 2260 Argentia الطريق، ميسيسوجا، أونتاريو، كندا L5N 6H7 </td><td> بيرلي PCS-5000 سلسلة، TS-5000-300 </td><td> <a href="http://www.ldgi-burleigh.com">http://www.ldgi-burleigh.com</a> / (Exfo سابقا) </td></tr><tr><td> جهاز حقن </td><td> Tritech أبحاث، وشركة 2961 المخضرم افي لوس انجليس، كاليفورنيا 90064 </td><td> MINJ-1 </td><td> تعديل مع حامل لاتخاذ إيبندورف Femptotips </td></tr><tr><td> حقن إبرة </td><td> إيبندورف العقيمة Femtotips الأول والثاني </td><td> 930000043 </td><td> نصائح مختلفة هي أفضل لتطبيقات مختلفة </td></tr><tr><td> تحميل نصائح 20μl </td><td> إيبندورف </td><td> 5242956.003 </td><td></td></tr><tr><td> نشط خميرة جافة </td><td> فلايشمان الخميرة </td><td> # 2192 </td><td></td></tr></tbody></table>

preparing individual drosophila egg chambers for live imaging

حي التصوير الخلية هو أسلوب مهم ينطبق على عدد من الأنسجة ذبابة الفاكهة المستخدمة كنماذج للتحقيق في مواضيع مثل مواصفات المحور، تمايز الخلايا وتوالد 1. إعداد الصحيح للنماذج تجريبية هي الحاسمة، وغالبا ما تهمل، خطوة. الهدف من إعداد هو التأكد من ملاءمة الفسيولوجية وإلى إيجاد ظروف التصوير المثلى. للمحافظة على سلامة الأنسجة، وهذا أمر بالغ الأهمية لتجنب، نقص الأكسجة الجفاف، وتدهور أو ارتفاع درجة حرارة متوسطة 2. غرفة البيض ذبابة الفاكهة هو نظام راسخ لدراسة المسائل ذات الصلة، ولكن ليس على سبيل الحصر، إلى تنميط الجسم، وتوطين مرنا وتنظيم هيكل الخلية 3،4. بالنسبة لغرف البيض في وقت مبكر، ومنتصف المسرح، وتصاعد في الهالوكربون النفط هو جيد للبقاء على قيد الحياة لأنه يتيح نشر خالية من الأكسجين، ويمنع الجفاف ونقص الأكسجة ولها خصائص بصرية رائعة للفحص المجهري. ايمالشيخوخة من البروتينات الفلورية هو ممكن من خلال إدخال الجينات المحورة في غرفة البيض أو حقن المادية من الحمض النووي الريبي وصفت، والبروتين أو الأجسام المضادة 5-7. على سبيل المثال، إضافة إلى البنى MS2 جينوم الحيوانات يتيح مراقبة الوقت الحقيقي من mRNAs في البويضة 8. هذه التركيبات تسمح في وضع العلامات المجراة من مرنا من خلال الاستفادة من التفاعل MS2 الحمض النووي الريبي عاثية حلقة الجذعية مع بروتين معطف 9 منه. هنا، نقدم لبروتوكول لاستخراج المبيض وكذلك عزل ovarioles الفردية والغرف البويضة من ذبابة الفاكهة من الإناث. للحصول على وصف مفصل من الكرسي ذبابة الفاكهة oogenesis Spradling جيم ألان (1993، طبعة 2009) 10.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

و<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; غرفة البيض هو نموذج ممتاز لدراسة آليات توطين مرنا. من أجل التقاط أحداث الحيوية التي ترتكز عليها عمليات التعريب، مطلوب السريع التصوير عالية الدقة من الأنسجة الحية. هنا، نقدم بروتوكول للتشريح والتصوير من عينات حية بأقل قدر من الانقطاع.

إعداد فردية ذبابة الفاكهة البيض غرف للتصوير لايف

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

يعيش التصوير للهجرة الخلايا الدبقية في القرص العين تخيلي ذبابة الفاكهة

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

الحصاد وإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لتسجيل الكهربية وغيرها من الإجراءات

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

جرحشاعثزرحشرتاد الإسفار عن التصوير المقطعي في الجسم الحي. تصوير النامية ذبابة الفاكهة</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

يعيش تصوير ذبابة الفاكهة السوداء البطن هجرات كرية دموية الجنينية

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

يعيش التصوير في القدرة على الحركة والهيكل الخلوي أكتين خلية من الخلايا العصبية الفردية والخلايا العصبية في الأجنة كريست اسماك الزرد

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

إعداد وتطوير الكبار ذبابة الفاكهة الأمخاخ والشبكية للتصوير لايف

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

يعيش التصوير من البروتينات التي تحمل علامات GFP في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; البويضات

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

يعيش التصوير من تخليص الخلية أفكارك أثناء<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...